Введение к работе
Актуальность проблемы. Вот уже более пятнадцати лет во всём мире ведутся интенсивные исследования, связанные с изучением вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), являющегося этиологическим агентом синдрома приобретённого иммунодифицита человека (СПИД), заболевания, до сих пор остающегося неизлечимым. Вместе с тем, только в последнее время были получены данные, свидетельствующие о высокой репликативной активности ВИЧ в инфицированном организме в течении всего инфекционного процесса, включая ассимптоматическую стадию, при этом миллиарды вирусных частиц образуются и уішчтожаются ежедневно. Заметим, что получение таких данных стало возможным только благодаря развитию современных высокочувствительных технологий с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), основанной на детекции вирусного генетического материала. Изучение и оценка репликативной активности ВИЧ, определяемой количеством вирус-специфических ДНК и РНК, позволяет прогнозировать развитие инфекции и, что самое важное, получать наиболее достоверную информацию об эффективности применяемой терапии и механизме действия лекарственных препаратов. Несомненно, что мониторинг на генетическом уровне является одним из наиболее перспективных направлений как в молекулярной биологии ретровирусов, так и непосредственно в работе по профилактике и лечению СПИДа.
Цель и задачи настоящей работы - изучение репликации ВИЧ in vitro (в различных клеточных системах) и in vivo (в оргаїшзме ВИЧ-инфицированных лиц) путём мониторинга инфекции на генетическом уровне. В связи с этим были поставлены следующие экспериментальные задачи:
разработать метод количественного определения вирус-специфических ДНК и РНК. Оценить применимость данного метода а) в модельных клеточных системах репродукции ВИЧ; б) на клшпиеском материале, полученном от ВИЧ-инфицированных лиц;
изучить репликативную активность различных изолятов ВИЧ, в том числе обладающих AZT-резистентным фенотипом;
исследовать влияние химиопрепаратов на вирусную репликацию в культуре ВИЧ-инфицированных клеток; оцешпъ перспективность использования комбинированного действия препаратов дія AZT-резистентных штаммов ВИЧ;
изучить возможность индукции провируса ВИЧ в условиях теплового шока.
Научная новизна и практическая ценность работы. В настоящей работе предложена оригинальная модификация метода количественной оценки содержания вирус-специфических ДНК и РНК. Продемонстрирована универсальность её использования как для изучения репликации ВИЧ в культуре клеток, так и для оценки эффективности антивирусной терапии у ВИЧ-инфицированных лиц. Впервые показана амплификация провируса ВИЧ в условиях теплового шока. Практическая значимость работы определяется актуальностью задач по терапии и профилактики ВИЧ-инфекции и СПИДа.
Публикации и апробация работы. По теме диссертации опубликованы 3 статьи. Материалы работы представлены на Ш, IV, V международных конференциях «СПИД, рак, родственные проблемы» (Санкт-Петербург, 1995, 1996, 1997), на 10-м Вирусологическом Конгрессе (Иерусалим, 1996), на Пом Международном Конгрессе по СПИД (Ванкувер, Канада, 1996). При поддержке благотворительного Фонда «ВИЧ-Огонёк-АнтиСпид» разработанный наші метод количественной оценки вирус-специфических нуклеиновых кислот был апробирован и внедрён в медицинскую практику на базе РДКБ («Покрова Божией Матери») г.Москва.
Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введеїшя, литературного обзора, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 125 стр. машинописного текста, экспериментальные данные представлены на 26 рисунках, 10 таблицах.