Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Клинико-прогностическое значение иммунофенотипического профиля инфильтрирующих опухоль иммунокомпетентных клеток в меланоме кожи Божченко Яна Анатольевна

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Божченко Яна Анатольевна. Клинико-прогностическое значение иммунофенотипического профиля инфильтрирующих опухоль иммунокомпетентных клеток в меланоме кожи: диссертация ... кандидата Медицинских наук: 14.01.12 / Божченко Яна Анатольевна;[Место защиты: ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина» Министерства здравоохранения Российской Федерации], 2018

Содержание к диссертации

Введение

Глава 1. Обзор литературы. 11

1.1 Факторы прогноза течения и исхода заболевания меланомой кожи. 11

1.2. Субпопуляции иммунных клеток в микроокружении меланомы кожи . 13

1.3. Прогностическое значение FoxP3+ Т-лимфоцитов в инфильтрате опухоли 19

1.4. Прогностическое значение Т-регуляторных лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате опухоли у больных меланомой кожи. 21

1.5. Прогностическое значение соотношений субпопуляций лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате опухоли 22

Глава II. Материал и методы исследования 26

2.1. Общая характеристика больных меланомой кожи. 26

2.2. Критерии отбора клинических случаев для анализа. 29

2.3. Подготовка гистологических препаратов. 29

2.4. Подготовка иммуногистохимических препаратов. 30

2.5.Оценка экспрессии иммуногистохимических маркеров интра- и перитуморальной инфильтрации. 31

2.6. Методы статистического анализа данных. 32

Глава III. Данные собственных наблюдений 33

3.1.Общая характеристика субпопуляций пери- и интратуморальных иммунокомпетентных клеток в лимфоидном инфильтрате опухоли. 33

3.2. Показатели содержания CD3+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи. 34

3.3. Показатели содержания CD8+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи. 40

3.4. Показатели содержания CD4+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи. 46

3.5. Показатели содержания CD20+ B-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи. 52

3.6. Показатели содержания FoxP3+ T-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи . 57

3.7. Показатели содержания TIA 1+ T-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи 63

3.8. Показатели содержания СD68+ макрофагов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи. 69

3.9. Показатели индекса соотношения субпопуляций CD4+/CD8+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи. 74

3.10. Показатели индексов соотношения CD3+/CD20+ субпопуляций Т- и В лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи. 79

3.11. Показатели индексов соотношения CD8+/FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи. 84

3.12. Показатели индексов соотношения субпопуляций CD4+/FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи. 89

3.13. Показатели индекса соотношения CD8+/TIA1+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи 94

3.14. Субпопуляций перитуморальных ИКК и индексы их соотношения в лимфоидном инфильтрате опухоли больных меланомой кожи в 3-х группах наблюдения . 99

3.15. Субпопуляций интратуморальных ИКК и индексы их соотношения в лимфоидном инфильтрате опухоли больных меланомой кожи в 3-х группах наблюдения. 103

3.16. Роль клинико-морфологических факторов в прогнозе 5-летней общей выживаемости больных меланомой кожи 107

3.17. Влияние субпопуляций перитуморальных ИКК и индексов их соотношений на 5-летнюю общую выживаемость больных меланомой кожи. 110

3.10. Влияние субпопуляций интратуморальных ИКК и индексов их соотношений на 5-летнюю общую выживаемость больных меланомой кожи. 113

3.18. Многофакторный анализ влияния клинических, морфологических факторов и субпопуляций пери- и интратуморальных ИКК на 5-летнюю общую выживаемость больных меланомой кожи. 116

3.19. Роль клинико-морфологических факторов в прогнозе 5-летней безрецидивной выживаемости больных меланомой кожи 117

3.20. Влияние субпопуляций ИКК и индексов их соотношений на 5-летнюю безрецидивную выживаемость больных меланомой кожи 119

3.24. Многофакторный анализ влияния клинических, морфологических факторов и субпопуляций пери- и интратуморальных ИКК на 5-летнюю безрецидивную выживаемость больных меланомой кожи. 127

Глава IV. Обсуждение полученных результатов. 129

Заключение 137

Выводы 139

Практические рекомендации 141

Список литературы 142

Субпопуляции иммунных клеток в микроокружении меланомы кожи

Среди инфильтрирующих опухоль иммунокомпетентных клеток встречаются многочисленные клеточные фенотипы, такие как: Т- и В-лимфоциты, макрофаги, дендритные клетки, супрессирующие клетки миелоидного происхождения, гранулоциты.

Несмотря на то, что многие клетки морфологически похожи, они функционально гетерогенны и по-разному влияют на рост опухоли и ее метастазирование [Ошибка! Источник ссылки не найден.].

Ряд исследований показал, что клетки, инфильтрирующие опухоль, экспрессируют на своей мембране СD45+, CD3+, CD4+, CD8+. CD25+, CD56+, CD20+, CD68+ и многие другие кластеры дифференцировки, что подтверждает гетерогенность состава лимфоидного инфильтрата и говорит о сложности клеточных взаимодействий в строме опухоли [22, 34, 39, 95].

Исследования состава TILs в МК показали, что в его состав входят преимущественно Т-клетки, экспрессирующие на своей мембране CD45+, CD3+, CD4+, CD8+, CD25+ кластеры дифференцировки [34, 95]. Отмечается наличие В-лимфоцитов, макрофагов, дендритных клеток [62, 100].

В исследовании субпопуляций лимфоцитов и их соотношений в образцах ткани, взятых от больных как с доброкачественными, так и со злокачественными новообразованиями кожи было выявлено, нарастание инфильтрации лимфоцитами от здоровой кожи (3,9%), доброкачественного невуса (26,8%), диспластического невуса (39%) до ПМК в фазе радиального роста (67,1%) и вертикального роста (87,9%) как в паренхиме, так и в строме опухоли. TILs в метастатической меланоме была достоверно ниже, чем в МК без метастазов и отмечалась только в паренхиме опухоли. Данная тенденция была характерной для всех исследуемых маркеров [62].

Корреляция выраженности TILs с переходом от здоровой кожи и доброкачественных поражений до МК говорит об иммуногенности последней. Достоверно значимой корреляции TILs с размером, локализацией и прогрессированием заболевания найдено не было [40; 6262].

Увеличение числа цитотоксических СD8+ Т-лимфоцитов в опухолевой ткани при раке яичников, тела матки, толстой кишки, поджелудочной железы связаны с лучшей выживаемостью больных [52, 98, 109].

Значение CD4+ Т-лимфоцитов в противоопухолевом ответе весьма противоречиво. С одной стороны, CD4+ Т-лимфоциты за счет способности связываться с антигенпрезентирующей клеткой и последующей секреции IL-2 активируют CD8+ цитотоксические Т-лимфоциты. С другой стороны, часть из них, называемая, Т-регуляторными клетками, способна подавлять функции CD8+ цитотоксических лимфоцитов, способствуя подавлению противоопухолевого иммунитета [59, 86].

В-лимфоциты как правило присутствуют в строме солидных опухолей в относительно небольшом количестве. Вопрос о роли В-лимфоцитов в противоопухолевом иммунном ответе организма до сих пор остается открытым. Некоторые исследования показали усиление роста опухоли ее прогрессирование при высоких показателях В-лимфоцитов в ее микроокружении [68].

Данные, о про- и противоопухолевом влиянии В-лимфоцитов, возможно связаны с многообразием их функций. С одной стороны, В-лимфоциты могут функционировать в качестве антигенпрезентирующих клеток повышая противоопухолевый Т-клеточный ответ. С другой стороны, они способны стимулировать рост опухоли с помощью антител или иммунных комплексов, секреции иммунных подавляющих факторов. Так, продуцируемый В-лимфоцитами IgG4 способен конкурентно связываться с Fc-рецептором на цитотоксических Т-лимфоцитах и препятствовать связыванию данного рецептора с иммуноглобулином IgG1, который при связывании с последним активирует эффекторные клетки, то есть опосредует противоопухолевый иммунитет [68]. В исследовании M. Neagu et al., [89], была выявлена корреляциия более высоких показателей субпопуляции СD20 B-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате ПМК с IV стадией заболевания и наличием изъязвления первичной опухоли.

Большинство CD3+ клеток экспрессировали маркер цитотоксических Т-лимфоцитов TIA1+, экспрессия которого постепенно снижалась по мере прогрессии опухоли. Экспрессия TIA1+ положительно коррелировала с благоприятным исходом течения заболевания [8262].

TIA-1 (T-Cell Intracellular Antigen-1) является эффекторным белком мембран цитоплазматических гранул активированных цитотоксических клеток. Чем выше доля TIA1 Т-лимфоцитов в субпопуляции CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов, тем более эффективно работает эффекторное звено иммунитета. По данным исследования S. Lyle et al. [82] процент TIA1+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате МК уменьшался при прогрессировании заболевания.

Недавние исследования показали наличие в инфильтрате опухоли так называемых Т-регуляторных клеток (Т-рег), экспрессирующих на своей мембране такие маркеры как CTLA-4 и FoxP3 и оказывающих иммуносупрессивный эффект на цитотоксические клетки [105].

Известно, что иммунокомпетентные клетки участвуют в распознавании и уничтожении раковых клеток, то есть осуществляют иммунологический надзор. Однако опухолевые клетки способны уходить из-под иммунного контроля, посредством специфических механизмов. Работа иммунной системы призвана защитить организм от развития опухоли, но нередко возникающие в ней нарушения, такие как хроническое воспаление, могут предрасполагать к развитию опухоли и ее росту [4].

В последние годы получены многочисленные сведения о роли субпопуляции регуляторных иммунокомпетентных клеток с супрессорной активностью в патогенезе патологических состояний иммунной системы [96, 119, 122, 130]. Ряд исследований показал, что Т-рег клетки играют активную и значительную роль в опухолевой прогрессии и подавлении противоопухолевого иммунитета [30, 78, 120].

Впервые они были охарактеризованы S. Sakaguchi et al. в 1995 году [105] как CD4+CD25+Т-клетки при исследовании аутоиммунных заболеваний у мышей. Позднее, в 2001 г., супрессорные свойства CD4+CD25+ T-клеток были найдены и у человека. В 2003 г. описан ген, локализованный в хромосоме X, FOXP3 (forkheadbox P3), который контролирует развитие и функционирование T-рег клеток у мышей, затем это было показано и для T-рег клеток человека.

Многочисленные исследования показали, что Т-рег клетки экспрессируют такие маркеры как: CD25 (-цепь рецептораIL-2, IL-2R), CTLA-4 (CD152, cytotoxic T lymphocyte antigen 4), GITR (glucocorticoid induced TNF-receptor-relate d protein), CD95(Fas), CD127lo (IL-7R) GITR, CTLA_4 (CD152), galectin-1, CD38, CD62L, OX_40L, CD103, TNF_R2, TGF_R1, CD5, l_selectin, CD45RO, CD45RА, LAG_3, neuropilin_1 (Nrp1) [58, 61, 88,114, 125].

Однако следует иметь в виду, что эти молекулы, используемые как поверхностные маркеры T-рег клеток, могут экспрессироваться и другими Т-клетками на определенных стадиях жизненного цикла. Например, молекулы CD25, CD69, CD127, CD45RO обнаруживаются и на Т-цитотоксических клетках [105].

Наиболее достоверным маркером Т-рег клеток, необходимым как для их дифференцировки, так и для функциональной активности является FoxP3 [48, 58, 61, 105, 114, 125]. Именно FoxP3+ T-рег клетки, или FoxP3+ Т-лимфоциты, подавляя противоопухолевый иммунитет, способствуют опухолевой прогрессии [105].

Исследования содержания FoxP3+ Т-лимфоцитов у онкологических больных выявили увеличение их уровня в периферической крови, опухолевом микроокружении, регионарных лимфатических узлах. Большое число данных указывает на то, что присутствие FoxP3+ Т-лимфоцитов в микроокружении опухоли связано с уменьшением опухолеспецифического иммунного ответа, и что увеличение их количества коррелирует со снижением выживаемости онкологических больных. Идентифицированы различные субпопуляции FoxP3+ Т-лимфоцитов, которые действуют через сходные или отличающиеся механизмы супрессии опухолеспецифических эффекторных клеток [6].

Показатели содержания FoxP3+ T-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

В нашем исследовании наличие FoxP3+ Т-лимфоцитов, отмечалось во всех 180 исследуемых образцах гистологического материала как пери- так и интратуморально.

Перитуморальная инфильтрация опухоли FoxP3+ Т-лимфоцитами во всех случаях преобладала над интратуморальной инфильтрацией. Интратуморальная инфильтрация опухоли была представлена преимущественно незначительными скоплениями FoxP3+ Т-лимфоцитов (2-3клетки), расположенными в соединительнотканных прослойках между гнездами клеток меланомы, внутри гнезд клеток опухоли отмечались редкие единичные FoxP3+ Т-лимфоциты.

При исследовании корреляции FoxP3+ Т-лимфоцитов с основными клиническими характеристиками больных меланомой кожи были выявлены следующие особенности.

Как следует из таблицы 24, наблюдалась корреляция более высоких показателей интратуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате опухоли со стадией заболевания (R=0,3; р=0,0001).

Коэффициенты корреляции с полом и возрастом больных МК не имели статистической значимости.

При исследовании корреляции FoxP3+ Т-лимфоцитов с течением заболевания у больных МК были выявлены следующие особенности Как следует из таблицы 25, отмечалась статистически достоверная корелляция более высоких показателей субпопуляции пери- и интратуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоцитарном инфильтрате опухоли с прогрессированием заболевания в виде появления метастазов в регионарных лимфатических узлах и отдаленных метастазов (R=0,3; р 0,05) Высокие показатели интратуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов коррелировали с наличием синхронных метастазов в лимфатических узлах (R=0,2; р=0,006).

При исследовании корреляции показателей содержания FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате опухоли с вариантом прогрессирования были выявлены следующие особенности.

Как следует из таблицы 26, отмечалась статистически достоверная корелляционная связь более высоких показателей перитуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоцитарном инфильтрате опухоли с прогрессированием заболевания в виде появления метастазов в регионарных лимфатических узлах (R=0,3; р=0,00009). Также, отмечалась корреляция более высоких показателей интратуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоцитарном инфильтрате опухоли с прогрессированием заболевания в виде появления отдаленных метастазов (R=0,2; р=0,001)

При исследовании корреляции FoxP3+ Т-лимфоцитов с основными морфологическими характеристиками первичной меланомы кожи были выявлены следующие особенности.

Как следует из таблицы 30 наблюдалась статистически достоверная корелляция более высоких показателей содержания как пери- так и интратуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате опухоли с наличием изъязвления, с толщиной опухоли по Бреслоу (R=0,3, 0,2 и 0,1 соответственно; р р 0,05).

Более низкие показатели содержания как пери- так и интратуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате опухоли коррелировали со степенью выраженности лимфоцитарной инфильтрации опухоли (R=-0,3 и -0,1 соответсвенно; р 0,05).

Более высокие показатели перитуморальных FoxP3+ Т-лимфоцитов имели статистически достоверную корреляцию с наличием участков частичной спонтанной регрессии ПМК (R=0,4; р=0,01).

Не было выявлено статистически достоверной корреляции FoxP3+ Т-лимфоцитов с такими показателями как тип роста первичной опухоли, глубина инвазии по Кларку, наличие сосудистой инвазии, участков периневрального роста опухоли, количество митозов ( р 0,05).

Субпопуляций перитуморальных ИКК и индексы их соотношения в лимфоидном инфильтрате опухоли больных меланомой кожи в 3-х группах наблюдения

Нами был проведен сравнительный анализ показателей субпопуляций пери-и интратуморальных иммунокомпетентных клеток (ИКК) и индексов их соотношения у больных I-II стадии заболевания без прогрессирования (1-ая группа наблюдения), у больных МК со II-ой стадией заболевания с последующим прогрессированием заболевания (2-ая группа наблюдения) и у больных МК с III IV стадиями заболевания (3-я группа наблюдения).

Отмечались достоверные отличия между группами наблюдения по таким субпопуляциям ИКК как: CD4+, CD20+, FoxP3+, TIA1+, CD68+ (р 0,05). При этом самые высокие показатели субпопуляций CD4+, CD20+, FoxP3+, CD68+ перитуморальных ИКК наблюдались во второй группе наблюдения, то есть у пациентов у которых отмечалось прогрессирование заболевания. Самые низкие показатели содержания данных субпопуляций ИКК отмечались в 1-ой группе наблюдения, то есть у больных у которых прогрессирования заболевания не наблюдалось.

Показатели TIA1+, то есть активированных цитотоксических Т-лимфоцитов не имела достоверных отличий в 1-ой и 2-ой группах наблюдения (39 и 34 клетки в поле зрения). В 3-ей группе наблюдения данный показатель был в 2 раза ниже, чем в 1-ой и 2-ой группах наблюдения и составил 16 клеток в поле зрения (р=0,0001).

Показатели содержания субпопуляций CD3+ и CD8+ лимфоцитов в лимфоидном инфильтате ПМК не имели статистически достоверных отличий между 3-мя группами наблюдения (р 0,05).

Как следует из таблицы 67, медиана индекса соотношения CD3+/СD20+ субпопуляций перитуморальных лимфоцитов, отражающего соотношение Т и В-лимфоцитов в перитуморальном лимфоидном инфильтрате была наиболее высокой в 1-ой группе наблюдения и составила 6,7 (р=0,0001). То есть в 1-ой группе наблюдения Т-лимфоциты в 6,7 раз преобладали над В-лимфоцитами. Во 2-ой и 3-ей группах наблюдения не было значительных отличий по медиане индекса соотношения данных субпопуляций лимфоцитов (3,5 и 4).

Медиана индекса соотношения CD4+/FoxP3+ субпопуляций перитуморальных лимфоцитов, отражающее соотношение Т-хелперов и Т регуляторных лимфоцитов в перитуморальном лимфоидном инфильтрате было наиболее высоким в 1-ой и 3-ей группах наблюдения и составила 1,9. Во 2-ой группе медиана индекса соотношения CD4+/FoxP3+ субпопуляций перитуморальных лимфоцитов составила 1,5 (р=0,0001).

Медиана индекса соотношения CD8+/FoxP3+ субпопуляций перитуморальных лимфоцитов, отражающего соотношение Т-цитотоксических и Т-регуляторных лимфоцитов в перитуморальном лимфоидном инфильтрате была наиболее высокой в 1-ой группе наблюдения и составила 4,3 (р=0,0001). Во 2-ой и 3-ей группах наблюдения медиана индекса соотношения CD8+/FoxP3+ субпопуляций лимфоцитов была достоверно ниже и составила 2,1 и 2,5.

Медиана индекса соотношения CD8+/TIA1+ субпопуляций перитуморальных лимфоцитов, отражающего соотношение Т-цитотоксических лимфоцитов и той их части которая секретирует цитотоксические молекулы TIA1+ в перитуморальном лимфоидном инфильтрате была наиболее высокой в 3-ей группе наблюдения и составила 4. Во 2-ой группе наблюдения медиана индекса соотношения CD8+/TIA1+ субпопуляций перитуморальных лимфоцитов была наиболее низкой и составила 1,8. В 1-ой группе наблюдения данный показатель был равен 2,4 (р=0,0001).

Влияние субпопуляций ИКК и индексов их соотношений на 5-летнюю безрецидивную выживаемость больных меланомой кожи

Для выявления прогностически значимых, в отношении 5-летней безрецидивной выживаемости, субпопуляций пери- и интратуморальных ИКК и их соотношений в лимфоидном инфильтрате ПМК было выполнено построение ROC-кривых с целью выявления их пороговых значений. В качестве конечной точки при построении ROC-кривых выбран факт появления метастазов за весь период наблюдения. С целью подготовки многофакторного регрессионного анализа был выполнен поиск пороговых значений исследуемых показателей инфильтрации. На рисунках ниже представлены ROC-кривые для оцениваемых показателей. В таблицах ниже также представлены характеристики данных ROC-кривых.

Как следует из таблицы 81 факторами имеющими прогностическое значение в отношении 5-летней безрецидивной выживаемости больных МК являются такие субпопуляции перитуморальных лимфоцитов как: CD4+ (AUC-0,632, р=0,04), СD20+ (AUC - 0,722, р=0,0001), FoxP3+ (AUC - 0,729, p=0,0001), а также соотношение таких субпопуляций лимфоцитов в перитуморальном лимфоидном инфильтрате первичной МК как: CD3+/CD20+ (AUC - 0,206, р=0,001), CD4+/FoxP3+ (AUC - 0,285, р=0,001), CD8+/FoxP3+ (AUC - 0,227, р=0,001), CD8+/TIA1+ (AUC - 0,655, р=0,001).

Для факторов, имеющих статистически значимое влияние на 5-летнюю безрецидивную выживаемость больных МК, выбраны пороговые значения, соответствующие оптимальному соотношению чувствительности и специфичности.

Пороговое значение для среднего количества перитуморальных лимфоцитов, экспрессирующих CD4+ равно 40 клеткам в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равно 0,632, то при количестве CD4+ лимфоцитов выше порогового значения в 40 клеток в поле зрения вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости ниже, чем при значениях CD4+ ниже порогового значения с чувствительностью 81,1% и специфичностью 40,5%.

Пороговое значение для среднего количества перитуморальных лимфоцитов в поле зрения, экспрессирующих CD20+ равно 16 клеткам в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равно 0,722, то при количестве CD20+ лимфоцитов выше порогового значения в 16 клеток в поле зрения вероятность 5 летней безрецидивной выживаемости низкая. В то время как, при значении количества CD20+ лимфоцитов выше порогового значения, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости высока с чувствительностью 83% и специфичностью 35,1%.

Пороговое значение для среднего количества перитуморальных лимфоцитов, экспрессирующих FoxP3+ равно 18,2 клетки в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равно 0,729, то при количестве FoxP3+ лимфоцитов выше порогового значения в 18,2 клеток в поле зрения 5-летняя безрецидивная выживаемость ниже, чем при значениях FoxP3 ниже порогового значения с чувствительностью 83% и специфичностью 43,2%.

Как следует из таблицы 83, пороговое значение индекса субпопуляций CD3+/CD20+ перитуморальных Т и В-лимфоцитов равно 3,1. При этом, так как AUC меньше 0,5 и равно 0,206, то при значении индекса соотношения CD3+/CD20+ лимфоцитов выше порогового значения в 3,1, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости выше, чем при значениях индекса соотношения CD3+/CD20+ лимфоцитов ниже порогового значения с чувствительностью 60,4% и специфичностью 8,1%.

Пороговое значение индекса соотношения субпопуляций CD4+/FoxP3+ перитуморальных Т-лимфоцитов равно 1,5. При этом, так как AUC меньше 0,5 и равно 0,275, то при значении индекса соотношения субпопуляций CD4+/FoxP3+ перитуморальных Т-лимфоцитов выше порогового значения в 1,5, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости выше, чем при значениях индекса соотношения CD4+/FoxP3+ Т-лимфоцитов ниже порогового значения с чувствительностью 52,8% и специфичностью 13,5%.

Пороговое значение индекса соотношения субпопуляций CD8+/FoxP3+ перитуморальных Т-лимфоцитов равно 2. При этом, так как AUC меньше 0,5 и равно 0,227, то при значении индекса соотношения CD8+/FoxP3+ еритуморальных Т-лимфоцитов выше порогового значения 2, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости выше, чем при значениях индекса соотношения CD8+/FoxP3+ Т-лимфоцитов ниже порогового значения с чувствительностью 58,5% и специфичностью 10,8%.

Пороговое значение индекса соотношения субпопуляций CD8+/TIA1+ перитуморальных Т-лимфоцитов равно 2,1. При этом, так как AUC больше 0,5 и равно 0,665, то при значении индекса соотношения CD8/TIA1+ перитуморальных Т-лимфоцитов выше порогового значения 2,1, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости ниже, чем при значениях индекса соотношения CD8/TIA1+ Т-лимфоцитов ниже порогового значения с чувствительностью 78,8% и специфичностью 40%.

Как следует из таблицы 84 факторами имеющими прогностическое значение в отношении 5-летней безрецидивной выживаемости больных МК являются такие субпопуляции интратуморальных лимфоцитов как: CD3+ (AUC-0,712, р=0,0001), CD4+ (AUC-0,704, р=0,01), СD20+ (AUC-0,712, р=0,0001), FoxP3+ (AUC - 0,672, p=0,04), TIA1+ (AUC - 0,709, p=0,001), CD68+ (AUC-0,755, р=0,0001), а также соотношение таких субпопуляций лимфоцитов в интратуморальном лимфоидном инфильтрате первичной МК как: CD3+/CD20+ (AUC-0,321, р=0,002), CD8+/FoxP3+ (AUC-0,367, р=0,04).

Для факторов, имеющих статистически значимое влияние на 5-летнюю безрецидивную выживаемость, выбраны пороговые значения, соответствующие оптимальному соотношению чувствительности и специфичности.

Пороговое значение для интратуморальных лимфоцитов, экспрессирующих CD3+ равно 7 клеткам в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равна 0,712, то при количестве CD3+ лимфоцитов выше порогового значения в 13 клеток в поле зрения, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости ниже, чем при значениях CD3+ ниже порогового значения с чувствительностью 84,9% и специфичностью 43,2%.

Пороговое значение для интратуморальных лимфоцитов, экспрессирующих CD8+ равно 7 клеткам в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равно 0,642, то при количестве CD8+ лимфоцитов выше порогового значения в 7 клеток в поле зрения, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости ниже, чем при значениях CD8+ ниже порогового значения с чувствительностью 83% и специфичностью 43,2%.

Пороговое значение для интратуморальных лимфоцитов, экспрессирующих CD4+ равно 6 клеткам в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равно 0,704, то при количестве CD4+ лимфоцитов выше порогового значения в 6 клеток в поле зрения, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости ниже, чем при значениях CD4+ ниже порогового значения с чувствительностью 83% и специфичностью 43,2%.

Пороговое значение для интратуморальных лимфоцитов, экспрессирующих CD20+ равно 2 клеткам в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равна 0,712, то при количестве CD20+ лимфоцитов выше порогового значения в 2 клетки в поле зрения, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости ниже, чем при значениях CD20+ ниже порогового значения с чувствительностью 77,4% и специфичностью 37,8%.

Пороговое значение для интратуморальных лимфоцитов, экспрессирующих FoxP3+ равно 2 клетки в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равно 0,672, то при количестве FoxP3+ лимфоцитов выше порогового значения в 2 клетки в поле зрения, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости ниже, чем при значениях FoxP3+ ниже порогового значения с чувствительностью 83% и специфичностью 48,6%.

Пороговое значение для интратуморальных лимфоцитов, экспрессирующих TIA1+ равно 3 клетки в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равно 0,704, то при количестве лимфоцитов, экспрессирующих TIA1+ выше порогового значения в 3 клеткм в поле зрения, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости ниже, чем при значениях TIA1+ ниже порогового значения с чувствительностью 81,1% и специфичностью 32,4%.

Пороговое значение для интратуморальных макрофагов, экспрессирующих CD68+ равно 20 клеткам в поле зрения. При этом, так как AUC больше 0,5 и равно 0,755, то при количестве CD68+ макрофагов выше порогового значения в 20 клеток в поле зрения, вероятность 5-летней безрецидивной выживаемости ниже, чем при значениях CD68+ ниже порогового значения с чувствительностью 62,3% и специфичностью 54,1%.