Введение к работе
Актуальность тека .Трипсиноподобние феркенш из беспозвоночных давно известии, но изучена гораздо менее подробно, чей гомологичные трипсину сериновые протеиназы из млекопнтавзих, и кх специфические свойства такпе ивнэъ подробно определены. Скорее всего, трипсини из- беспозвоночных, пак и панкреатические сериновие протеинази млекопитающих, участвуят 8 пищеварении, а не «ортогенезе. Крабовые протеинази из камчатского краба Paralithodes caatschatica к краба-стригуна Chlonoecetes opilio - это ферменты с й.ы. от 23 до 36 кВа, протеази, гидролизукцие пнроккн. спектр синтетических и природных белковых субстратов. К току се, Серьеяти из крабов обладапт коллагенолятической активностью, расцепляя натизниД коллаге!! при физиологических условиях рН. t к ионной силі!, и явлаптса. по су7и. представителями нозой группы коллаге-наз.
Исследования структура, свойстс зтих фернентов, являвшихся представителями малоизученной группа тркпсинав беспозвоночных (по Н-конце-выа посяедователькостяа 9 осряеитов кз ІЗ, исследованных нами, относятся it тркпсииоподобным) вазгш для понимания связи структура ферментов с ик уункцкяии, а такзе путеЯ приобретения фермеитаин новах дикций в процесса зволпци::. Наличие коллагенолнтических активностей у фериен-тоз из крабов Paralithodes caatschatica и Chionoecetes opilio и сравнительная простота методов их получения делапт возаойнни их внро-. кое применение в практике - в аедицине, лицевой и фармацевтической прогшзлениости, в биотехнологии.
Т.о., разработка истодов получения ферментов из промислових крабов и изучение свойств зтих ферментов вавнн для ревения ряда как Фундаментальных, так и практических задач современной молекулярной биологии.
Цель работа. Цельв данной работн являлась разработка простого и xoposo воспроизводимого в прокывленннх наентабах нетода получения коа-плексоа коллагеиолитическях феркентов кз гепатопанкреасов крабов, разделение комплексов на индивидуальные компонента и сравнительное изучение природи п свойств этих компонентов»
Научная новизна. Проведеннке исследования позволили разработать метод зыделениа и очистки комплексов коллагенолити-ческих ферментов из гепатопанкреасов камчатского краба Paralithodes caitschatica и краба-стригуна Chionoecetes opilio, разделать их на индивидуальные кои-
- 2 -поненти и охарактеризовать по ряду свойств: Н-концевыи последовательностям, нолекулярным нассаы, t- к рН-зависииости и стабильности, активностям по отновешга к ряду синтетических и природных субстратов, отношение к ингибиторам и т.д. В настоящей работе выделены, очичены и охарактеризована по ряду свойств 13 ферментов ,9 из которых по fi-кон-цевыа последовательностям относятся к мало изученной группе трилсило-подобных ферментов из беспозвоночных. 2 имеют уникальные К-концевые последовательности, а один -с М.и. 23 кОа - является вторыа представителем новой группы иеталлопротеиназ. Все полученные фериентн гидроли-зувт аирокий спектр белковых и синтетических субстратов, в том числе, нативныЯ коллаген, причем 2 фермента из 13 ииевт коллагенолитические активности сыне, чем "истинные" коллагеназы из Cl.histolyticim.
Практическая значимость. Разработан метод получения комплексов кол-лагенолитических ферментов из гепатопанкреасов камчатского краба Paralithodes caatscliatica и краба-стригуна Chionoecetes оріПо, не со-дераацих токсических и пирогенних приыесей, на 90-95Z состоящих из белков, применявшихся в медицине, пищевой и фармацевтической промыи-лешюстн, в биотехнологии под фирменная назвакиеы "Dicestase". Этот препарат охарактеризован по ряду свойств: составу индивидуальных компонентов, стабильности и т.д., что позволило дать практические реко-вендациа по его применения.
Структура работы. Диссертация построена по стандартному плану и состоит из разделов: "Введение", "Обзор литературы", "Материалы и методы", "Результаты и обсуждение", "Заклвчение", "Выводы", "Список использованной литература".