Введение к работе
Актуальность проблемы. Суперантигены оккоге::кых ретрОЕИруссз играют важную роль в жизненном цикле вируса. Известно несколько примеров, когда их функция абсолютно необходима для выживания вируса в организме, что в конечном счете приводит к трансформации клеток. Наиболее швгетеи супер&нтнген вхруса рака молочной железы (КИТУ), который является продуктом вирусного гена orf5'LTR (по новой номенклатуре - SAG-HMTV) и вызывает стимуляцию Т-лимфоцитов, от которой зависит репликация и интеграция вируса в геном В-;шмфоцитов. Это создает пермиссивные условия для вируса в организме новорожденной мыши, зараженной с молоком и не имеющей развитых тканей молочных желёз, где происходит окончательная фаза интеграции вируса, приводящая к трансформации клеток этих тканей.
Эта биологическая функция настолько важна, что существует вволюцконно закрепленный механизм защиты, от действия суперантигека - такой же суперантиген, но в эндогенной форме і кодируемый геном про вируса, включенного в геном мыши. Такие проаирусы дефектны и не производят инфекционных вирусных частиц. Однако функция гена SAG сохранена и его продукт, вкспресскруемый с первых дней жизни мыши, приводит к делении той субпопуляции Т-лимфоцитов, которая реагирует с суперантигеном. В результате не возникает В-кдеточного "резервуара", где вирус переживает до формирования тканей молочной железы и в такій мышах опухоли не развиваются.
Второй онкологический пример действия суперантигена - опухоли RCS в мышах линии sjl. Это в-лимфомы, рост которых зависит от лимфоюцго» (IL-4, IL-5, y-IFN) продуцируемых Т-димфоцитамн в ответ «а суперантиген, экспрессированный на поверхности В-лимфомы. Он также кодируется геном из группы SAG-MMTV її его экспрессия необходима для поддержания роста В-лимфомы.
Сейчас известно более двадцати разных суперантигенов из «той группы, как эндогенных, так и экзогенных, но существуют также суперантигены совершенно другого происхождения - бактериальные, такие как антеротокскны стафилококка или суперантнген микоплазмы. Они не гомологичны вирусным, но активируют Т-лнмфоцнты таким же способом.
Суперантигены представляют собой белки, функции которых в иммунной системе занимают место, промежуточное между неспецифической активацией Т-клеток и нормальным, высокоспециалнэированным распознаванием антигена. Их частичная специфичность обычно ограничена одним или несколькими Уд элементами (вариабельной части 0-цепи) Т-рецептора, с которыми они и реагируют.
Суперантиген активирует нее (или большинство) Т-клеток, экспрессирующих
сгір*.;;гг~:яглй zz~.ism.4f, что составляет от 2 до 10 всех Т-клсток, и это с^в.^зягзт его спгллилй , стимулирующий эффект. При распознавании :т;?сцї«::усззпг.огЬ антигена гятягпрузтся только 1 клетка из юо ооо.
' Сулгргятяггка :~:гстны такса юз Vj-ceniirnisAie элементы, потому что e*ni ркгдруют с опрїГ.ї."їяпьім участком Уд-цепи незнвпягмо от остальных глем:!ігоз Т-р;г,:птзра. CJ^acrt сзпздоаппя соответствует петяо CDR4 Vj Т-рец:птс-з п разлслста і*-:-7^у вмгсізгпггЬтпгнгя посгздоззтеяьиостямп 67-77. Зто сгр~:г^~:з саз д." Sisrtpr.^aias: еуікрг:ггпгг::ов так и для ретровирусных. Хгг.л'-гД с7";?гзг^г;п оСис:э реагирует с квскояьтагш разными V^,, но сразивши пз с?~~*стпслзтт!л п?"~?,",з-Тїлілогт;Л па позмялет еы";гчпъ общий мотив, спгцт:;^—:иЯ />~" ли:::зга С"г?"гтпгс:і2. Вопрос о мкагмзлъиой струїггуре, !:к5лолп"-:Ялглкттггг^гг'ггсгосг-ізігзЕнпа супгрантлгспа, представляется гесьма гїлііітп,- пЗзпг.*::^ Сіз гз:і:і:.їцпи итого п;д:*мо-.зпстзия нельзя разрабатывать пегп-гт^гиз njrt;;;2iT.i :.:;.леп^гз па фгіїнцзі'суітзрглгпігсков в организме.
Oyiicrm г-1;кг-"лт;п:г:'':л ^злт.зтій пзу-:г::м гораздо ху;хе. Существуют
a cr/.t:7^:t:r;;:i, г:с*цг"';;с:;т;и:го с трусом Злштейна-Барр (оба со cri!z:-?Tzr.-i?7LV3"02) :!с^;г?":~:гат:зл:с!;цп:ірс2.'і:-:;югосЕярусомн:-гтіунодсфиціп,а "ілізг-з, IJIV-l {сэс'-:::г'.;;"::;;-."п:э1:7г12). Изззстгатакжечто гптеротоксикы :::гут Сіль г;.с-::л:о.і tmliirs пзтелопипгсгп: состс ~::п"і и панСолее ярким і."" :~з;л атего слуг;::? -,2-301 - суп:?:.:гг;:г.?іі ;:т.'.;ив"_:ощііи синдром токсического сізга (с^-^!.*-::т:і! к IV5) .'
Лгг;:.т "-. rr^V"-Sits ог.рС-,"ї."-і"гслт;п, тго до «їх nop г.е существует точных с^.'л::г:.*і о стрі-Т/рз з/.*":..?л:гсгск-с:^;!л-''!ощїїї области Т-рецзптора. Без пс*.г~:а:г!з ск-Сз:с:с"й гтего г;^:пггг.о".-~;:л пгзозмо:::но создание вакцин и язгг.т.зз ?"гй;-у;:г^::: ^тіпглтг.-у:1 ::^::"'- 'гтсмпзсупзраитигена. Этому вопросу гзс;~г/..::з пгртзл г'гэть ?-:!sn,j.
, 2з 1:75.--- ""зтл пс-?.;*л:з с^гїгзйззтзіз Т-япмфсп;ггсз - супрессоров, ::otx;vj:3 м;гу:}іг;.':пгггп7Ь г-:гзп:з з мохоіліомз делеюп; Т-клегок, реагирующих с г:ш:гг::;~~!С}::";"пггспам. втап^анлзмгз^етелклкиезымвзлцптеорганизма ст спхогглікя "гізузоз, пі>?дуі?;груіс:егх супсрснгсген. - В треті eft части работы пскг:":.':эгуп;^-лгг;2:-г.:: сул;?і:тгс::а, сігрздзлсощего уроезкь репликации вируса г:миу:іс::*!пц:п"з «гзлзЬгзз (lliv-'l) зТ-ллмфоцитах.
Цели п гзЛіті Г'^г.^сг.аігпз. Настоящая работа посвящена иселедопаншо кїгїгшїмоздійзтзя». cynjps:rr:ire::c3 пі растя уровнях: молекулярном, клеточном п ккниетопГ.о;!, сг.ргдзлле''.им оїакмодїйстсязмл меязду функционально разными еуЗпслуляаглї vi 1>л::?.і*;;цчтоз. В сойтаетстаип с отам были поставлены следующие
задачи*
і. Определить варианты vt Т-оецептора реагирующего с суперантигеном (МАМ).
2. Определить аминокислотные позиции структуро Т-рецептора, важные для его
взаимодействия с суперантигеном МАМ.
3. Получить клоны Т-супрессороэ и изучить условия их взаимодействия с В-
клеткамн (стимуляторами) и отвечающими пролиферацией coat Т-клетками.
4. Изучить уровень репликации вируса иммунодефицита человека (HJV-1) в Т-клетках зкспрессирующих разіше варианты Vj.,
Научная воавзва и практичесхаа ценвость работы. В данной работа решен опрос о дополнительном «лементе Т-рецеатора, опредедеяющем его реактивность с суперантигеном. Кроме «местного ранее У« т реакция зависит от использована* определенных J, элементов в составе Т-рецептора' рпредааеш аминокислотная позиция позволяющая yt сформировать "реагирующую" информацию Т-рецептора, специфичную для суперантигена микоплазмы. Показано также существование Т-супрессоров, реагирующих с вндогеиным суперантигеном. Иммунорегуляторнаяфункция таких клеток может приводить к делецин отвечающих на суперантиген Т-лимфоцитов, т.е. участвовать язащите организма от онкогенных вирусов подобных имту.
Третьим важным результатомі этой работы является демонстрация того факта, что репликация вируса иммунодефицита человека (HIV-1) в Т-клетках авдвется У#-седективным процессом, т.е. различна в Т-клеткая акспресскрующих разные варианты v,. Это говорит об участии суперантигена, который активирует Т-лимфоциты экспрессирующие V,12, что способствует интеграции вируса в геном клетки и создает условия для репликации вируса в «той изолированной сурпопудяции. Такие клетки служат "резервуаром" вируса в организме и этот суперантиген-опосредованный путь активации Т-клеток может быть критическим ггапом в распространении вируса. .
Апробация работы. Основные материалы работы изложены в 7 публикациях. Диссертация была опробироваиа на совместной конференции лабораторий иммунохимии, механизмов регуляции иммунитета и противоопухолевого иммунитета, состоявшейся 14 мая 1»9зг.
Структура работы. Диссертация состоит ні введения, обзора литературы, результатов и обсуждения собственных исследований и выводов. Работа изложена на 70 страницах, содержит рисунков. Список литературы включает 132 публикации.