Введение к работе
І
.' '*"' І..
. Чл'л . і
~ * "Дуальность теш. Архебактерий представляют собой обособленную группу кивых организмов, равную по статусу эуСактериям и эука-риотам. Общие принципа организации и экспрессии генетического материала у этих организмов сходны с представителями двух других групп, однако архебактерии обладают и уникальными молекулярно-биологическкми особенностями. В то время как молекулярная биология эубактерий и эукариот исследованы достаточно подробно, принципы структурной организации и функционирования генома архебактерий практически неизвестны. Без выяснения этих принципов, невозможно составить полную и объективную картину становления и эволюции генома, фундаментальных законов его зкоірзссии, работы аппаратов репликации, транскрипции и трансляции в клетках живых'организмов.
Изучение архебактерий представляет особый интерес еще и потому, что подавляющее большинство представителей этой группы обитают в экстремальных условиях: при высоких температурах, при низких значениях рН, в насыщенных солевых растворах. Изучение механизмов адаптации как клеточных молекул, так и надмолекулярных комплексов к экстремальным условиям окружающей среды может пролить свет на фундаментальные принципы, лежащие в основе формирования структур биомолекул.
Галофильныэ архебактерий являются одной из наиболее интересных архебактериалышх групп, так как обитают в высокосолевых растворах (до 4,5 М Naci) я яри этом имеют столь же высокую внутриклеточную концентрацию ксі, что определяет уникальную структуру Оиомолекул в клетках этих организмов. Кроме того, клетки ряда га-лобактерий содержат уникальный хроматофор бахтериородопсин, представляющий собой светочувствительный протонный насос, за счет работы которого возникает мембранный потенциал, используемый для синтеза АТФ.
Однако на настоящий момент информация о молекулярно-биологических особенностях галобахтерий, как и других представителей архебактерий, крайне фрагментарна. Одной из основных причин этого до самого последнего времени было отсутствие векторных систем для архебактерий.
t Цальа даішон работы было конструирование вектора для экстремально ГаЛОфИЛЬНОЙ арХебаКТерЯИ Ha-lobacterium НаІоЬІшл ИВ ОСНОВЄ
мутантного ояэрона рРНК этого организма, кодирушего устойчивость к ингибиторам белкового синтеза -. аниэомицину 'и тдастрептону. Одной из основных задач настоящей работы была проверка выдвинутого нами
ПрвДООЛОЖвНИЯ О ПРИСУТСТВИЙ В раЙОНв уНИКаЛЬНОГО В ГеНОМв fib.halo-
ьііяі оперона рРНН автономно реплицирующейся последовательности. В связи с тем, что это предположение") в значительной степени подтвер-. далось, существенная часть работы посвящена картированию нуклео-тидной последовательности, способной стабилизировать наследование содержащих ее плазмид в галобактериалъной клетке.
Научная новизна и практическая ценность работы; Б работе
Впервые ПОЛуЧСН ЧеЛНОЧНЫЙ Вектор ДЛЯ КЛеТОК Sb.halablum. И E.coll,
содержащий в качества селективного маркера мутантний одарон рРНК Hb.haiabtum. Впервые ь геноме архебактерии локализованы хромосомные последовательности, стабилизирующие наследование содержащих, их шіазммд. Показано, что этим свойством обладают различные нешре-крыващиеся между собой райони промоторной области уникального
ОПерОНа рРИК Eb.halobtum.
Сконструирован ряд челночных векторных систем для галобакте-раи ub.haiobium, представляющих собой удобные модели для исследования регуляции экспрессии генов рРНК этого организма. Созданные векторные системы могут быть использованы в качестве основы при конструировании более совершенных векторных систем для галофилъшх архебактерии.
Структура и объем диссертации; Диссертационная работа содержит следующие разделы: введение, обзор литературы (посвяіден особенностям структуры и организации генетического материала галофилъных архебактерии), экспериментальная часть (материалы и метода), результаты и их обсуждение, выводы и список цитированной литературы (210 ссылок). Работу иллюстрируют 23 рисунка и 2 таблицы. Общий объем диссертации 156 страниц.