Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 13
1.1. Этиопатогенез предрака и рака гортани .13
1.2. Клинико-морфологические разнообразия предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани .17
1.3. Методы диагностики патологических процессов в гортани 20
1.4. Оценка морфологических особенностей предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани .23
1.5. Место и роль матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в развитии предрака и рака гортани 26
1.6. Морфологические маркеры злокачественной трансформации слизистой оболочки гортани 27
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования
2.1. Характеристика клинического материала .33
2.2. Методы исследования
2.2.1. Эндоскопическое исследование .35
2.2.2. Определения экспрессии генов ММП в тканях гортани .39
2.2.3. Определение онкологических маркеров р53, Ki67, CD138 в тканях иммуногистохимическим методом 40
2.3. Методы статистической обработки полученных результатов 42
ГЛАВА III. Критерии формирования групп риска по раку гортани 45
3.1. Эндоскопическая диагностика хронических и предопухолевых процессов гортани 45
3.2. Хронические гиперпластические заболевания гортани, ассоциированные с предопухолевыми изменениями .52
3.3. Характер изменений маркеров пролиферации, апоптоза и клеточной дифференцировки при предраке и раке гортани 59
3.3.1. Анализ экспрессии маркера апоптоза p53 у пациентов с предопухолевыми состояниями и раком гортани 60
3.3.2. Изучение экспрессии маркера пролиферации Ki67 при диспластических и неопластических процессах гортани 64
3.3.3. Характер изменений маркера клеточной дифференцировки CD138 при предраке и раке гортани
3.4. Оценка внеклеточного протеолиза при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани 71
3.4.1. Изучение экспрессии генов матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов при предраке и раке гортани .71
3.5. Прогностическая значимость факторов развития рака гортани у больных с ХГЗГ .74
3.6. Прогноз риска малигнизации предопухолевых изменений ларингеального эпителия у больных с ХГЗГ 77
Заключение 86
Выводы .100
Практические рекомендации 101
Список литературы .103
- Клинико-морфологические разнообразия предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани
- Место и роль матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в развитии предрака и рака гортани
- Определение онкологических маркеров р53, Ki67, CD138 в тканях иммуногистохимическим методом
- Изучение экспрессии маркера пролиферации Ki67 при диспластических и неопластических процессах гортани
Клинико-морфологические разнообразия предопухолевых и опухолевых заболеваний гортани
Доля рака гортани (РГ) среди общего числа больных со злокачественными новообразованиями составляет 2,6 %, а среди опухолей верхних дыхательных путей занимает 1-е место (65 - 70 %) [4, 20, 47, 49, 94]. РГ подвержены в основном мужчины, в соотношение мужчин к женщинам составляет - 10 : 1 [41, 62, 82]. Согласно данным Международного агентства по изучению рака (МАИР), в 2008 г. в мире раком гортани заболело 129 650 мужчин и 21 026 женщин, а умерло – 70 336 мужчин и 11 556 женщин. Удельный вес этой патологии в структуре онкологической заболеваемости составил 2 % в мужской популяции и 0,3 % – в женской. Российская Федерация по уровню заболеваемости раком гортани занимает 33-е место в мире.
Сибирский федеральный округ по частоте заболеваемости раком гортани занимает 3-ю (из 8) ранговую позицию в России. В 2009 г. стандартизованные показатели заболеваемости у мужчин составили 7,6 0/0000 (РФ – 7,2 0/0000), у женщин – 0,4 0/0000 (РФ – 0,3 0/0000) [77]. В структуре онкологической заболеваемости Томской области рак гортани у мужчин занимает 12–13-е место в структуре общей онкологической заболеваемости; у женщин занимает 24–25-е места наряду с опухолями полости рта и глотки. В структуре заболеваемости злокачественных новообразований (ЗНО) верхних дыхательных путей рак гортани имеет наибольший удельный вес – 56,9 % в мужской популяции и 33,7 % – в женской. Большинство больных раком гортани – в возрастном интервале 40–60 лет [80, 108]. В мужской популяции эта патология встречается в 18,8 раза чаще, чем в женской. Однако в последнее время наблюдается тенденция увеличения числа заболевших женщин. Отмечается, что при стабилизации заболеваемости раком гортани городского населения происходит увеличение заболеваемости среди сельского населения [78, 80, 108, 120, 123].
В возникновении рака гортани, наряду с воздействием экзогенных факторов внешней среды - канцерогенов, к которым в первую очередь относятся полициклические ароматические углеводороды (бензапирен, бензаантрацен и др.) и нитрозамины табачного дыма, а также алкоголь, ионизирующая радиация и вещества, образующиеся при производстве изопропилового спирта, резиновой, обувной, мебельной продукции и др., важную роль, по мнению большинства исследователей, играет ряд предраковых заболеваний [4, 16, 17, 55, 60, 105 ].
Согласно классификации Комитета по изучению опухолей головы и шеи при Всесоюзном обществе онкологов (1977), выделяют предраковые заболевания с высокой частотой озлокачествления (облигатные формы предрака) – папиллома у взрослых, дискератоз и хронический гиперпластический ларингит и заболевания с низкой частотой озлокачествления (факультативные формы предрака) – контактная фиброма и рубцы после хронических специфических инфекционных заболеваний (сифилис, туберкулез, склерома) и ожогов [6, 52, 97, 99].
В связи с тем, что ряд авторов объединяют такие заболевания, как пахидермия, лейкоплакия, лейкокератоз, хронический гиперпластический ларингит под эгидой дискератоза, а другие исследователи считают эти нозологические формы самостоятельными заболеваниями, не существует четких статистических данных по эпидемиологии всех этих хронических процессов гортани. На долю дискератоза гортани приходится от 6,2 до 20 %, на долю папилломатоза - от 20 до 57,5 % доброкачественных заболеваний гортани [6, 98, 106, 113, 140]. Понятие дискератоз гортани включает несколько клинических форм: собственно дискератоз, пахидермия, хронический гиперпластический ларингит, гиперкератоз и лейкокератоз. С морфологической точки зрения это синонимы одного заболевания [6]. Морфологической основой дискератоза гортани является усиление пролиферации многослойного плоского эпителия слизистой оболочки гортани вследствие длительного воздействия различных факторов профессиональной и бытовой вредности, а также гормональных нарушений, авитаминоза и др [16, 17, 44, 89].
Папилломатоз является наиболее частой и тяжелой формой доброкачественной опухоли дыхательных путей, имеет склонность к длительному хроническому течению, быстрому росту опухоли и частому рецидивированию [21, 23, 63, 119, 158, 159]. Клинически различают ювенильный папилломатоз и папилломатоз взрослых [70]. Ювенильный папилломатоз проявляется обычно у детей в возрасте до 10-14 лет (наиболее часто в 2-4 года). Некоторые авторы считают, что ювенильный папилломатоз часто подвергается регрессии в пубертатном возрасте [70].
Папилломатоз взрослых чаще выявляется у мужчин в возрасте 30-49 лет, обычно проявляется как локализованное новообразование, склонное к медленному росту, но при этом чаще чем ювенильный подвергается озлокачествлению [6, 70]. Папилломатоз слизистой оболочки дыхательных путей имеет вирусную этиологию. При инфицировании в эпителиальные клетки слизистой оболочки человека встраивается вирус папилломы человека (ВПЧ) [18, 112]. ВПЧ является онкогенным ДНК-сод ержащим вирусом, представленным кольцевой ДНК, окруженной белковой оболочкой, состоящей из 72 субъединиц (пентамеров) и имеющим икосаэдрическую форму [18, 106, 144].
Место и роль матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в развитии предрака и рака гортани
Выделение суммарной клеточной РНК проводили с помощью набора «Illustra RNAspin Mini Kit» (GE Healthcare). Затем РНК очищали от примеси ДНК с помощью ДНКазы (10 ед./мкл, «Силекс», Москва). Для оценки качества суммарную клеточную РНК анализировали электрофорезом в 1,5% агарозном геле, содержащим 0.5 мкг/мл этидия бромида («Интерлабсервис», Москва). Качество и количество РНК оценивали на спектрофотометре NanoDrop 1000, для которых соотношение A260/А280 составляло не менее 1.8-2.0 и оценивали по соотношению интенсивности полос в геле, соответствующих 18S и 28S рРНК с помощью гель-электрофореза.
Для получения кДНК проводили реакцию обратной транскрипции РНК в присутствии 0,5 мкг универсального праймера oligo(dT)16 и M-MuLV обратной транскриптазы (Биосан, Новосибирск). Для контроля прохождения реакции обратной транскрипции с полученным продуктом и неревертированной РНК проводили ПЦР с праймерами, специфичными к последовательности гена GAPDH. Для анализа уровня экспрессии генов ММП-1,-2,-9,-14 и ТИМП-1,-2 использовали метод полимеразной цепной реакции в реальном времени (РВ ПЦР) с праймерами и набором производства фирмы «Синтол» (Москва). Дизайн олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченных олигонуклеотидных зондов комплементарных фрагментов генов-мишений был проведен так же фирмой «Синтол» (Москва). Реакционная смесь для проведения ПЦР-реакции содержала дНТФ 2,5 мМ, 10хПЦР-буфер, MgCl2, 25мМ, смесь праймеров 10 пкмоль/мкл, флуоресцентный зонд 10 пкмоль/мкл, 0.2 мкл Tag-ДНК-полимеразы в концентрации 5Е/мкл, образец кДНК 3 мкл, деионизированную воду. Реакцию проводили на амплификаторе Rotor-gene 6000 (Австралия). Результаты выражали в условных единицах (уровень экспрессии изучаемых генов по отношению к уровню экспрессии гена домашнего хозяйства). В качестве эндогенного внутреннего контроля, относительно которого проводили нормализацию продуктов амплификации исследуемых генов, был выбран ген «домашнего хозяйства» GAPDH. Изменение уровня количества мРНК в образце опухолевой ткани по отношению к образцу неизмененной ткани вычисляли по формуле: 2-Ct, согласно Livak and Schmittgen.
Определение онкологических маркеров р53, Ki67, CD138, проводилось в биоптатах слизистой оболочки гортани пациентов со злокачественной опухолью и пациентов с хронической патологией гортани – хронический гиперпластический ларингит и папилломы. Использовались следующие антитела для иммуногистохимического исследования: антитело к р53 (антитело кроличье поликлональное, NCL-p53-CM1) рабочее разведение 1: 150 (фирма «Новокастра»), CD138 клон MI15 (антитело мышиное моноклональное, готовое к применению), Ki67 клон MIB-1 (антитело моноклональное мышиное, готовое к применению) (фирма «Dako»). Инкубация с первичными/специфичными антителами производилась в течение 15 минут при 25С. Для визуализации применялась высокочувствительная полимерная система визуализации (Super Sensitive Polimer-HRP, готовая к применению) производства фирмы “BioGenex”. В качестве хромогена применяли ДАБ (диаминобензидин) производства фирмы «Dako».
Используемая методика включала следующие этапы: депарафинизация срезов – стекла со срезами перемещались в ксилол (при температуре 39С) – 3 порции по 10 минут. Проводка стекол со срезами по спиртам (96) – 3 порции по 5 минут. Стекла помешались в дистиллированную воду на 5 минут. В прогретую микроволновую печь устанавливали контейнер с дистиллированной водой 200 мл – прогревается в течение 5 минут при мощности печи 600 Вт. Выходная мощность микроволновой печи 800 Вт. Стекла помещали в держатели для стекол, затем в контейнеры для демаскировки. В цитратный буфер рН=6,0, для демаскировки антигенов. Контейнеры устанавливали внутрь микроволновой печи в центр, на расстоянии 2 см друг от друга на 5 мин при 600Вт мощности печи. Далее, оставляли печь на 1 минуту с открытой дверцей, после чего продолжали нагрев при мощности печи 300 Вт в течение 14 минут. Охлаждали контейнеры 30 минут (накрывали крышкой). Стекла из контейнеров для демаскировки перемещали в держатели для стекол находящиеся в промывочном фосфатном буфере, промывали – 2 порции по 5 минут. Срезы обводили гидрофобным карандашом, затем наносили реагент блокирующий эндогенную пероксидазную активность (Peroxidase blocking reagent производитель фирма “Dako”) – 5 минут. Помещали стекла со срезами в дистиллированную воду – 1 порция 5 минут. Затем производили промывку стекол со срезами в фосфатном буфере - 1 порция 5 минут. Потом наносили первичные/специфичные антитела на 15 минут, при температуре 25С (рабочее разведение антител готовили в день исследования). Стекла со срезами обрабатывали в промывочном фосфатном буфере – 2 порции по 5 минут. Производили нанесение полимерной системы визуализации производства фирмы “BioGenex” (состоящей из усилителя сигнала - Super Enhancer – первый компонент системы на 20 минут при температуре 25С). Стекла со срезами промывали в промывочном фосфатном буфере – 2 порции по 5 минут. Затем наносили второй компонент системы визуализации полимер – S-S Polymer – на 30 минут при температуре 25С. Стекла со срезами промываются в промывочном фосфатном буфере – 2 порции по 5 минут.
Определение онкологических маркеров р53, Ki67, CD138 в тканях иммуногистохимическим методом
После проведения комплексного морфологического исследования биопсийного материала слизистой гортани у 122 пациентов с хронической патологией гортани, у 60 (49,2%) пациентов были обнаружены предопухолевые (диспластические) изменения, которые в соответствии с классификацией ВОЗ (2005) разделены по степени тяжести изменений следующим образом: дисплазия эпителия I степени (ДI, легкая степень), выявлена у 10 (8,2%) пациентов с ХГЛ и у 2 (1,6%) – с папилломатозом гортани; ДII (средняя степень) – у 22 (18,0%) пациентов с ХГЛ и у 13 (10,7%) – с папилломатозом, ДIII (тяжелая степень) – у 7 (5,7%) пациентов с ХГЛ и 6 (4,9%) с папилломатозом. У 42 (34,4%) человека диспластические изменений не зафиксированы, из которых у 29 (23,8%) пациента, направлялись на обследование с диагнозом ХГЛ и 13 (10,7%) – с диагнозом папилломатоз гортани.
У 20 (16,4%) пациентов был морфологически выявлен ранний рак гортани, в том числе у 12 (9,8%) пациентов с ХГЛ и 8 (6,5%) – с папилломатозом. В обеих подгруппах наиболее часто отсутствие дисплазии или наличие таких изменений легкой степени наблюдались у лиц более молодого возраста, в возрастных интервалах – 31-40 лет и 41-50 лет (таблицы 2, 3). Вероятнее всего это обстоятельство связано с тем, что у данных больных стаж заболевания еще невелик, а также профессиональные агрессивные факторы не имеют
Итого (n=42) 12 (28,6%) 2 (4,8%) 12 (28,6%) 4 (9,5%) 6 (14,1%) 1(2,4%) - 1(2,4%) 2 (4,8%) 2 (4,8%) длительного срока воздействия. Более тяжелая дисплазия III степени и выявленный при нашем обследовании первичный рак гортани чаще всего наблюдался у пациентов, относящихся к возрастной группе 51-60 лет и 61-70 лет (таблицы 2, 3). Эта группа больных, как правило, имеет длительный стаж хронического заболевания гортани и значительный анамнез, сопряженный с различными профессиональными вредностями.
Установлено, что имеется прямая зависимость между длительностью анамнеза и выраженностью пред- и неопластических процессов в слизистой оболочке гортани. У большинства больных с отсутствием рассматриваемых изменений длительность жалоб составляла от 3 до 12 мес. Тогда как, при ДII, ДIII и реализовавшемся раке гортани чаще всего анамнез заболевания равнялся 6–12 и более месяцев (таблица 4).
Частота и выраженность пред- и неопластических изменений слизистой оболочки гортани в зависимости от длительности клинических проявлений Длительность жалоб Степень диспластических изменений ВыявленныйРГn=20 ДО n=42 ДI n=12 ДПn=35 ДНІ n=13 1-3 мес (n=4) 2 (1,6%) - 2 (1,6%) - 3-6 мес (n=25) 14 (11,8%) 3 (2,5%) 4 (3,3%) 2 (1,6%) 2 (1,6%) 6-12 мес (n=46) 14 (11,8%) 4 (3,3%) 14 (11,8%) 7 (5,7%) 7 (5,7%) 12-36 мес (n=30) 8 (6,6%) 2 (1,6%) 11 (9,0%) 3 (2,5%) 6 (4,9%) 36 мес (n=17) 4 (3,3%) 3 (2,5%) 4 (3,3%) 1 (0,8%) 5 (4,1%) Известно, что одним из основных факторов риска по развитию рака гортани является табакокурение. В проведенном исследовании выявлено, что в 90 (73,8%) случаях пациенты являлись активными курильщиками с длительным стажем в большинстве наблюдений, при этом у 17 (13,9%) человек стаж курения достигал 20–25 лет, у 37 (30,3%) – 30–40 лет. В последнем случае отмечены наиболее выраженные изменения, чаще всего наблюдалась дисплазия ларингеального эпителия III степени – у 6 (4,9%), II степени – у 12 (9,8%). Следует подчеркнуть, что в представленном исследовании наибольший стаж табакокурения зарегистрирован у пациентов с активно выявленным раком гортани, у 6 (4,9%) больных он равнялся 30–40 годам, у 8 (6,6%) – 40–50 годам. У некурящих (n=32, 26,2%) пред- и неопластические процессы в слизистой оболочки гортани наблюдались 14 (11,4%) случаях, при этом, в основном, эти изменения соответствовали дисплазии легкой (ДI) и средней (ДII) степени тяжести. Рак гортани выявлен у 4 (3,3%) некурящих (таблица 5). Таблица 5 – Частота и выраженность пред- и неопластических изменений слизистой оболочки гортани в зависимости от стажа табакокурения Стаж табакокурения Степень диспластических изменений ВыявленныйРГn=20 ДОn=42 ДI n=12 ДПN=35 ДНІ n=13 8-10 лет (n=6) 2 (1,6%) 2 (1,6%) 1 (0,8%) 1 (0,8%) 10-20 лет (n=18) 4 (3,3%) 3 (2,5%) 11 (9,0%) - 20-25 лет (n=17) 7 (5,7%) - 5 (4,1%) 3 (2,5%) 2 (1,6%) 30-40 лет (n=37) 10 (8,2%) 3 (2,5%) 12 (9,8%) 6 (4,9%) 6 (4,9%) 40-50 лет (n=12) 1 (0,8%) - 2 (1,6%) 1 (0,8%) 8 (6,6%)
Не курят (n=32) 18 (14,8%) 4 (3,3%) 4 (3,3%) 2 (1,6%) 4 (3,3%) При анализе влияния профессиональных факторов на частоту возникновения пред- и неопластических изменений слизистой гортани выявлены следующие закономерности. Большинство обследованных – 30 (24,6%) человек имели в анамнезе длительный контакт с различными видами ГСМ, 26 (21,3%) больных имели строительную специальность, и соответственно контакты со строительной пылью и повышенную голосовую нагрузку. К представителям голосоречевых профессий были отнесены учителя, преподаватели вузов, воспитатели детских учреждений, тренеры, которые составили группу из 16 (13,1%) пациентов. Наиболее негативное влияние на степень дисплазии оказал контакт с ГСМ, в этом случае ДII наблюдалась у 13 (10,7%) обследованных. Аналогичная закономерность прослеживается и в группе больных с активно выявленным раком гортани – профессиональная деятельность, связанная с ГСМ, отмечена у 6 (4,9%) пациентов (таблица 6).
Изучение экспрессии маркера пролиферации Ki67 при диспластических и неопластических процессах гортани
Еще одним процессом, характеризующим онкогенез, является нарушение клеточной дифференцировки. В качестве маркера, отражающего степень выраженности этих изменений, нами был выбран и в динамике исследован CD138. При анализе его экспрессии выявлена обратная закономерность по сравнению с изменениями уровней маркеров Ki67 и p53. Во всех группах больных с хронической воспалительной патологией гортани, как при наличии диспластических изменений I и II степени слизистой оболочки, так и без таковых, зарегистрированы высокие показатели экспрессии маркера CD138 (рисунок 16). Значимых различий в подгруппах больных без Д и с ДI-II не выявлено (p 0,05). При отсутствии дисплазии эпителия уровень данного маркера составил 86,8 ± 9,2, при дисплазии I степени – 88,1 ± 42,3, при диспластических изменениях II степени – 87,2 ± 2,06. Значимое снижение уровня CD138 отмечается при диспластическом изменениях эпителия III степени (рисунок 17) по сравнению с группой больных без дисплазии, а также с ДI и ДII. Дальнейший анализ данных убедительно показал, что наиболее низкие значения экспрессии CD138 наблюдаются у различия значимы по сравнению с дисплазией III ст. больных с выраженной деградацией дифференцировки клеток эпителия гортани, т.е. при реализовавшемся раке гортани. Так, у больных РГ I стадии этот показатель равнялся 70,0 ± 8,5 (рисунок 18), при РГ III стадии – 42,8 ± 13,8. Указанные параметры были значимо ниже по отношению к уровню CD138 как в группах больных без предопухолевых изменений, так и у пациентов с диспластическими изменениями всех степеней.
На основании результатов, полученных в работе, маркер клеточной дифференцировки CD138 рекомендуется рассматривать в качестве дополнительного критерия для отбора пациентов с диспластическими изменениями II степени в группу риска по раку гортани. Показатели уровня маркера у пациентов с дисплазией III степени могут являться основанием для тщательного мониторинга, как кандидатов для развития плоскоклеточного рака гортани.
Таким образом, оценка динамики маркеров Ki67, p53 и CD138 у пациентов с хроническими воспалительными заболеваниями, ассоциированными с предопухолевыми изменениями I-III степени слизистой оболочки, а также раком гортани I и III стадий показала разнонаправленные значимые различия этих параметров на этапах злокачественной прогрессии. Полученные результаты дают возможность использовать эти маркеры в качестве дополнительных критериев для отбора больных в группы риска, а также для прогноза течения предраковых изменений гортани на этапах мониторинга у данного контингента пациентов. Рисунок 17 – Микрофото. Иммуногистохимическое исследование. Выраженная цитоплазматическая экспрессия CD138 в многослойном плоском эпителии гортани с Микрофото. Иммуногистохимическое исследование. Слабая мембранная экспрессия CD138 в клетках плоскоклеточного рака гортани, х400. 3.4. Оценка внеклеточного протеолиза при предопухолевых и опухолевых заболеваниях гортани Отсутствие четких критериев для формирования групп риска по раку гортани среди больных с хроническими заболеваниями диктует необходимость поиска дополнительных критериев, позволяющих выделять пациентов с высоким и низким риском малигнизации слизистой оболочки гортани. В литературе активно обсуждается возможность использования для этих целей определения матриксных металлопротеиназ (ММП), которые являются внеклеточными протеазами и участвуют практически на всех этапах опухолевой прогрессии [24, 29, 96]. Показана важность определения ММП и их тканевых ингибиторов в качестве потенциальных прогностических маркеров [25, 121, 173]. В мировой литературе нам не удалось найти публикаций о роли ММП в злокачественном трансформации в слизистой оболочке гортани, и об эффективности практического использования определении этих маркеров для выявления больных с диспластическими процессами с высоким онкологическим риском по раку гортани.
Изучение экспрессии генов матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов при предраке и раке гортани
Первым этапом исследования явилось изучение экспрессии генов матриксных металлопротеиназ ММП-1,-2,-9.-14 и ТИМП-1,-2. В работах, проведенных ранее, было показано, что клетки карциномы экспрессируют индуктор экстраклеточных матриксных металлопротеиназ EMMPRIN, который, находясь на цитоплазматической мембране опухолевых клеток, может увеличивать продукцию ММП-2 и ММП-9 клетками микроокружения, [28]. При анализе полученных результатов было выявлено, что экспрессия генов ММП-1, -2, -9, -14 и ТИМП-1, -2 определялась во всех исследуемых образцах: в опухолевой, прилежащей к ней неизмененной слизистой оболочки и ткани с предраковыми изменениями. Было обнаружено, что уровень экспрессии исследуемых генов в опухолевой и прилежащей к ней неизмененной ткани практически не различался. Вероятнее всего, обнаруженные нами не существенные различия в экспрессии исследуемых генов в опухолевой и неизмененной ткани, могут свидетельствовать об увеличении деструктивного потенциала опухоли. При этом полученные результаты согласуются с литературными данными [29].
Попарное сравнение экспрессии мРНК исследуемых генов в ткани диспластически измененного эпителия и в опухолевой ткани в группах больных РГ I ст. (T1N0M0) стадии и РГ III ст. (T3N0M0) стадии выявило значимые различия в экспрессии различных ММП (таблица 7). В частности, экспрессия ММП-2 была значимо выше в эпителии при наличии диспластических изменений, напротив, экспрессия ММП-9 была выше в опухолевой ткани, как в группе пациентов раком гортани T1N0M0 стадии, так и T3N0M0 стадии.
Исследование экспрессии генов ММП и ТИМП в зависимости от размера первичной опухоли позволило выявить слабую положительную корреляционную зависимость между размером опухоли и уровнем экспрессии гена ММП-14 (р 0,05; r=0,39), ММП-1 (р 0,05; r=0,60) и ММП-9 (р 0,05; r=0,50). При анализе взаимосвязей экспрессии генов ММП и ТИМП выявлено, что у больных раком гортани уровень ММП-14 ассоциировался с содержанием ТИМП-2 (р 0,05; r=-0,60). Полученные данные свидетельствуют о сложной регуляции ММП в злокачественных опухолях гортани.