Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1 . Эпидемиология и клинико-морфологическая характеристика рака молочной железы 9
1.2. Гормональная (эстрогенная) гипотеза развития рака молочной железы 12
1.3.Рецепторы стероидных гормонов и их роль в развитии рака молочной железы, клинико-прогностическое значение 17
1.4. Экспрессия рецепторов HER-2 в клетках рака молочной железы.. 29
1.5. Маркер пролиферативной активности Кі-67 в клетках рака молочной железы 33
Глава 2. Материалы и методы 40
2.1. Характеристика обследуемой группы пациентов 40
2.2. Иммуногистохимическое определение рецепторов эстрогенов, прогестерона, андрогенов, онкобелка HER-2, антигена Кі-67
в клетках рака молочной железы 41
Глава 3. Результаты собственных исследований 48
3.1. Морфологические, клинические и прогностические характеристики рака молочной железы в обследованной группе пациентов 48
3.2. Иммуногистохимическое определение содержания рецепторов эстрогенов и прогестерона в клетках рака молочной железы 52
3.3. Иммуногистохимическое определение содержания рецепторов андрогенов в клетках рака молочной железы 63
3.4. Содержание и экспрессия рецепторов андрогенов в клетках рака молочной железы с различными РЭ/РП-фенотипами 69
3.5. Иммуногистохимическое определение экспрессии онкобелка HER-2 в клетках рака молочной железы 81
3.6. Иммуногистохимическое определение экспрессии антигена Ki-67 в клетках рака молочной железы 95
Выводы 117
Практические рекомендации 118
Список литературы
- Эпидемиология и клинико-морфологическая характеристика рака молочной железы
- Гормональная (эстрогенная) гипотеза развития рака молочной железы
- Характеристика обследуемой группы пациентов
- Морфологические, клинические и прогностические характеристики рака молочной железы в обследованной группе пациентов
Введение к работе
Актуальность темы.
Рак молочной железы (РМЖ) является серьезной медицинской и социальной проблемой для большинства развитых стран мира. Несмотря на значительные достижения последней четверти века в понимании биологии и клиники заболевания, а также кардинальные изменения в подходе к лечению, проблема продолжает оставаться высокоактуальной.
К настоящему моменту сообщается более чем о ста факторах прогноза, дающих представление о биологическом поведении опухоли, а для предсказания клинического течения опухолевого процесса и исхода при РМЖ большое значение придается иммуногистохимическим маркерам [Пожарисский К.М., Леенман Е.Е., 2000].
Одними из первых вошедших в практику клеточных маркеров были рецепторы эстрогенов (РЭ) и прогестерона (РП), роль которых в генезе гормонозависимых опухолей доказана большим количеством исследований [Семиглазов В.Ф. и соавт., 1992]. Определение РЭ и РП в ткани опухоли сейчас рассматривается как обязательное условие для его успешного гормонального лечения РМЖ [Allred D.C. et al., 1998; Бернштейн Л.М., 2000; Семиглазов В.Ф., 2001]. Степень реакции на гормональную терапию также существенно зависит от наличия РЭ и РП в опухоли: ее эффективность составляет около 10 % при РЭ-отрицательных опухолях, примерно 50 % при РЭ-положительных опухолях и около 75 % при опухолях, содержащих одновременно РЭ и РП. Тем не менее, известны случаи резистентности к гормональной терапии больных с РЭ- и РП-положительными опухолями, поэтому гормонально-рецепторный статус опухоли оказывается не всегда достаточным показателем гормональной чувствительности РМЖ [Летягин В.П., 2004].
Исследования последних лет выявили, что злокачественные опухоли молочной железы в 50 % случаев содержат рецепторы андрогенов [Selim
5 A.G. et al., 2002], однако их роль в течении опухолевого процесса пока неясна. Предполагается, что в дополнение к рецепторам эстрогенов и прогестерона, рецепторы андрогенов могут быть важны в контроле за ростом РМЖ [Brys М. et al., 2002], а также в более тщательном отборе пациентов для проведения адекватной гормональной терапии [Zarghami N. et al., 1997].
Не вызывает сомнения тот факт, что эстрадиол индуцирует синтез
факторов роста [Бернштейн Л.М., 1998; 2000], рецепторы которых,
например, рецептор эпидермального фактора роста, имеют сходство с
некоторыми онкобелками. В их число входит мембранный гликопротеид
HER-2 [Wang D., 1993], являющийся членом семейства тирозинкиназных
рецепторов и одним из самых перспективных маркеров для предсказания
возникновения рецидивов заболевания, появления метастазов,
резистентности к химио- и гормонотерапии РМЖ [Slamon D. et al, 2001; Пожарисский К.М., Леенман Е.Е., 2000; Хансон К.П., 2002].
Ведущим фактором в механизме злокачественной трансформации
клеток, в биологическом поведении уже возникших опухолей является их
пролиферативная активность. Для выявления особенностей
пролиферации клеток злокачественных опухолей человека широко используется антиген Ki-67, экспрессирующийся практически во всех фазах митотического цикла и отражающий величину пролиферативного пула [Пожарисский К.М., Леенман Е.Е., 2000].
До сегодняшнего дня значимость отдельных вышеперечисленных маркеров, выявляемых иммуногистохимическим методом, остается недоказанной, кроме того, на сегодняшний день согласованного мнения о прогностической роли экспрессии рецепторов эстрогенов, прогестерона и, особенно, андрогенов, антигена Кі-67, онкобелка HER-2 и сочетания этих факторов нет.
Цель исследования
Комплексное изучение содержания и уровня экспрессии рецепторов эстрогенов, прогестерона, андрогенов, экспрессии онкобелка HER-2 (с-егЬВ2) и антигена Ki-67 и определение диагностической значимости этих маркеров, выявляемых иммуногистохимическим методом, для прогноза клинического течения рака молочной железы.
Задачи исследования
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
Изучить содержание и уровень экспрессии рецепторов андрогенов с одновременным определением содержания и уровня экспрессии рецепторов эстрогенов и рецепторов прогестерона в клетках рака молочной железы.
Изучить клинико-морфологические особенности течения рака молочной железы с различными гормонально-рецепторными фенотипами опухоли.
Определить экспрессию онкобелка HER-2 в клетках рака молочной железы с различными гормонально-рецепторными фенотипами.
Определить уровень экспрессии антигена Кі-67 в клетках рака молочной железы с различными гормонально-рецепторными фенотипами.
Основные положения, выносимые на защиту:
В клетках рака молочной рецепторы эстрогенов выявляются в 48 % случаев, рецепторы прогестерона - в 43 % случаев, рецепторы андрогенов - в 47 % случаев.
В клетках рака молочной железы рецепторы андрогенов выявляются в 69 % опухолей, содержащих рецепторы эстрогенов и прогестерона, и в 11% опухолей, не содержащих рецепторы эстрогенов и прогестерона.
Основными гормонально-рецепторными фенотипами рака молочной железы являются те, в которых отмечается одновременная
экспрессия рецепторов эстрогенов, прогестерона и андрогенов или
одновременное отсутствие рецепторов стероидных гормонов. 4. Опухоли, не содержащие рецепторы эстрогенов и прогестерона, а
также содержащие только рецепторы прогестерона, характеризуются
более злокачественным клиническим течением.
Научная новизна
Впервые проведено комплексное изучение клинико-лабораторных характеристик клеток рака молочной железы: содержания и уровня экспрессии рецепторов эстрогенов, прогестерона, андрогенов, онкобелка HER-2, антигена Ki-67 с применением высокочувствительного и специфичного иммуногистохимического метода.
Впервые отмечено, что опухоли, не содержащие рецепторы эстрогенов и прогестерона, а также имеющие только рецепторы прогестерона, характеризуются более агрессивным клиническим течением.
Впервые одновременно с рецепторами эстрогенов и прогестерона определили содержание и уровень экспрессии рецепторов андрогенов в клетках рака молочной железы, что позволило выделить дополнительную группу пациентов с опухолями, не содержащими рецепторы эстрогенов и прогестерона и имеющими рецепторы андрогенов.
Комплексный подход к изучению рака молочной железы с определением совокупности клеточных маркеров, выявляемых иммуногистохимическим методом, и сравнение их с клинико-морфологическими критериями прогноза клинического течения опухоли позволил выделить важную роль наличия и уровня экспрессии рецепторов прогестерона. Снижение уровня экспрессии рецепторов прогестерона в клетках рака молочной железы является важным предсказательным фактором низкой эффективности противоопухолевой гормональной терапии и может рассматриваться как показатель неблагоприятного прогноза клинического течения рака молочной железы.
8 Практическая значимость работы
Предложена программа комплексного лабораторного
иммуногистохимического исследования клеток рака молочной железы, включающая определение содержания и уровня экспрессии рецепторов стероидных гормонов: эстрогенов, прогестерона, андрогенов, онкобелка HER-2 и антигена Кі-67, для формирования прогноза клинического течения рака молочной железы и отбора групп пациентов для проведения адекватной гормональной и химиотерапии.
Выделены группы пациентов с опухолевыми фенотипами, обладающими неблагоприятными прогностическими и предсказательными характеристиками.
При отсутствии в клетках рака молочной железы рецепторов эстрогенов и рецепторов прогестерона рекомендуется дополнительное количественное определение рецепторов андрогенов чувствительным и высокоспецифичным иммуногистохимическим методом, что позволит в случае выявления в опухоли рецепторов андрогенов, выделить группу пациентов для дальнейшего клинического обследования и наблюдения с целью решения вопроса о выборе гормональной противоопухолевой терапии.
Апробация работы
Результаты исследования изложены в виде стендового доклада на
Международной конференции в г. Иркутске (сентябрь 2003 г.); на IV
Конгрессе по аутоиммунитету «NK-клетки (CD56, CD 16) и экспрессия
антигена Кі-67 в раке молочной железы с различным гормонально-
рецепторным статусом» (г. Будапешт, ноябрь 2004 г.); на
Международном конгрессе по РМЖ (г. Брюссель, январь 2006 г.).
Эпидемиология и клинико-морфологическая характеристика рака молочной железы
Инвазивный РМЖ занимает первое место и по данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) составляет около 22 % в структуре женских онкологических заболеваний [Parkin D.M. et al., 2001]. Регионами высокого риска является Северная Америка, Европа и Австралия, где у 6% женщин РМЖ развивается раньше 75 лет. Риск возникновения РМЖ значительно ниже в менее развитых регионах Африки, Юго-Западной Азии, где вероятность развития РМЖ до 75 лет составляет 1/3 от таковой в экономически развитых странах. Скорость роста заболеваемости РМЖ примерно одинакова везде. Япония - единственная из экономически развитых стран, которая демонстрирует низкий уровень и медленный рост заболеваемости РМЖ.
В России и странах Восточной Европы по данным ВОЗ уровень заболеваемости РМЖ составляет 49 на 100 000 человек ежегодно [Ferlay J. et al., 2003]. Этиология РМЖ мультифакторна. Факторы риска возникновения рака молочной железы условно можно разделить на эндогенные (связанные с внутренней средой организма) и экзогенные. К эндогенным относят факторы, характеризующие функционирование репродуктивной системы женщины (менструальная функция, фертильность, длительность лактационного периода и т.д.); гиперпластические и воспалительные заболевания яичников и матки; эндокринно-метаболические факторы, обусловленные сопутствующими и предшествующими заболеваниями (ожирение, гипертоническая болезнь, сахарный диабет, заболевания щитовидной железы (гипотиреоз), дисгормональные гиперплазии молочных желез); генетические факторы (РМЖ у кровных родственников). Под экзогенными факторами подразумевают ионизирующую радиацию, курение, химические канцерогены, Избыточное потребление животных жиров; высококалорийная диета. [WHO, 2003].
Согласно применяемой в настоящее время Международной гистологической классификации злокачественных эпителиальных опухолей молочной железы, одобренной ВОЗ, наиболее часто встречаются следующие формы РМЖ (в скобках указана частота встречаемости данного типа РМЖ в %) [WHO, 2003]. 1. Инвазивный протоковый рак (смешанного типа, плеоморфный и проч.) (59 %). 2. Инвазивный дольковый рак (4 %). 3. Тубулярный рак (4 %). 4. Медуллярный рак (8 %). 5. Слизистый рак (7 %). 6. Воспалительный рак (4 %). 7. Другие формы РМЖ (14 %).
Для адекватной оценки заболевания РМЖ, правильного выбора тактики лечения и вероятного исхода заболевания используют прогностические и предсказательные факторы [Пожарисский К.М., Леенман Е.Е., 2000].
Прогностические факторы - клинические, патологоанатомические и биологические особенности онкологических больных и их опухолей, которые предсказывают клинический исход заболевания, т.е. выживаемость и вероятность возникновения рецидива у пациента при отсутствии лечения. На практике это обычно означает результат хирургического лечения без дополнительной или вспомогательной терапии.
Предсказательные факторы - клинические, патологоанатомические и биологические особенности, которые используют для оценки вероятности ответа на специфическую адьювантную терапию. Общепринятым прогностическим фактором является возраст пациентов. Например, у пациентов моложе 35 лет статистически достоверно чаще встречается метастатическая форма РМЖ (метастазы в лимфатические узлы), что безусловно является признаком плохого прогноза течения заболевания [Albain K.S. et al., 1994; Nixon A.J. et al., 1994].
Гистологическая форма РМЖ является традиционным морфологическим фактором прогноза. Так, например, известно, что медуллярный РМЖ имеет более благоприятный прогноз по сравнению с инвазивным протоковым РМЖ [Maier W.P. et al., 1977; Jensen M.L. et al., 1997], а инвазивный дольковый РМЖ реже метастазирует в сравнении с инвазивным протоковым РМЖ [Lamovec J.et al., 1991].
Кроме того, очень важно оценить степень злокачественности РМЖ, хотя сегодня это не кажется столь неоспоримым. Многие патоморфологи считают, что для многих типов РМЖ (медуллярный, слизистый, дольковый и проч.) этот параметр бесполезен [WHO, 2003]. Выделяют 3 степени злокачественности. У пациентов с высоко злокачественными РМЖ, независимо от метастатической пораженности лимфатических узлов и размеров опухоли, чаще возникают отдаленные метастазы, хуже безрецидивная и общая выживаемость [Contesso G. et al., 1987; Fitzgibbons P.L. et al., 2000].
Наряду с выше перечисленными, к важным факторам прогноза относят размер первичной опухоли и наличие или отсутствие метастазов в лимфатических узлах. Чем больше первичная опухоль (в максимальном ее измерении), тем хуже прогноз. Даже среди пациентов с РМЖ 1 см и менее размер узла имеет прогностическое значение в отношении развития заболевания [Chen Y.Y.et al., 1998]. В большом количестве исследований показано, что с увеличением числа лимфатических узлов, пораженных метастазами, снижается безрецидивная и общая выживаемость [Fitzgibbons P.L. et al., 2000]. В последние десятилетия в связи с бурным развитием молекулярной биологии появились современные биомолекулярные маркеры, которые безусловно вносят свой вклад в оценку прогноза течения РМЖ. В настоящее время одним из таких маркеров признаны рецепторы стероидных гормонов: эстрогенов и прогестерона, выяснение роли которых в возникновении, развитии и течении РМЖ остается актуальным по сей день.
Гормональная (эстрогенная) гипотеза развития рака молочной железы
Еще больше вопросов относится к проблеме причин возникновения РМЖ. В течение нескольких десятилетий пристальное внимание ученых приковано к изучению проблемы гормонального канцерогенеза РМЖ. Несомненно, что и по объему выполненных исследований, и по их значимости для понимания механизмов гормонального канцерогенеза стероиды (прежде всего эстрогены) привлекали и привлекают к себе наибольшее внимание.
Интерес к эстрогенам применительно к проблеме гормонального канцерогенеза объясняется, пожалуй, следующими основными моментами: a) практической важностью (обусловленной, в частности, достаточно широким применением этих гормонов в качестве лекарственных препаратов); b) несомненным стимулирующим влиянием на процесс клеточного размножения в целом ряде тканей, чего нельзя сказать о большинстве иных стероидов.
Исходные экспериментальные исследования, их последующее развитие и теоретические обобщения привели к формированию современного взгляда на механизм гормонального канцерогенеза, который в кратком изложении сводится к следующему. Эндогенные и экзогенные эстрогены способствуют развитию новообразований, стимулируя размножение нормальных эпителиальных клеток; увеличение числа клеточных делений повышает вероятность случайных генетических повреждений [Yue W. et al., 2003], при определенном стечении обстоятельств возникающие мутации приводят к формированию условий для инициации и последующего прогрессирования процесса, что дополнительно поддерживается сохраняющейся избыточной гормональной стимуляцией [Henderson В.Е. et al., 2000]. Этот вероятный механизм гормонального канцерогенеза относят к так называемому промоторному типу. Вполне очевидно, что в отличие, например, от химического канцерогенеза в данном случае нет необходимости в специальном инициирующем агенте и элемент случайности играет довольно значительную роль [Hilakivi-Clarke L., 2000].
Гиперпластическому эффекту эстрадиола противопоставлена протекция прогестерона. Ранее показано, что реактивация экспрессии РП в стероид-рецептор негативных (РЭ-РП-) клетках РМЖ линии NDA-MB 231 помогает прогестерону ингибировать клеточный рост и инвазивность [Lin V.C. et al., 2003]. Таким образом, прогестерон предотвращает эстроген-индуцированное клеточное деление. Реализация этих эффектов осуществляется через тканеспецифичные экспрессируемые крупномолекулярные белки-рецепторы [Инг Нэнси Г., О Мэлли Берт У., 2003].
Антиэстрогенный эффект прогестерона реализуется двумя механизмами. Первый заключается в уменьшении количества рецепторов эстрадиола путем ингибирования их синтеза. Второй - в том, что прогестерон индуцирует 17Р-гидроксистерондегидрогеназу, которая превращает эстрадиол в менее активный эстрон [Lin V.C. et al., 2003].
В то же время исследования, проводимые на протяжении последних 10-15 лет, дают основания предполагать, что промоторный тип гормонального канцерогенеза не является единственно возможным и, очевидно, существует так называемый генотоксический вариант, связанный с действием некоторых эстрогенных метаболитов.
Действительно, эстрогены подвергаются окислительно восстановительными метаболическим реакциям, причем формирующимся метаболитам приписываются генотоксические свойства, а именно способность ковалентно связывать ДНК с образованием аддуктов. Эстрогены после конверсии в реактивные интермедианты, такие, как 4-гидроксиэстрадиол и 4-гидроксиэтистерон, оказывают повреждающее действие на геном [Бернштейн Л.М., 1998; Бернштейн Л.М., 2000]. Возникающим в результате мутациям приписывается важная роль в процессе неопластической трансформации эстрогензависимых тканей [LiehrJ.G.etal, 1997].
Существует также гипотеза, что продукты метаболизма эстрадиола могут реагировать с ДНК и удалять пуриновые основания. Этот процесс называется депуринизация. В норме эти повреждения ДНК репарируются. Вероятнее всего, процессы депуринизации и клеточной пролиферации протекают одновременно, синергично, дополняя друг друга и индуцируя развитие РМЖ [Yue W.et al., 2003].
Кроме того, наряду с вышеизложенными функциями, эстрадиол, не вызывая мутаций, способствует перерождению клеток-мишеней вследствие индукции синтеза факторов роста [Бернштейн Л.М., 2002].
Помимо накопления в тканях катехолэстрогенов и их метаболитов, несомненно, не меньшее значение для процесса гормонального канцерогенеза имеет повышение внутритканевой концентрации эстрогенов за счет их эндогенного внегонадного образования при участии фермента ароматазы.
Характеристика обследуемой группы пациентов
При выполнении настоящего исследования в обследуемую группу были включены 344 пациента Ленинградского и Псковского областных онкологических диспансеров, которым в период с июля 2002 г. по декабрь 2004 г. был поставлен диагноз РМЖ.
Всем пациентам проводилось комплексное обследование в условиях вышеперечисленных лечебных учреждений: осмотр врача-онколога, выполнение рентгенографического и ультразвукового исследования молочных желез. Для выяснения характера новообразования молочной железы выполнялось цитологическое исследование (тонкоигольная аспирационная биопсия) и гистологическое исследование (трепан-биопсия или операционный материал). При необходимости выполнялась остеосцинтиография.
Приготовление парафиновых блоков, срезов, окрашивание препаратов гематоксилином-эозином по стандартной методике и последующая верификация диагноза проводились специалистами патолого-анатомических лабораторий этих лечебных учреждений с последующим пересмотром гистологических препаратов и подтверждением диагноза РМЖ в лаборатории морфологических исследований ВЦЭРМа МЧС России.
Средний возраст пациентов составил 55±7,6 лет. У подавляющего большинства (у 280 из 344) пациентов, наблюдался инвазивный протоковый РМЖ, что составило 81,3 %. Вторым по частоте встречаемости РМЖ явился слизистый РМЖ (у 28 из 344 пациентов) (8,1%). Дольковый РМЖ отмечался у 13 из 344 пациентов (3,8 %). В 4 случаях из 344 был диагностирован тубулярный РМЖ (1,2 %); в 3 случаях (0,8 %) - медуллярный; в 4 случаях (1,2 %) - папиллярный. Другие формы РМЖ составили 3,6 % (встретились у 12 из 344 пациентов). Таким образом, соотношение различных гистологических форм РМЖ не противоречило аналогичным данным ВОЗ [WHO, 2003]. Практически с одинаковой частотой РМЖ обнаруживался в правой (48,9 %) и левой (51,1 %) молочных железах.
При оценке сопутствующих заболеваний были выявлены следующие особенности: почти четверть пациенток (24 %) страдали ожирением. Второй по частоте встречаемости у пациентов с РМЖ явилась гипертоническая болезнь (18 %). У 8 % - наблюдалось сочетание обоих заболеваний. Сахарный диабет отмечался у 7 % пациентов, а его сочетание с гипертонической болезнью - в 3 % случаев. У двух пациентов был диагностирован аутоиммунный тиреоидит. Одна пациентка перенесла хирургическую операцию по поводу овариоэктомии с маточными трубами в 1974 году.
Иммуногистохимическое определение РЭ, РП, РА, онкобелка HER-2, антигена Ki-67 проводилось в лаборатории морфологических исследований отдела клеточной патологии ФГУЗ Всероссийского центра экстренной и радиационной медицины МЧС России.
Современным методом определения рецепторов стероидных гормонов, онкобелка HER-2, антигена КІ-67 является иммуногистохимический. Это метод идентификации и определения локализации в клетке и тканях различных структур, имеющих антигенные свойства, основанный на иммунологической реакции «антиген-антитело» [Полак Дж., Ван Норден С, 1987]. Существует несколько вариантов постановки иммуногистохимической реакции: прямой иммунофлюоресцентный (ИФ), непрямой пероксидазный, с использованием растворимых ферментных комплексов: пероксидаза-антипероксидаза (ПАП), щелочная фосфатаза-антищелочная фосфатаза (ЩФВЩФ), авидин - (или стрептавидин)-биотиновый (ABC) и другие современные методы (EPOS, EnVision). Наиболее перспективными из вышеперечисленных методов являются высокочувствительные авидин-биотиновый и современные EPOS и EnVision.
В нашем исследовании использовался непрямой авидин-биотин пероксидазный метод. Этот метод основан на высокой аффинности авидина или стрептавидина к биотину (константа диссоциации 10-19 М). Авидин - это гликопротеин с молекулярной массой 68 кД, имеющий высокое сродство к биотину - витамину с малой молекулярной массой. Высокая чувствительность авидин-биотинового метода обусловлена химической структурой авидина, имеющего четыре участка для связи с биотином.
В этой технике неконъюгированные первые антитела связывают антигены. Затем добавляются меченные ферментом биотином вторые антитела, направленные против первых антител, которые выступают теперь в качестве антигена. После чего, добавляется раствор, который содержит авидин (стрептавидин), меченный пероксидазой хрена. Полученный комплекс проявляется с помощью субстрат-хромогена. Пероксидаза хрена в присутствии небольшого количества перекиси водорода катализирует окисление 3,3-диаминобензидина (ДАБ) с образованием нерастворимого золотисто-коричневого продукта.
Меченные пероксидазой хрена препараты можно обезвоживать, заключать в синтетическую среду и таким образом хранить долгое время, поскольку интенсивность окраски со временем не падает, как в случае иммунофлюоресцентной метки. Непрямой пероксидазный метод дает возможность визуализировать реакцию, используя для анализа обычный световой микроскоп.
При выполнении настоящей работы использовался авидин-биотиновый метод визуализации антител. Использовались первые антитела фирмы «Novocastra» (Великобритания) и фирмы «DAKO» (Дания). В качестве системы визуализации использовались ABC-Kit (universal) фирмы «Novocastra». Для выявления цветового окрашивания результата реакции использовался DAB фирмы «Pharmingen».
Морфологические, клинические и прогностические характеристики рака молочной железы в обследованной группе пациентов
На сегодняшний день известно большое количество клинических и морфологических прогностических признаков для РМЖ. К ним относят: возраст пациентов, размеры опухолевого узла, наличие метастазов и количество пораженных лимфатических узлов, степень злокачественности опухоли [Летягин В.П., 2004]. Исследование клинико-морфологических особенностей рака молочной железы выявило следующее.
У подавляющего большинства (у 280 из 344) пациентов, отмечался инвазивный протоковый РМЖ, что составило 81,3 %. Вторым по частоте встречаемости РМЖ явился слизистый РМЖ (у 28 из 344 пациентов) (8,1 %). Дольковый РМЖ отмечался у 13 из 344 пациентов (3,8 %). В 4 случаях из 344 был диагностирован тубулярный РМЖ (1,2 %); в 3 случаях (0,8 %) - медуллярный; в 4 случаях (1,2 %) - папиллярный. Другие формы РМЖ составили 3,6 % (встретились у 12 из 344 пациентов). Таким образом, соотношение различных гистологических форм РМЖ не противоречило аналогичным данным ВОЗ [WHO, 2003].
Практически с одинаковой частотой РМЖ обнаруживался в правой (48,9 %) и левой (51,1 %) молочных железах.
При оценке сопутствующих заболеваний были выявлены следующие особенности: почти четверть пациентов (24 %) страдали ожирением. Второй по частоте встречаемости у пациентов с РМЖ явилась гипертоническая болезнь (18 %). У 8 % - наблюдалось сочетание обоих заболеваний. Сахарный диабет отмечался у 7 % пациентов, а его сочетание с гипертонической болезнью - в 3 % случаев. У двух пациентов был диагностирован аутоиммунный тиреоидит. Одна пациентка перенесла хирургическую операцию по поводу овариоэктомии с маточными трубами в 1974 году.
С помощью корреляционного анализа по Спирмену была выявлена обратная взаимосвязь между степенью злокачественности РМЖ и возрастом пациентов. Коэффициент корреляции по Спирмену между показателями «средний возраст пациентов» и «степень злокачественности» составил г = - 0,89 (р 0,05).
У пациентов обследуемой группы встречались опухоли различных размеров. Минимальный размер выявленной опухоли составил 0,7 см, максимальный - 15 см. В ряде случаев при поражении всей молочной железы или воспалительной форме РМЖ определить размер опухоли не представлялось возможным.
С помощью корреляционного анализа по Спирмену было обнаружено, что размер опухоли прямо пропорционально коррелировал с возрастом пациентов (коэффициент корреляции по Спирмену г = 0,4). У пациентов пожилого возраста достоверно чаще (р 0,05) встречались опухоли крупных размеров.
Также обнаружена зависимость между количеством пораженных метастазами лимфатических узлов и размерами опухоли (коэффициент корреляции по Спирмену г = 0,32;). У пациентов с более крупными опухолями количество пораженных метастазами лимфатических узлов было достоверно (р 0,05) больше, в сравнении с пациентами с меньшими по размеру опухолями. Не установлено взаимосвязи между количеством пораженных метастазами лимфатических узлов и возрастом обследуемых пациентов.
Представленные в разделе 3.1 результаты в целом не противоречат данным литературы о взаимосвязи между степенью злокачественности РМЖ, возрастом пациента, размерами опухоли, наличием метастазов в регионарные лимфатические узлы, количеством лимфатических узлов, пораженных метастазами (Волченко Н.Н., Франк Г.А., 2000; Bloom H.J.G., Richardson W.W., 1957). Это позволяет рассматривать обследуемую группу пациентов как адекватную для анализа проведенных иммуногистохимических исследований.
Для изложения результатов собственных иммуногистохимических исследований мы выбрали следующий порядок. Сначала (в настоящем разделе 3.2) будут представлены данные исследования содержания и уровня экспрессии РЭ и РП, а затем в разделе 3.3 - будут изложены результаты исследования содержания и уровня экспрессии РА. Это связано, на наш взгляд, с удобством восприятия и поможет избежать повторений.
Иммуногистохимическое определение содержания и уровня экспрессии РЭ и РП (общепринятых маркеров гормональной чувствительности) было осуществлено в опухолях 344 пациентов с диагнозом РМЖ.
После проведенной иммуногистохимической реакции в гистологических препаратах рецепторы эстрогенов и прогестерона выявлялись в виде окрашенных в коричневый цвет (в зависимости от уровня экспрессии от светло-бежевого до темно-коричневого) ядер клеток РМЖ (рис. 4-7).
Похожие диссертации на Роль рецепторов эстрогенов, прогестерона, андрогенов, онкобелка HER-2, антигена Ki-67 в прогнозе рака молочной железы
