Введение к работе
Актуальность проблемы. Исследования в области строзния генома шрусов являются в настоящее время одними '.із наиболее быстро іазвимящихсл и значимых в современной вирусологии. Неослабевающий інтерес к вирусам объясняемся несколькими причинами. Во-первых, іазмножение вируса - модель развития клетки, так как оно :опровождгятся последовательным зыражением генов и сборкой іакромолекул з упорядоченные структуры. Во-вторых, вирусы - источник ірєдставлений об эволюционных процессах и молекулярных аспектах ;заикоотношений типа "хозяин - паразит". Кроме того, зная в тонкостях" труктуру генома того или иного вируса и установив функциональную начимость белков кодируемых вирусным геномом, мокно вести поиск новых утей борьбы с вирусными инфекциями.
К числу наименее изученных с точки зрения структуры генома ярусов растений до недавнего времени относилась и довольно ногочисленная группа карлавирусов - палочковидных вирусов с дноцепочечной кодирующей ( плюс-цепью) РНК.
В связи с тем, что карлавирусы зачастую вызывают латентную (т.е. ессимптомную) инфекцию и растение-хозяин представляет, собой скрытый сточник инфекции - борьба с ними имеет большое экономическое начение, поскольку своим кумулятивным действием они наносят начительный ущерб пасленовым, бобовым и луковичным растениям. Поэтому ^следование строения и экспрессии генома карлавирусов имеет не только эоретическое, но и практическое значение.
Темой данной работы явилось исследование общей структуры генома зрлавирусоЕ на примере двух представителей этой группы - Н вируса артофеля (МВК) и В вируса хризантемы (ВВХ).
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было іределение полной нуклеотидной последовательности геномной РНК МВК и ютяженного З'-концевого района геномной РНК ВВХ. Были поставлены іедующие задачи:
получение библиотеки бактериальных клонов, содержащих lHK-копии геномных РНК МВК и ВВХ;
отбор клонов, содержащих кДНК-вставки соответствующие концевой области геномной РНК МВК;
отбор клонов, содержащих кДНК-вставки соответствующие концевой области геномной РНК ВВХ;
- определение последовательности нуклеогидов кДНК-вставок в
отобранных клонах;
анализ нуклеотидных и возможных регуляторних последовательностей РНК КЗК и ВВХ, а также аминокислотных последовательностей белков, кодируемых протяженными открытыми рамками считывания (ОРС) ;
Научная новизна работы. В работе впервые определена полная нуклеотидная последовательность геномной РНК карлавируса - НВК, а также протяженного З'-концевого района геномной РНК ВЗХ. Рассмотрены основные принципы организации генома карлавирусов в сравнении с рядом других фитовируссв с положительным РНК-геномом. Обсуждены характерные особенности и возможные функции белков, кодируемых карлавирусами, а также возможные механизмы экспрессии их З'-концевых цистронов.
Практическая ценность работы. ' Получена плазмида pCV3-CP, содержащая ген белка оболочки ВВХ, которая может быть использована для создания трансгенных растений хризантем, экслрессирующих белок оболочки ВВХ, что должно придать растениям устойчивость к этому вирусу. Возможность создания таких растений подтверждается на примере экспериментов с другими вирусами ряда зарубежных исследователей. Кроме того, получен ряд ллазмид pQE/LVB-CPl, 4, 7 и 12, позволяющих экспрессировать белок оболочки ВВХ в клетках Escherichia соїї. Эти конструкции планируется использовать для получения антител к белку оболочки ВВХ.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Конференциях молодых ученых и специалистов ВНИИСБ в 1989-1990 гг., на VIII Международном Вирусологическом Конгрессе (Берлин, август 1990), на Всесоюзной Конференции "Микробиологические и биотехнологическж основы интенсификации растениеводства и кормопроизводства" (Алма-Ата, октябрь 1990) и на школе FEBS "Геном вирусов растений: структура і экспрессия" (Рига, май 1991).
Публикации. Основные результаты диссертации отражены в семі печатных работах, список которых приводится в конце автореферата.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит и; введения, глав "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результаты их обсуждение", заключения, выводов и списка использование литературы, включающего библиографических ссылок. Работа изложен на страницах машинописного текста, включая Z таблицы и 2 рисунков.