Содержание к диссертации
ВВЕДЕНИЕ 5
1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1.Полиморфные маркеры 8
1.1.1.Типы полиморфизмов и методы их исследования 8
1.1.2.Использование полиморфных маркеров в иссле
довании генетики мультифакторных заболеваний 15
1.2.Сахарный диабет типа 1 (СД типа 1) 18
1.2.1.Общая характеристика заболевания 18
1.2.2.Вклад генетических и негенетических факторов в
развитие сахарного диабета 1-го типа 21
1.2.3.Общая характеристика диабетических ангиопатии 25
1.2.4.Диабетическая нейропатия 27
1.2.4.1.Генетические факторы в патогенезе
диабетической полинейропатии 31
1.3.Характеристика исследованных в работе генов
и полиморфных маркеров 35
1.3.1. Гены липидного обмена 35
-
Ген аполипопротеина Е (АРОЕ) 35
-
Ген аполипопротеина В (АРОВ) 40
1.3.2. Ген белка супрессора раковых опухолей (ТР53) 44
1.3.3.Ген параоксоназы-1 (PON1) 47
1.3.4.Генпараоксоназы-2 (РОЛ/2) 51
2.МАТЕРИАПЫ И МЕТОДЫ 53
2.1.Реактивы и ферменты 53
2.2.Буферные растворы 53
2.3.Формирование групп больных и здоровых индивидов 54
2.4.Выделение геномной ДНК 54
2.5.Амплификация ДНК 55
2.6.Расщепление продуктов амплификации рестриктазами 56
2.7.Электрофоретическое разделение ДНК 57
2.8.Статистическая обработка результатов 58
2.8.2.Сравнение выборок по частотам аллелей и генотипов.
Точный критерий Фишера. Поправка Бонферрони 58
2.8.3.0ценка относительного риска. Odds ratio.
Доверительный интервал 60
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ 61
3.1.Общая характеристика исследованных групп 61
3.2.Иследование ассоциации полиморфных
маркеров геновкандидатов с ДПН при СД типа 1.. 63
3.2.1.Иследование ассоциации полиморфных маркеров
Є(-186)Т\лє2/єЗ/є4 гена АРОЕ 63
3.2.2.Исследование ассоциации полиморфного маркера
\Ю гена АРОВ с ДПН при СДтипа 1 68
3.2.3.Исследование ассоциации полиморфного маркера
Рго72Агд гена ТР53 с ДПН при СД типа 1 70
3.2.4.Исследование ассоциации полиморфных маркеров
Leu55Met и Gln192Arg гена PON1 с ДПН при СД типа 1.....73 3.2.5.Исследование ассоциации полиморфных маркеров
Ala148Gly и Cys311Ser гена PON2 с ДПН при СД типа 1 ...77
Заключение 80
4.ВЫВОДЫ 82
5.Список литературы 83
Введение к работе
Исследование молекулярно - генетических основ многофакторных заболеваний относится к одной из наиболее серьезных задач современной генетики.
Поздние осложнения сахарного диабета являются основной причиной инвалидизации и смертности в развитых странах, представляя собой не только глобальную медицинскую, но и социально-экономическую проблему.
Для многофакторных заболеваний характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды. Однако для каждого конкретного заболевания можно выделить группу, так называемых генов-кандидатов, продукты которых могут быть прямо или косвенно вовлечены в развитие данной патологии.
Одним из наиболее перспективных направлений в современной молекулярной генетике заболеваний является поиск полиморфных маркеров в генах-кандидатах и выявление их ассоциации с наследственными заболеваниями.
При исследовании ассоциации сравнивают распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера, расположенного внутри или рядом с геном-кандидатом, в группах больных и здоровых доноров. Наличие достоверных различий в распределении свидетельствует об ассоциации полиморфного маркера с заболеванием.
Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии и ее осложнении в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента.
Цели и задачи работы
Целью данной работы явилось изучение ассоциации полиморфных маркеров нескольких генов-кандидатов, кодирующих аполипопротеин В (АРОВ), аполипопротеин Е (АРОЕ), ген апоптоза (ТР53), параоксоназу-1 (РОЛ/7) и параоксоназу-2 (PON2). Предполагается, что продукты этих генов вовлечены в патогенез сосудистых осложнений диабета. В настоящей работе исследована ассоциация полиморфных маркеров данных генов с развитием диабетической полинейропатии при сахарном диабете типа 1.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров I/D гена АРОВ и G(-186)T, є2/єЗ/є4 гена АРОЕ в группах больных с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1.
Изучить распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров Leu55Met и Gln192Arg гена PON1 в группах больных с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1
Изучить распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров Ala148Gly и Cys311Ser гена PON2 в группах больных с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1.
Изучить распределение аллелей и генотипов маркера Рго72Агд гена ТР53 в группах больных с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1.
5. Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованной выборке для выявления ассоциации изученных маркеров с развитием заболевания и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии.
Научная новизна и практическая значимость работы
В данной работе впервые изучена ассоциация полиморфных маркеров генов АРОЕ, PON1, PON2 и ТР53 с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1 у русских пациентов г. Москвы. Впервые показана ассоциация полиморфного маркера I/D гена АРОВ и ассоциация полиморфного маркета Рго72Агд гена ТР53 с развитием диабетической полинейропатии при сахарном диабете типа 1 у русских пациентов г. Москвы.
Для полиморфного маркера I/D гена АРОВ показано, что аллель / и генотип /// являются факторами риска развития диабетической полинейропатии у русских пациентов г. Москвы.
Для полиморфного маркера Рго72Агд гена ТР53 показано, что риск развития патологии связан с носительством аллеля Pro и генотипа Pro/Pro. Аллель Агд, напротив, ассоциирован с пониженным риском развития диабетической полинейропатии, так же как и генотип Агд/Агд.
Полученные результаты позволяют оценить вклад генетических факторов риска в развитие диабетических ангиопатий для московской популяции и могут быть использованы для прогнозирования течения и профилактики осложнений данных заболеваний.
