Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМИ. Вирус осповакцины (ВОВ) признан в юследнее десятилетие наиболее перспективным вектором для экс-:рессии чужеродной генетической информации с целью создания на го основе рекомбинантных вакцин. Особую практическую значимость этой связи имеют исследования , направленные на структур-о-фуикциональный анализ его генома с целья вьнвления в нем яаи-олее эффективных мест встройки чужеродной генетической информа-ии. Перспективными с этой' точки зрения рассматривается гены по-ерхностных структурных белков ВОВ, поскольку в этой случае возмол-а встройка чужеродных иммуногенов непосредственно в состав зре-ого вириояа. Кроме того, картирование генов структурных белков ОВ на вирусном геноме, определение их первичной структуры, яолу-еяие бактериальных продуцентов, существенным образоы изменит си-. уацию в изучении самих этих белков. - .
В состав оболочки ВОВ штамма Л-ИЕП входит 6 нагорных яоли-ептидов: р12, р19» р20, р35, р42 и р61. Среди них с достаточной остоверностью картирован в настоящее время только белок р35.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Проведение трансляционного анализа рестрикцион-ьа фрагментов ДНК ВОВ отакма Л-ШІ с последутмяей иммунохимичес-ой идентификацией продуктов трансляции моноспецифическими аяти-ыворотками к основным белкам оболочки. Получение бактериальных родуцвнгов белков, кодируемых генами BOB 9К и 15 и последуттая центификация еоответетвуюва им вирусных белков. Картирования эноз структурных белков рі2, р20, р42 и pSO ВОВ игаммз Л:ЙЕП
-.3-
ЗАДАЧИ РАБОТЫ включали:
-
Трансляционный анализ Hindi11-Е,F,С, J, I,H,K,L,M,0,P »4,L,-фрагментов, а также левого'Hind HI-A-Sal-фрагмента pa змером 2500 п. я. ДНК. ЮВ штамма Л-ИВП
-
Иммунохамтееский анализ продуктов трансляции мРНК гибридизуюшихся с левым Hind Ш-А-Sal-фрагментом ДКК
-
Клонирование гена SK из Hind 111-A-фрагыента и ген 15 из Hir.d П 1-І-. Фрагмента ДНК в акспреесирувдих бактерії алькых векторах.
-
ІЬлтчєяие специфических ангисызороток к продукта рксчреесии клонированных в . coli генов.
3- Идентификация вирионных белков, взаимодействуя;-.,.,.,, аытисыпорсткаш к продуктам экспрессии генов 15 и 9К
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Проведен трансляционный анализ рестрикцией цьз фрагментов ДНИ EOS штамма Л-ИВП, перекрывающих 70% вирусног' генома. Проведен иымуиохимический анализ продуктов озсклетошю грансляции отселектированяых мйй с антисьтсроткаии к белкам обо дочки вириояа Проведено субклоиироваияе открытых рамок трансля цяй генов Зй к 15 ДНК ЮН Яэлученн клони Е. сої і, зкепресеирукэд белковые продукты генов 9К и 15 в составе химерных иолипептидов. Дроведела ямиунохимическач- идентификация соответствуэдихгенам 3 я 15 вирусных белков. Проведено картирование генов структурны Сэлкся р12, р20, р4 и рЯО вируса осповакцяны.
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ. Сконструированные в данной рл боте плазшды кзгут быть использованы в качестве потенциальны векторов для интеграции в геяом ЮВ чужеродной генетической ин Формации. Созданные бактериальные продуценты вирусных белков лоз геллкт арсасдить исглэдогания физико-химических и нммунохикичес
лх свойств этих ОежоЕ. Полученные в работе антисыворотки могут уть использованы для изучения антигенов как других шгашов В0, ак и воовше поксвирусов. Проведенный трансляционный анализ ганома ЭВ штамма л-ИВП может служить основой для ласьнейиего кзртирсвЕ-кя генов структурных белков вкриока.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Ш материалам диссертации опубликовано 3 гатьи. Работа доложена на конференции "Мэлекуляряая биология-йК-содеряашх вирусов"! Киев, 1990г.:.
СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертационная работа изложена на 106 границах машинописного текста я состоит из введения, обзора хи-ературы, описания методов исследования, трех разделов с кзложе-ием результатов исследования, вызолов и списка использованной итературы (119 источников). Диссертация содержит 20 рисунков.