Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Применение силиконового масла для тампонады витреальной полости в хирургическом лечении отслоек сетчатки 12
1.2. Применение перфторорганических соединений для тампонады витреальной полости 23
1.3. Эффективность тампонады витреальной полости в хирургическом лечении отслоек сетчатки 32
Глава 2. Материал и методы 36
2.1. Исследование физико-химических свойств комбинации перфтордекалина и силиконового масла в эксперименте in vitro 36
2.2. Экспериментально-морфологическое исследование in vivo безопасности длительного пребывания комбинации перфтордекалина и силиконового масла в витреальной полости 39
2.3. Изучение влияния нахождения в витреальной полости комбинации перфтордекалина и силиконового масла на сетчатку методами электроретинографии и трансмиссионной электронной микроскопии в эксперименте in vivo 43
Глава 3. Математическое моделирование 48
3.1. Математическое моделирование процессов взаимодействия тампонирующих веществ с сетчаткой 48
3.2. Результаты математического моделирования для сравнительной оценки площади сетчатки, лишенной эффекта тампонады при различных методах тампонады 54
3.3. Результаты математического моделирования для оптимизации объемного соотношения перфтордекалина и силиконового масла при их одновременном использовании для тампонады витреальной полости 56
Глава 4. Экспериментальное обоснование химической безопасности и биологической инертности комбинации перфтордекалина и силиконового масла для тампонады витреальной полости и разработка хирургического этапа бинарной тампонады 59
4.1. Результаты исследования физико-химических свойств комбинации перфтордекалина и силиконового масла в эксперименте in vitro 59
4.2. Результаты разработки хирургического этапа бинарной тампонады витреальной полости 64
4.3. Результаты экспериментально-морфологического исследования in vivo безопасности длительного пребывания комбинации перфтордекалина и силиконового масла в витреальной полости 69
4.4. Результаты изучения влияния нахождения в витреальной полости комбинации перфтордекалина и силиконового масла на сетчатку методами электроретинографии и трансмиссионной электронной микроскопии в эксперименте in vivo 81
Заключение 97
Выводы 109
Основные обозначения и сокращения 110
Библиография 111
- Применение силиконового масла для тампонады витреальной полости в хирургическом лечении отслоек сетчатки
- Результаты математического моделирования для сравнительной оценки площади сетчатки, лишенной эффекта тампонады при различных методах тампонады
- Результаты разработки хирургического этапа бинарной тампонады витреальной полости
- Результаты изучения влияния нахождения в витреальной полости комбинации перфтордекалина и силиконового масла на сетчатку методами электроретинографии и трансмиссионной электронной микроскопии в эксперименте in vivo
Применение силиконового масла для тампонады витреальной полости в хирургическом лечении отслоек сетчатки
Исторически первым тампонирующим материалом, который был применен для лечения ОС, был воздух. В 1911-м году Ohm J. сообщил о двух случаях ОС, когда он ввел воздух в ВП после дренажа субретинальной жидкости [185]. Однако для лечения ОС воздух оказался неподходящим тампонирующим веществом, так как сохранялся в ВП только в течение нескольких дней [90, 163]. В начале 70-х годов удалось найти газы, лишенные этого недостатка — так называемые расширяющиеся газы [57, 186]. Расширяющимися они были названы потому, что увеличиваются в объеме за счет диффузии в них азота, кислорода и углекислого газа из окружающих тканей [90]. Впервые эндовитреальное введение расширяющегося газа для пролонгированной адаптации краев разрыва применил в 1969 г. Norton E. [183]. Автор использовал гексафторид серы (SF6) — бесцветный газ без запаха, химически и биологически инертный, примерно в 5 раз тяжелее воздуха, коэффициент расширения в полости глаза 1,9. Этот газ поддерживает полноценный тампонирующий эффект в течение недели и полностью резорбируется в среднем в течение месяца, не требуя, таким образом, хирургического удаления.
Первое упоминание о перфторуглеродных газах появились в 1973 г. В широкую офтальмологическую практику они были введены Lincoff Н. в 80-х годах [157]. Из перфторуглеродных газов применяются: перфторметан (CF4), перфторэтан (С2F6), перфторпропан (СЗF8), перфторбутан (C4F10), октафторциклобутан (C4F8) — все они не имеют цвета и запаха, химически и биологически инертны, имеют коэффициент расширения в полости глаза от 1,9 (CF4) до 5,0 (C4F10), период полувыведения от 6 до 45 суток соответственно, т.е. персистенция в полости глаза более длительная, что составляет основное преимущество перфторуглеродных газов перед гексафторидом серы [25]. Благодаря этим полезным свойствам, расширяющиеся газы нашли широкое применение в витреоретинальной хирургии. Однако, что касается лечения ОС, газовая тампонада имеет ряд недостатков. Во-первых, для формирования хориоретинальной спайки в области лазеркоагулятов требуется в среднем 3-4 недели, а создать полноценный тампонирующий эффект на столь длительный срок при помощи газов невозможно [40]. Во-вторых, так как газы легче воды, они неэффективно тампонируют ВП в нижних отделах. Если требуется тампонада в нижних отделах ВП, то пациенту приходится поддерживать очень неудобное положение головы, что не всегда выполнимо. В силу этих причин применение газо-воздушных смесей ограничено свежими ОС, так как лечение несвежих ОС при помощи газов неэффективно из-за высокой вероятности развития рецидивов ОС.
В целом, газо-воздушная тампонада широко используется для лечения свежих неосложненных отслоек сетчатки, так как сочетает в себе высокую эффективность и отсутствие необходимости проведения дополнительной операции для удаления тампонирующего вещества из ВП.
В 50-х годах внимание исследователей, искавших идеальное тампонирующее вещество, привлек полидиметилсилоксан (СМ), так как СМ обладает рядом свойств, важных для хирургической практики: оно прозрачно, химически стабильно, и имеет высокое поверхностное натяжение по отношению к водянистой влаге и сетчатке. Первое сообщение о применении СМ для тампонады ВП датируется 1958-м г., когда Stone W. и соавт. опубликовали результаты серии экспериментов по введению в ВП кроликов СМ различной вязкости [228]. СМ хорошо переносилось на протяжении двух лет. По результатам этого эксперимента автор предположил, что СМ оптимально подобранной вязкости может использоваться для тампонады ВП. В дальнейшем результаты Stone W. были подтверждены и другими исследователями. Armaly M.F. (1962) вводил СМ в стекловидное тело и переднюю камеру глаза кроликов, обезьян и кошек [58]. На протяжении 15-и месяцев наблюдений не было обнаружено каких-либо клинических или гистологических признаков воспалительных или дегенеративных изменений. Электроретинографические данные исследуемых и контрольных глаз не различались. Cibis P.A. с соавторами (1962) получили аналогичные данные в эксперименте на 38-и глазах кроликов [84]. Levine A.M. и Ellis R.A. (1963) в исследовании на кроликах не обнаружили с помощью клинических и гистологических методов сколько-нибудь существенных отличий между опытными и контрольными глазами при введении СМ в стекловидное тело [154]. Эти авторы также вводили СМ в переднюю камеру глаза, при этом через 4–8 недель после введения наблюдалось развитие дистрофии роговицы. Martola E.L. и Dohlman C.H. (1963) также вводили СМ в переднюю камеру глаза кошек и кроликов [165]. При этом наблюдалось образование преципитатов на эндотелии роговицы, развитие помутнений и язвы роговицы. Одновременно с зарубежными исследователями Захаров В.Д. и соавт. (1965) проводили экспериментальные исследования по оценке безопасности отечественного СМ для тканей глаза [16]. Авторы вводили отечественное СМ в ВП кроликов после частичного или почти полного удаления СТ, а также вводили СМ в переднюю камеру. Изучение гистологических препаратов после эндовитреального введения СМ показало отсутствие воспалительной реакции и дегенеративных изменений в глазах, энуклеированных через 3-4 недели после операции. После введения СМ в переднюю камеру наблюдалась легкая лейкоцитарная инфильтрация всех слоев роговицы, помутнений роговицы не наблюдалось. Полученные результаты свидетельствовали о хорошей переносимости тканями глаза СМ отечественного производства, что доказывало безопасность его нахождения в ВП при условии недопущения выхода в переднюю камеру глаза. Также на этапе развития силиконовой тампонады как метода лечения ОС было проведено множество работ по определению факторов негативного воздействия СМ на ткани глаза. В ряде работ [113, 179, 180] была выдвинута идея о токсичности низкомолекулярных полимерных цепей из-за их проникновения в ткани глаза. Также высказывалось предположение, что именно низкомолекулярные компоненты ответственны за эмульгацию СМ. Использование высокоочищенных СМ не исключает вероятность эмульгации, но снижает ее частоту [148, 235]. В результате была выработана практика применения в хирургии ОС высокоочищенных в отношении низкомолекулярных и содержащих гидроксильные группы компонентов СМ [148]. При этом было показано, что высокомолекулярные компоненты СМ при нахождении в глазу химически устойчивы и не претерпевают каких бы то ни было химических реакций.
В клинической практике первым применил СМ для лечения ОС Cibis P.A. в 1962-м г., а в 1965-м г. этот автор сообщил о 201-м случае применения силикона со сроками наблюдения от 1 года до 3-х лет [84, 85]. Несмотря на то, что всех случаях были прооперированы пациенты с ОС, считавшимися неоперабельными, результаты были получены вполне удовлетворительные. Улучшение зрения наступило у 96-и пациентов (47%), не было изменений остроты зрения у 45-и пациентов (22%) и ухудшение было отмечено у 26-и (13%). Также Armaly M.F. в 1962-м г. сообщал о 5-и случаях применения СМ при ОС с положительным результатом [58]. Levine A.M. и Ellis R.A. в 1963-м г. прооперировали 2-х пациентов [154]. Niesel P. и Fankhauser F. в 1964 г приводили 4 случая подобной операции [182]. Watzke R.C. (1967), применяя технику максимально полного замещения стекловидного тела СМ у 33-х пациентов, получил хорошие результаты только у 2-х пациентов, прослеженных свыше 3-х лет [239]. В 1965-м г. С.Н.Федоров и соавт. начали клиническое применение СМ для лечения ОС в России [46]. Вначале СМ предлагалось использовать как крайнюю меру в особо тяжелых случаях с плохим прогнозом. Применение силикона позволяло повысить частоту анатомического успеха лечения [85, 86, 188, 239]. Вместе с тем, отсутвовало понятие об оптимальной длительности пребывания СМ в ВП; силикон оставляли в ВП на несколько лет.
Результаты математического моделирования для сравнительной оценки площади сетчатки, лишенной эффекта тампонады при различных методах тампонады
В данном разделе работы на основе математического моделирования процессов взаимодействия тампонирующих веществ с сетчаткой проведено сравнение площади сетчатки, лишенной эффекта тампонады в случае использования комбинации ПФД и СМ и в случае тампонады "легким" либо "тяжелым" СМ при прочих равных условиях.
Рисунок 5 демонстрирует форму, которую принимают тампонирующие вещества при тампонаде ВП: согласно уравнениям рассчитаны формы менисков —границ раздела веществ. Видно, что выпуклая форма мениска при тампонаде СМ значительно увеличивает площадь нетампонированной части сетчатки по сравнению со случаем прямого мениска при бинарной тампонаде. То же видно на Рисунке 6.
Рассмотрение расчетной формы мениска показало преимущество бинарной тампонады по сравнению с однокомпонентной тампонадой СМ: например, при заполнении витреальной полости СМ на 95% (при толщине слоя остаточной ВГЖ 2 мм) площадь нетампонированной сетчатки составила 5,1 см2 против 3,0 см2 при такой же полноте заполнения ВП методом бинарной тампонады, как показано на Рисунке 7. Аналогичным образом численно решая уравнение для полноты заполнения витреальной полости 92%, получаем, что в случае силиконовой тампонады 6,3 см2 площади сетчатки остаются нетампонированными, а в случае бинарной тампонады 3,4 см2.
На Рисунке 8 показана зависимость площади нетампонированной сетчатки от общего процентра заполнения ВП тампонирующими компонентами и соотношения их объемов, рассчитанная с использованием вышеописанной математической модели. Хорошо видно, что с ростом количества ПФД площадь нетампонированной сетчатки незначительно сокращается (особенно малозначительна разница при высоком проценте заполнения ВП). Это объясняется высокой плотностью ПФД, благодаря которой силы гидростатического давления превалируют над силами поверхностного натяжения: мениск ПФД более плоский, чем мениск СМ, что хорошо видно на Рисунке 9, где показаны рассчетные формы менисков для различных значений соотношения объемов СМ и ПФД.
Тампонада только ПФД обладает рядом недостатков. Во-первых, есть мнение, что тампонада только ПФД может оказывать неблагоприятное воздействие на сетчатку в нижних областях глаза за счет повышенного давления [94, 225] (дополнительное гидростатическое давление в случае ПФД составляет 4 мм рт. ст., а в случае бинарной тампонады с одинаковыми объемами компонентов — только 2 мм рт. ст.). Во-вторых, в случае бинарной тампонады проще обеспечить максимально полное заполнение ВП тампонирующими агентами, поскольку области вблизи цинновой связки хрусталика и pars plana в процессе операции не видны и трудно обеспечивать аспирацию сбаласированного физиологическог раствора из этих областей при замене на ПФД. Как видно из Рисунка 8, при достаточно полном заполнении ВП тампонирующими веществами (около 90% и более) полнота заполнения является более важным фактором, чем соотношение объемов тампонирующих веществ, поэтому предпочтительным представляется соотношение объемов тампонирующих веществ примерно 1:1.
Таким образом, по результатам математического моделирования, бинарная тампонада ВП ПФД и СМ имеет преимущество по сравнению с однокомпонентной тампонадой СМ: при одинаковой полноте заполнения ВП тампонирующими веществами при использовании бинарной тампонады бОльшая площадь сетчатки оказывается снабжена тампонирующим эффектом по сравнению с силиконовой тампонадой. Оптимизация отношения объемов ПФД и СМ при бинарной тампонаде при учете всех факторов показывает, что предпочтительным является соотношение объемов тампонирующих веществ примерно 1:1.
Результаты разработки хирургического этапа бинарной тампонады витреальной полости
В данной части работы представлена разработка хирургического способа бинарной тампонады ВП, позволяющего заполнить ВП ровно наполовину ПФД и наполовину — СМ. Ставилась задача выработать воспроизводимые действия хирурга, позволяющие заполнить ВП ПФД и СМ таким образом, чтобы по окончании операции соотношение объемов этих веществ составляло 1:1.
В силу того, что длина глаза в популяции варирует, объем ВП у различных представителей популяции также неодинаков, следовательно, заранее рассчитать стандартные объемы вводимых ПФД и СМ для бинарной тампонады не представляется возможным, поэтому при разработке способа осуществления бинарной тампонады ориентировались на интраоперационную оценку соотношения ПФД и СМ в ВП во время выполнения замены ПФД на СМ.
Разработка осуществлялась в рамках хирургических операций in vivo. В исследование вошли 5 кроликов породы Шиншилла, возрастом 1 год, массой 1,5– 2,5 кг. Были прооперированы правые глаза животных, левые глаза оставались интактными.
Разработка хирургического способа бинарной тампонады витреальной полости проводилась для его последующей интеграции в последовательность преемственных этапов хирургического лечения осложненных отслоек сетчатки методом витрэктомии, тампонады витреальной полости ПФОС (ПФД), эндолазеркоагуляции и замены ПФОС (ПФД) на тампонирующую среду длительного действия — в классическом варианте на СМ, поэтому в рамках экспериментальных операций выполнялись все вышеперечисленные хирургические этапы с тем отличием, что в конце операции осуществляли дозированную замену ПФОС (ПФД) на СМ. Кролика фиксировали. Премедикацию и наркоз проводили по вышеописанной методике (см. первую серию экспериментов in vivo). Устанавливали детский векорасширитель. В 1 мм от лимба устанавливали порты 25G в верхненаружном, нижненаружном и нижневнутреннем квадрантах. Фиксировали подачу физиологического раствора. Вводили световод, витреотом и выполняли субтотальную витрэктомию. Преретинальное стекловидное тело контрастировали суспензией триамцинолона для наиболее полного удаления. Витреальную полость тампонировали ПФД аналогично полному заполнению ВП ПФД при операции в клинических условиях (Рисунок 15).
Следующим этапом осуществляли бинарную тампонаду витреальной полости. Для этого к порту в верхневнутреннем квадранте подключали подачу "легкого" СМ, а через другой порт вводили экструзионную канюлю, после чего начинали замену ПФД на СМ (Рисунок 16). Для того, чтобы обеспечить заполнение ВП наполовину ПФД, наполовину — СМ, использовался следующий специальный прием: экструзионную канюлю подводили к заднему полюсу глаза, а затем замену ПФД на СМ производили до тех пор, пока граница раздела ПФД-СМ не достигала середины длины введенной экструзионной канюли (Рисунок 17).
После этого извлекали порты, ушивали проколы склеры швами нейлон 8-00, операцию завершали субконъюнктивальной инъекцией 0,3 мл раствора гентамицина (40мг/мл) и 0,5 мл раствора дексаметазона, наложением повязки и одеванием на животное конусовидного защитного ошейника. Контроль на щелевой лампе подтверждал успешность выполнения этапа бинарной тампонады ВП: горизонтальная граница раздела ПФД и СМ определялась в просвете зрачка (Рисунок 18).
Однако, ориентируясь на середину длины канюли, не всегда удавалось достичь расположения границы раздела между ПФД и СМ в послеоперационном периоде ровно посередине зрачка, что, вероятно, было связано с трудностью зрительного определения середины длины канюли в силу неодинакового преломления света тампонирующими веществами, одновременно находящимися в ВП во время операции (ПФД, СМ).
Для преодоления указанной трудности предлагается использовать вместо обычной экструзионной канюли модифицированную экструзионную канюлю, имеющую насечки на заданном расстоянии от конца канюли (Рисунок 19).
При расчете расстояния от конца канюли, на котором должны располагаться насечки, учитывались следующие параметры: средний горизонтальный диаметр роговицы составляет 11,75мм, доступ через pars plana стандартно осуществляется в 4 мм от лимба [Вит В.В. Строение зрительной системы человека, 2010]. Геометрически выстраивая треугольник, образованный передне-задней центральной осью глаза и подведенной к заднему полюсу экструзионной канюлей, было рассчитано, что для того, чтобы канюля имела мерную насечку, разделяющую ВП на 2 равные части, насечка должна располагаться на следующем расстоянии от конца канюли: для глаза длиной 23 мм — 12,3 мм, для глаза длиной 25 мм — 13,5 мм, для глаза длиной 27 мм — 14,7 мм, для глаза длиной 29 мм — 15,8 мм. Целесообразно изготовление модифицированных экструзионных канюль, имеющих одновременно 4 насечки, с предоперационным планированием использования той насечки, которая соответствует длине глаза пациента. Выполнение замены ПФОС (ПФД) на СМ до индивидуально выбранной для пациента мерной насечки позволит обеспечить заполнение ВП ПФД и СМ в соотношении 1:1.
Указанный способ предполагает минимальную модификацию использующихся рутинным образом в витреоретинальной хирургии экструзионных канюль и не требует дополнительного обследования пациентов, так как измерение длины глаза входит в стандартный комплекс обследования пациентов с витреоретинальной патологией. Способ прост в выполнении, не удлиняет общего времени операции и не требует дополнительного обучения хирургов. Разработанный способ может быть включен в операцию хирургического лечения отслоек сетчатки, выполняемую в рамках последующих клинических исследований бинарной тампонады ВП.
Результаты изучения влияния нахождения в витреальной полости комбинации перфтордекалина и силиконового масла на сетчатку методами электроретинографии и трансмиссионной электронной микроскопии в эксперименте in vivo
Ядра клеток пигментного эпителия имели овальную форму, цитоплазма содержала множественные фаголизосомы (утилизирующие диски наружных сегментов фоторецепторов), в апикальной части клеток пигментного эпителия определялось множество осмиофильных пигментных гранул, микровиллы клеток пигментного эпителия окружали дистальные отделы наружных сегментов фоторецепторов. Способность клеток ПЭС фагоцитировать стопки дисков дистальных отделов наружных сегментов фоторецептов была сохранна, что подтверждалось картинами фагоцитоза. Между клетками ПЭС имелись плотные клеточные контакты. Мембрана Бруха сохраняла непрерывность на всем протяжении, признаков набухания мембраны Бруха не наблюдалось (Рисунок 43). Целостность цитолеммы, покрывающей наружные сегменты ФР, была сохранна. Наружные сегменты фоторецепторов состояли из параллельно расположенных двумембранных дисков, имеющих равномерно плотную упаковку. Признаков иррегулярности упаковки дисков наружных сегментов не наблюдалось. Участков с разрушенными дисками не наблюдалось (Рисунок 44).
Клетки фоторецепторов содержали большое количество митохондрий, что соответствовало их функции в связи с вовлеченностью в высокоактивных процесс фототрансдукции. Митохондрии имели обычный размер и электронную плотность митохондриального матрикса. Набухания митохондрий не наблюдалось. Участков снижения электронной плотности митохондриального матрикса не наблюдалось. Сглаживания и фрагментации крист митохондрий не отмечено. Вакуолизации канальцев эндоплазматической сети не обнаружено (Рисунок 45).
На Рисунке 44 представлены наружные сегменты фоторецепторов сетчатки интактного глаза кролика (палочки) с большим увеличением.
Ядра ФР имели характерное распределение эухроматина. Эухроматин выглядел на ультрафотографиях более светлыми зонами ядер, гетерохроматин — более электронно-плотными участками. Перераспределения эухроматина в цитоплазме не наблюдалось. Признаков кариопикноза, кариорексиса и кариолизаса не отмечалось. Участков клеточного детрита в цитоплазме не обнаружено. В некоторых ядрах в срез попадало ядрышко (Рисунок 46).
Наружные сегменты ФР были чётко различимы. Сдвоенные поперечные мембранные диски палочек были расположены стопками, отделенными от наружной плазматической мембраны. Компактность расположения дисков ФР соответствовала контрольной группе, плотность упаковки дисков была одинаковой на всём протяжении (Рисунки 47, 48). Внутренние сегменты ФР содержали большое количество митохондрий, характерное для активных ФР. Плотные контакты между митохондриями были сохранны. Структура крист митохондрий и их плотность не отличались от таковой в группе контроля (Рисунок 47, 48). Базальная мембрана клеток ПЭС чётко просматривалась, сохраняя непрерывность на всем протяжении. Клетки ПЭС располагались непрерывно в один слой, ядра клеток имели овальную форму. В апикальной части клеток ПЭС определялось множество осмиофильных пигментных гранул. Клетки ПЭС содержали фаголизосомы, утилизирующие наружные сегменты ФР.
В цитоплазме ПЭС присутствовали специфичные фагосомы, содержащие фрагменты наружных сегментов ФР. Межклеточные взаимоотношения клеток ПЭС и ФР соответствовали группе контроля: микровиллы клеток ПЭС давали характерную картину «обхватывания» наружных сегментов ФР (Рисунки 47, 48).
Митохондрии имели овальную или удлинённую форму. В митохондриях ФР как опытных, так и контрольных глаз кристы просматривались четко, располагались компактно, их структура была сохранена, изменений электронной плотности крист не наблюдалось. Наружная мембрана митохондрий сохраняла двухконтурность на всём протяжении. Митохондрии имели светлый матрикс гомогенной плотности. Между митохондриями имелись плотные контакты (Рисунки 49).
Ядра ФР были чётко различимы, имели типичную структуру, характерную для ФР: конденсированный хроматин в кариоплазме в виде крупных блоков имел зоны контакта с ядерной оболочкой, остальная кариоплазма была заполнена мелкими ядерными включениями (с РНК). В светлом матриксе кариоплазмы среди равномерной мелкой зернистости четко выделялись осмиофильные скопления эухроматина. Все ядра ФР лежали в наружном ядерном слое; смещения ядер ФР в слой наружных сегментов ФР не наблюдалось (Рисунок 50).
Наружные сегменты ФР были чётко различимы. Сдвоенные поперечные мембранные диски палочек были расположены стопками, отделенными от наружной плазматической мембраны. Компактность расположения дисков ФР соответствовала контрольной группе, плотность упаковки дисков была одинаковой на всём протяжении (Рисунки 48, 52). Внутренние сегменты ФР содержали большое количество митохондрий, характерное для активных ФР. Плотные контакты между митохондриями были сохранны. Структура крист митохондрий и их плотность не отличались от таковой в группе контроля (Рисунки 51, 52). Базальная мембрана клеток ПЭС чётко просматривалась, сохраняя непрерывность на всем протяжении. Клетки ПЭС располагались непрерывно в один слой, ядра клеток имели овальную форму. В апикальной части клеток ПЭС определялось множество осмиофильных пигментных гранул. Клетки ПЭС содержали фаголизосомы, утилизирующие наружные сегменты ФР (Рисунки 51).
В цитоплазме ПЭС присутствовали специфичные фагосомы, содержащие фрагменты наружных сегментов ФР. Межклеточные взаимоотношения клеток ПЭС и ФР соответствовали группе контроля: микровиллы клеток ПЭС давали характерную картину «обхватывания» наружных сегментов ФР (Рисунок 51).
Митохондрии имели овальную или удлинённую форму. В митохондриях ФР как опытных, так и контрольных глаз кристы просматривались четко, располагались компактно, их структура была сохранена, изменений электронной плотности крист не наблюдалось. Наружная мембрана митохондрий сохраняла двухконтурность на всём протяжении. Митохондрии имели светлый матрикс гомогенной плотности. Между митохондриями имелись плотные контакты (Рисунок 53).
Ядра ФР были чётко различимы, имели типичную структуру, характерную для ФР: конденсированный хроматин в кариоплазме в виде крупных блоков имел зоны контакта с ядерной оболочкой, остальная кариоплазма была заполнена мелкими ядерными включениями (с РНК). В светлом матриксе кариоплазмы среди равномерной мелкой зернистости четко выделялись осмиофильные скопления эухроматина. Все ядра ФР лежали в наружном ядерном слое; смещения ядер ФР в слой наружных сегментов ФР не наблюдалось (Рисунок 54).
По исследованным признакам ультраструктура ФР сетчатки и ПЭС после бинарной тампонады и после силиконовой тампонады не отличалась от ультраструктуры сетчатки интактных глаз из группы контроля. Каких-либо признаков ранних альтеративных изменений клеток не выявлено как в группе после бинарной тампонады, так и в группе после силиконовой тампонады.
Таким образом, проведенная оценка биологического действия комбинации ПФД и СМ, введенных в ВП глаз животных, показала, что клинически и гистологически не было обнаружено различий между сетчаткой опытных и контрольных глаз. На сроке наблюдения 1 месяц во всех группах сетчатка экспериментальных животных не отличалась от сетчатки интактных глаз. На сроке наблюдения 2 и 3 месяца выявлены изменения сетчатки, одинаковые как в опытных, так и в контрольных глазах. По данным ЭРГ каких-либо изменений электрической активности нейрорецепторных элементов сетчатки на сроке 1 месяц не выявлено. ТЭМ на этом сроке не выявила различий в ультраструктуре ФР и ПЭС сетчатки опытных, контрольных и интактных глаз. Согласно результатам ТЭМ, в глазах после тампонады СМ и после бинарной тампонады не найдено различий в ультраструктуре наружных и внутренних сегментов ФР: плотность упаковки дисков палочек, ультраструктура крист митохондрий и ядерного хроматина не различалась между опытными и контрольными глазами, что указывает на отсутствие разницы в отношении сетчатки между силиконовой и бинарной тампонадой.
Безопасный срок нахождения комбинации ПФД и СМ в ВП, определённый как 1 месяц по данным клинико-гистологического исследования, был подтвержден данными ЭРГ- и ТЭМ-исследований на этом сроке.