Введение к работе
Актуальность темы. Изучение механизмов экспрессии генетической информации является одним из основних направлений молекулярной биологии. Первый этап этого процесса - транскрипция - осуществляется ДНК-зависимыми РНК-полимеразами (Chamberlin, 1974). On-, ределенне роли различных субъединиц в составе РНК- полимеразы, выявление ее структурно-функциональной организации, а также изучение механизмов транскрипции являются взаимосвязанными задачами, имеющими большое значение в понимании экспрессии генов. Одним из подходов к решению этих задач является получение мутаций в генах субъединиц РНК-полимеразы и подробное изучение возникших нарушений транскрипционного цикла. Наиболее информативными представляются мутации, нарушающие лишь одну из функций фермента или затрагивающие лишь одну стадию транскрипционного цикла, то есть вызывающие мутационное расчленение транскрипционного цикла.
Настоящая работа посвящена исследованию структуры и функции О- и о'- субъединиц РНК-полимеразы Escherichia coll с помощью направленных мутаций. Мутагенез осуществляли в эволюционно консервативных областях этих субъединиц, так как считается, что такие области имеют наибольшую функциональную и структурную значимость. Кроме того, в данной работе осуществляли разделение стадий транскрипционного цикла с помощью иммобилизованной РНК-полимеразы.
В работе ставились следующие задачи. Получить и охарактеризовать мутации в эволюционно консервативной области С гроБ-гена и в эволюционно консервативной области D rpoC-гена РНК-полимеразы Escherichia coll. Определить нарушения транскрипционного цикла мутантних полимераз. изучить свойства элонгационного комплекса в транскрипционных системах in vitro.
Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые получена и биохимически охарактеризована направленная мутация гроВ-гена, дестабилизирующая промоторный комплекс РНК-полимера-
эы. Получена мутация rpoO-гена, полностью блокирующая образование фосфодиэфирной связи. Изучены факторы, определяющие стабильность коротких РНК в составе эдонгационного комплекса, и исследована зависимость эффективности шірофоефоролпзн фоефодизфирпой связи последнего и предпоследнего нуклеотидон ГНК от природи 3'-' концевого нуклеотида.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсужде-ния, выводов, списка литературы. Диссертация наложена на страницах машинописного текста, включая таблиц и рисунков. Библиографии включает в себя названий, в тон числе русских и иностранных.