Введение к работе
Актуальность проблеш. Сравнительно недавно в самых разных клетках и таанпх были вдонтифицированн представители нового класса Са2+ -. связывающих' белков, впоследствии получивших' название "аннексины". Отличительной чертой белков етого класса является их способность в присутствии микромолярных концентраций Са связываться с фосфэлипидныш бислаяш, а при более высоких концентрациях иона индуцировать агрегацию природных и модельных мембран скіее. 1983; Мэлъгунов, 1990).
Обычно концентрация ионов Са в клетке находится на субмикромолярном или микромолярноа уровне. В то ке время концентрация ионов других металлов в клетке иояет намного прешшать концентрацию ионов Са . В связи с этим .участки связывания Са должны соответствовать даун требования).!: они долгзш обеспечивать избирательность связывания иона-субстрата и одновременно исключать конкурирующие ионы, присутствующие в гораздо более высокой концентрации. Поэтому, исследования по возможности замены ионов Са на ионы других двухвалентных металлов представляются весьма актуальными при решении вопроса о необходимости именно конов Са для взаимодействия аннексшюв с мембранами.
Аннексины связывается исключительно с кислыми фосфолипидами, преимущественно находящимися во внутреннем монослое липидного бислоя. Такая ассимегрия в связывании аннексинов с биологическими 'мембранами мокет иметь принципиальное значение для выполнения этими белками физиологических функций. Выяснение закономерностей связывания белков о фосфолипидами представляется полезным для установления возможной физиологической роли аннексинов. Кроме того, определенный вклад в . решение указанной проблемы монет внести: I) изучение распространения аннексинов в ранее нэ исследованных объектах, например, в рвзлич -ных тканях кролика, и 2) установление корреляции меаду экспрессией индивидуальных аннексшюв и их'функцией в той или иной ткани.
Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось:
1) изучение распространения аннексинов в различных тканях кролика,
2) идентифжация выявленных белков, 3) исследование их
взаимодействия с фосфолипидами и ионами двухвалентных металлов. В
связи с этим были поставлены следующие экспериментальные задачи:
1) выделить аннексияы из соответствующих органов и тканей кролика;
2) идентифицировать выделенные белки: выявить представителей
семейства аннексинов и установить их групповую принадлежность;
3) доследовать влияние состава липосом на способность аннексиноіі
связываться с ними в присутствии ионов Са2+; 4) изучить влияние
ионов различных, двухвалентных металлов на связывание аннексинов с
липосомами, приготовленными из азолектина II-S сои, и на
индуцируемую аннексинама агрегацию ляпасом.
Научная новизна работы. В настоящей работе впервые проведено систематическое сравнительное изучение аннексинов, присутствующих в различных тканях кролика. Предложен метод, прзволящий быстро идентифицировать аннэксины на двумерных э^ектрофореграммах. Впервые исследовано взаимодействие с фосфолипиднымя везикулами не индивидуальных аннексинов, а сулмарной фракции белков, выделяемой из печени кролика. Кроме того, изучено влияние на ато взаимодействие различных ионов двухвалентных мэталлов. При втом установлено, что аннексикы, относящиеся к разы группам семейства, конкурируют друг с другом за участки связывания на лидасомах, а аго,- в свою очередь, влияет на степень агрегации липосом.
Практическая ценность работы. Результаты работы могут быть использованы в фундаментальных исследованиях при изучении строения и специфичности металл / фосфолилид - связывающих центров аннексинов, а такие в прикладных исследованиях, посвященных установлению роли аннексинов в явлениях свертывания крови, противовоспалительных процессах, передаче сигнала и т.п.
Апробация работа. Результаты работы были представлены на И-ом Всесоюзном симпозиуме "Теоретические и прикладные аспекты молекулярной биологии" (Самарканд, 1991) и на 1-ом съезда физиологов Средней Азии и Казахстана (Душанбе, 1991). Работа прошла апробацию на кафедра молекулярной биологии Биологического факультета МТУ им. М.В. Ломоносова.
Публикации. По материалам диссертации опубликована I статья и тезисы двух сообщений.
Структура в объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов и их обсуждения, выводов и списка цитированной литературы, включающего наименований. Работа
изложена на страницах машинописного текста, содержит 17 ри -сунков и 7.таблиц.