Содержание к диссертации
Введение
1 Введение. 5
1.1 Литературы ый о бзop. Химический состав, структура и; свойства жирных растительных масел 8
1.2: Выделение и исследование растительных масел. 17
1.3: Идентификация фенольных соединений 31
2. Результаты и их обсуждение. К вопросу о масличности семян: Arctium tomentosum МШ(лопух). 39І
2.1.2. Изучение физико-химических свойств масла лопуха. 42:
2.1.3. Выделение и идентификация химических компонентов масла лопуха. 66
3. Экспериментальная часть
3.1. Определение масличности 79
3.2. Физические константы:масла:лопуха. 80
3.3. Химические константы масла лопуха 82
3.3.1. Хроматаграфическая характеристика масла лопуха 91
Выводы 96
- Выделение и исследование растительных масел.
- Идентификация фенольных соединений
- Выделение и идентификация химических компонентов масла лопуха.
- Химические константы масла лопуха
Введение к работе
Создание новых высокоэффективных способов получения медицинских препаратов, из растительного сырья; и продуктов его переработки является одним из важнейших направлений: развития; химико-фармацевтической промышленности.
Продукты растительного происхождения таят в , себе неисчерпаемый- запас простых и сложных по составу органических компонентов. Изучение природных белков, ферментов, витаминов; гормонов, алкалоидов, антибиотиков и других биологически активных веществ, свидетельствует о важной роли этих компонентов в- жизнедеятельности живых организмов.. Многие: природные вещества имеют значение для развития теоретических представлений в органической и биологической химии; Они; также являютсяподходящими моделями, для синтеза органических молекул. Важной; проблемой на сегодняшний день является? получение И изучение биологически активных веществ, выделенных изфастений:
Однако строение природных.веществ не может рассматриваться вне.1 связи: с источником их получения; Поэтому извлечение биологически активных, компонентов из растений требует, применения; особых химико-технологических способові или индивидуальной разработки точных методов.
Особый! интерес в данном: направлении» вызывают, производные: двухатомных и многоатомных фенолов; присутствующих в: заметном количестве в; маслах дикорастущих растений; и придающих им; особые свойства;. Немаловажное значение в; маслах имеет состав триглицеридов; играющих существенную роль, w.их; высыхаемостиг и-накоплении полезных биологически?активных компонентов; В связи: с этим, проблема выделения- и; исследования новых органических компонентов, из продуктов неизученных растений; остается і важной и актуальной:.
Данная работа; посвящена; получению; из: плодов; дикорастущих растенийг жирных масел; которые- являются: уникальными лекарственными препаратами;в;медицине, .тем: более;что потребность в них удовлетворяется далеко не полностью.
Поэтому при: выполнении данной диссертационной работы основное внимание было направлено; на; выделение масла из семян дикорастущего лопуха, произрастающего в Рамитскомі предгорье Республики? Таджикистан, его фракционирование на составляющие компоненты с последующей; идентификацией1 и исследование физико-химических и биологических свойств.
Цели и задачи исследования
Основной целью работы является экстракция: мосла , из: семян дикорастущего растения Arctium tomentosum МІН. - лопуха большого исследование ею химического состава.
Для; достижения поставленной- цели необходимо было= решить следующие задачи:
- изучить динамику накопления масла в семенах дикорастущего растения A.tomentosum в природных периодах: созревания семян,, перед полным созреванием и после полного созревания;"
- провести экстракцию масла из сухих перемолотых семян разными органическими растворителями;
- определить высыхаемость выделенного масла;
- определить эфирное, кислотное, йодное, радановое числа и число:омыления масла; провести качественные \г количественные анализы выделенного масла с помощью хроматографии;
- разработать способы количественного определения;фенольных " соединений: в масле ти триметр и ческим,. потен цио метрически м- и гравиметрическим методами анализов;
- изучить физико-химические свойства полученного масла, и выделенных из него химических компонентов.
Научная новизна работы
- исследован химический1 состав, масла; экстрагированного хлороформом, этилацетатом? и? нормальным: гексаном:
- изучена динамика; накопления масла; в: трех периодах созревания- семян: и определено изменение: компонентного состава масла в: переходных периодах;
- разработана: новая; методика определения кислотного числа для фенолсодержащих масел;
осуществлены новые способы, выделениям чистого пирокатехина из масла путём- колоночной хроматографии; на; целлюлозе: осаждением; из; раствора , а также титри метрическим И; потенциометрическим методами титрования: определенно І количество; пирокатехина в масле;:
- разработаны оптимальные варианты хроматографического. (ТСХ)ї разделения отдельных компонентов: масла,, относящихся к алкалоидам; фенолам; триглицеридам, витаминам, свободным: жирным і кислотам и флаваноидам;
- установлено, что экстрагированное из семян A.tomentosum масло относится к невысыхающим маслам. Практическая значимость работы
На; основе полученных результатов-, по исследованию химического состава и сродстве обнаруженных компонентов в масле установлено, что они обладают как противовоспалительным; так. w антисептическим, свойством.
Разработанные методические подходы применимы? для? выполнения; аналогичных исследований и с другими типами растений:.
Разработанный новый способ определения: суммы, фенольных соединений в масле A.tomentosum посредством титрометрии, являющейся основой получения новой химической; константы "фенол ьное число" (ФЧ.), может быть использован как универсальный метод для определения содержания фенолов во всех растительных маслах..
Апробации: работы
Основные:положения диссертационной работы были:доложены и; обсужденьь на: Научно-теоретической конференции; посвященной 10-летию независимости Республики Таджикистан (ТІШУ,, Душанбе, 2001); Республиканской научно-теоретической конференции молодых, ученых Республики Таджикистан:- (Душанбе, Худжанд, 200 I,,2002:и 2003гг.); Республиканской:конференции «Достижения, в области? химии и; химических: технологий» (Душанбе,, 2002); Республиканской конференции «Актуальные проблемы;производства лекарственных препаратов на основе лесного сырья» (Душанбе, 2002):
По экспериментально полученным результатам две работы внедрены в:научно-исследовательский; и учебный; процесс ТїїНУ:: 11 «Способ выделения: пирокатехина из; фенолсодержащих; масел». Уведомление от. 04.01:2002: г;, НГОЩ РТ, заявка . № . 02000732 от 04:1112002 т.,
2: Новый способ: определения; фенолов в- растительных: маслах. Уведомлеие от 14:04:2003 г.. НПИЦ: РТ,. заявка; № 02000860- от 14:09:2003 г.
Выделение и исследование растительных масел.
Способ выделения растительных масел. Насыщенные кислоты очень просты и имеют одно общую формулу строения:: ЄпЬЬпСХ Ненасыщенные ЖЄ - - GnLihn Oiv наСЫЩеИНЫе ЖЄ СпШ О?, GnH2n i2 ЄпНзп-бОз, Gn.H2n.8vкак.видим; и насыщенные имеют простое-строение и интересы;главном главным образом своим: двойными связями; В химии существует очень подробная мето дика і исследования; растительных масел с целью познания их; свойств» и? химической природы. Общие методы, исследования растительных масел делятся; на физические и химические. Физические методы; - это- методы, определяющие температуру плавления, температуру застывания,, плотность и преломляющую способность (рефракция масел). К" химическим, методам относятся количественные определения так называемых ч и сел ил и ко н стант м ас ел. (йодно го- ИЧ1, ом ыл єн ия -ЧО., кислотного —КЧ!, эфирного —ЭЧ!, ацетильного, роданового): Самый: простой способ определениям температуры; плавления масла и жира, полученного любым из указанных способов; состоит в? следующем:;шарик термометра обволакивают,, опускают в\ стакан? пли иной; сосуд с водой и осторожно, подогревают воду (скорость повышения температуры не должна превышать 0,5Є в минуту). Когда шарик станет прозрачным, чистым и; следовательно, освободится; от жира, отмечают показатель температуры как точку плавления: Другой; способ определения? температуры, как; точки; плавления твердых масел,, капиллярный: Он состоит, в том, что = расплавленное масло набирают открытым?капилляром в достаточном количестве; ш оставляют; до следующего; дня. Нш следующий: день» чистый; снаружи капилляр с пробой; масла смачивают каплей: воды. Термометр? с капилляром опускают в г стаканчик с водой;, которую постепенно: нагревают,, при; этом отмечают: два: показателя температуры:: 1 -в начале размягчения, или плавления жира и т.д;: 2); в тот, момент.когда жир станет совершенно прозрачным;. Дляї определениям температуры- застывания? используют следующий: способ: Расплавленный жир; наливают в пробирку 16 см; длинной: и 3:5 см в диаметре; которую;затем помещают в--. сосуд; 10: см шириной и 13 см? длиной: В; расплавленный жир,, находящийся в пробирке, опускают термометр? т дают жиру остыть. Понижение температуры; сначала; происходит медленно, затем ртутный: столбик термометра делает скачок вверх; на несколько десятых градуса, после чего вновь.начинает опускаться; Наивысшее показание скачка и есть титр или температура застывания [31].
Плотность жидких жиров или масел в научных исследованиях определяется аїри температуре 20 С по отношению к весу воды, при t 4С\. Определение удельного- веса твердых и- жидких жиров производится при помощи пикнометпов различных конструкций [32]:. Из химических методов исследованиям масел наибольшее: значение имеет кислотное число. Одной из важнейших характеристик масел;, применяемых, в медицине, является; кислотное числом (КЧ:). K4L масла зависит от. качества сырья, способа получения , условий-хранения: и, в значительной степени; характеризует качество масла; Существуют различные титрометрическне методы.определения] КЧ. масел [33], Чаще всего в качестве растворителя используют низкие спирты, эфиры и их смеси. Титрантом обычно служит раствор едкого калия?-в этаноле. Точку эквивалентности, определяют: индикатором инструментальными методами [34]. Вї качестве индикаторов используют фенолфталеин, тимолфталеин.. Обычно масла содержат небольшое; количество= (до 2%) свободных жирных кислот [35]!. Высокое значение КЧ!, масла свидетельствует о его разложении, развивающемся1 при хранении в неблагоприятных условиях. При этом накапливаются свободные жирные высшие кислоты, а также жирные низшие кислоты и оксикислоты,. с нечетным числом атомов углерода; в; цепи;, которые: образуются- при глубоком; окислении жирных: ненасыщенных кислот [36] Впервые новыж метод; (потенциометрический) определения кислотного: чис л а был; представлен: И і В Ї Торбаном н:А.Б.. Зегел маном в" 1985 г: [37]: Разность, между титриметрическим- и потенциометрический методами СОСТОИТ В: том, что? в потенциометрическом; методе; точку эквивалентности переход, индикатора?: к малиновой окраске (фенолфталеин); определяют поскачку потенциала (табл: 3).- Иодное число; является важнейшим- показателем, характеризующим состав\ масла.-.. Оно выражает то количество йода в процентах, которое при; определенных условиях присоединяется к маслу. Принципиально присоединение галоида должно идти по месту двойных связей а йодное число должно: давать представление о сумме двойных: связей во всех= трех соединениях, которые образуют масло; По:величине йодного числа (ИЧО можно судить о содержании; в:масле глицеридов наименее-насыщенных,кислот, обуславливающих своим присутствием способность масла к высыханию. По литературным данным, йодное число льняного масла колеблется в довольно широких пределах Для определения йодного числа существует довольно- много методов. Произведенное Кауфманом сравнение методов їїюбеля, Конуса ш Вайса показало, что результаты определения этими методами йодного числа одних и тех же масел, колеблются:[39]1 Анализ І масла начинается обычно- с. определения его количества зі семенах, плодах или других, органах растения (процентное содержание).
Количество содержания масла, в; семенах-определяется-различными методами; по Соксклету, по Рушковскому (по обезжиренному осадку), йодометрическим, микрометодом; и быстрым количественным методом определения масла в числе семени,(методы Ермакова) [27]. Метод Рушковского [28] определения- жира по обезжиренному осадку очень удобен при массовых.определениях в поисковой; работе, а также для селекционных целей;; так как: позволяет очень быстро: определить процентное содержание масла; ИодометрическиШ микрометод определения масла в семени основан: на принципе экстракции и его окисления хромовой смесью.. В- промышленности, на маслобойных, и маслоэкстракционных заводах извлечение: масла из плодов; и семяш производится двумя способами? — прессованием и: экстрагированием: Прессование-наиболее: усовершенствованный способ; с применением гидравлических, прессов, различных систем. Прессование бывает холодное и горячее: При экстрагировании измельченные семена подвергаются: действию какого-либо: растворителя,, который затем, удаляется. Экстрагирование: также может быть холодное и горячее. Масла, полученные: прессованием, имеют светлую? окраску, несколько большее йодное число, больший; показатель преломления;. чем масла полученные; экстракцией; Экстракция изменяет цвет масла; придает ему темную окраску, увеличивает кислотность, а? следовательно, несколько ухудшает качество:масла; [29]; Кауфман указывает, что при определении йодного числа особенно необходимо считаться со свойствами анализируемого вещества, применяя для анализа- ту методику, которая обеспечивает получение более правильных результатов Если числовые выражения йодных чисел используются для вычисления количественного содержания; отдельных, кислот,, погрешности отдельных-, методов не имеютзначениячтичірименений однойи той же методики, так как во всех случаях будет получена одна:и та же ошибка. Не совсем точные цифры, BE таких, случаях будут между собой вполне сравнимы, и на основании их можно сделать выбор. По литературным данным,- показатель, преломления? для; льняных; масел сильно колеблется [41.];. Зависимость, величины показателя преломления от изменений в составе масла: послужила основанием ряда попыток найти математическую- зависимость между этим и другими показателями, определяющими характеристику состава масла. Из работ, проведенных в этом направлении [42-44],. особого внимания» заслуживают работы, некоторых узбекских: исследователей, установивших; зависимость между коэффициентом рефракции н йодным числом: Эти: методы1, широко используются при исследовании масла.
Идентификация фенольных соединений
Идентификация фенольных соединений основана1 на хроматографических методах (хроматография: на бумаге и тонкослойная), спектральных исследованиях, качественных реакциях и изучении продуктов расщепления [56]. Большинство природных фенольных соединений в УФ - свете флюоресцирует,, во многих случаях флюоресценция; появляется или меняет, оттенок: после предварительный обработки: хроматограммы парамш аммиака. Это свойство широко используется- при: анализе фенолов;, В-табл.9 приводятся сводные данные по; флюоресценции в-УФ-свете: некоторых важнейших груші фенольных соединений [57-58]1 Данные табл. 9 являются исчерпывающими. Например, салициловая кислота имеет синевато-красную флюоресценцию, не меняющуюся: при обработке: парами аммиака; п-кумаровая кислота флюоресцирует (сине-фиолетовая окраска) лить после воздействия napOB NH . Эфиры п-кумаровой кислоты с хинной? кислотой (п-кумарилхинные кислоты) показывают слабую синеватую-флюоресценцию в. УФ-свете, после обработки парами аммиака проявляется: четкая: сине-зеленая флюоресценция:. Эфиры; кофейной: кислоты- с винное и хинной кислотами имеют синюю флюоресценцию, сменяющуюся на зеленую прш воздействии- паров аммиака. Кумарин дафтенин (7,8 - диоксикумарин) виден;в;УФ свете как бледно- желтое пятно, в парах NH3 появляется яркая желтая флюоресценция. Флавоиы, флавононы и изофлавоны, не содержащие свободной оксигруппы, в положении С5 в УФ-свете, имеют светло -синюю флюоресценцию, обычно усиливающуюся; в, парах аммиака [59]; После просмотра хроматограммы в УФ-свете (без;обработки парами NH3 и с последующей обработкой) и. отметки- карандашом флюоресцирующих пятен для дальнейшей- идентификацию можно воспользоваться специфическими проявляющимисяфеактивами; [60]: Наиболее общим реактивом, используемым для? обнаружения всех групп:фенольиых соединений,-является хлорное железо (FeCb) [61]: Обычно используют опрыскивание хроматограмм 0,5-1,0% спиртовым; (метанол,, этанол) раствором.. Фенольные соединения проявляются, обычно? в: виде зеленых- или; синих: пятен: (однако агликоны флавинолов дают;бурую окраску а салициловая: кислота- — фиолетовую,, возможны, другие: исключения). Следует помнить, что взаимодействие с хлорными железом: - это) реакция на; фенольные оксигруппы: Естественно,. что; соединения: блокированными, оксигруппами (например,, глюкозид n-кумаровош кислоты) не. будут давать окраски с FeCI3 [62].
Ємесь свежеприготовленных; 1%-ных; водных растворов БеЄІз и: красной; кровяной; соли (K Fe(GN)6) дает с: полифеноламш яркую; синюю окраску вследствие образования; Берлинской лазури: Недостатком содержащих Fe проявляющих реактивов является: относительно малая специфичность, (сходную окраску дают, например;.. н екоторые индольны е с оединения); [63-64] I Из других наиболее часто используемых проявляющих реактивов следует упомянуть, диазотированные ароматические амины:, В: качестве: примера, можно: привести п-нитроанилиновый реактив. 25 мл 0,3%- нога раствора п-нитроанилина:в;80%- ной МС1: смешивают с 1,5 мл 5% -ным водным раствором нитрита натрия и полученной смесью обрабатывают хроматограмму. Через несколько минут хроматограмму дополнительно опрыскивают 20%-ным водным раствором №2СОз причем окраска: меняется различным образом, в зависимости от природы фенольных соединений [65]1 Этот проявитель особенно широко используется і при анализе фенолкарбоновых кислот [66-68]. п-оксибензоиная кислота; дает с ним? бледную желтую окраску, сменяющуюся на розовую» после опрыскивания раствором Ма2ЄОз. Ванилиновая кислота дает желтую окраску, переходящую в фиолетовую при обработке, раствором NasCCb; протокатеховая и галловая кислоты - желтую окраску,. переходяшую соответственно в серовато-синюю ш светло-коричневую; сиреневая кислота - желто-оранжевую окраску, переходящую в сишою. Среди коричных кислот n-кумаровая: дает коричневато-желтую окраску, сменяющуюся пpи-oбpaбoткe Na2COз на;синюю, кофейная кислота — коричневато-желтую,, сменяющуюся на-светло-синюю,, синаповая кислота - розовую; сменяющуюся на сине-зеленую [69]. Помимо п-нитро анилина,, с этой же: целью часто применяют сульфаниловую кислот) (25 мл 0,3%-ного раствора сульфаниловой кислоты в 8%-ной НС1 смешивают перед опрыскиванием с 1,5 мл 0,7-5%-ного водного раствора нитрата, натрия. Как; va ъ случае п-нитроанилина,. необходима- последующая; обработка хроматограммьг раствором Na2C05), сульфаниламид иібензидин [Ї70]: В некоторых; случаях, для; идентификации фенолкарбоновых кислот, нахроматограммах используют треххлористую: сурьму (34 г треххлористош сурьмы, растворяют в:. 100; МЛІ хлороформа; полученным; раствором, опрыскивают хроматограмму и. затем; нагревают ее: 5 мин: при 100С) [У0].. С этим реактивом галловая кислота дает, светло-розовую окраску (в УФ-свете - темно-пурпурная; флюоресценция), протокатеховая; кислота не проявляется; но- в УФ-свете дает: слабую розовую флюоресценцию, п-кумаровая; кислота: дает синевато-пурпурную окраску (в: УФ-свете - пурпурная), кофейная кислота - пурпурную (в УФ- свете. — не: флюоресцирует); феруловая; кислота — пурпурную: {в- УФ—свете - синевато-серая), синаповая кислота - не проявляется; но- в, УФ-свете дает сине-зеленую флюоресценцию. Флавонолы: при такой обработке треххлористой; сурьмой в! видимом; свете не проявляются, а. (+)-катехин; и флороглюцин: дают коричневую: окраску, постепенно-сменяющуюся на серую (в УФ-свете - пурпурная: флюоресценция) [71].
Для флавоноидных соединении обычно используются другие проявляющие: реактивы. Гак, катехины и. лейкоантоцианьї: (а также: проантоцианидины) дают оранжево-красную или фиолетово-красную окраску при опрыскивании хроматограммы ванилиновым реактивом (І%-ный раствор ванилина в концентрированной НС 1 і или смесь 10% -ного этанольного раствора ванилина с концентрированной серной:кислогой-в соотношении : 1) [72]; Лейкоантоциапы и проантоцианидины: можно отличить от катехинов- выдерживая хроматограмму в парах НСІили опрыскивая смесью 0,5 мя концентрированной НО с 20 мл п-пропанола, с последующим нагреванием в течение 2 мин. прп:105С -образование окрашенных в розовый или красно-фиолетовый цвет пятен (антоштнидшюв) свидетельствует о присутствии первых двух групп соединений і (или одной из них) ,.і то с кольку в этих условиях: катехины остаютсяшибо бесцветными, либо желтеют [68] j [Г70] -, Флавонолы можно отличить от флавонов: при? опрыскивании хроматограммы раствором уксуснокислого свинца; Флавоньг дают желтую окраску, флавонолы - красную ил И; оранжево-красную:.. Бесцветные флаваноны могут быть переведены? обработкой разбавленными растворами щелочей, в окрашенные-халконы. При опрыскивании хроматограммы !% -ным метанольным раствором хлористого алюминия флавоны. и флавонол 3—гликозиды приобретают характерную желтую флюоресценцию; а. агликоны флавонолові интенсивную желто -зеленую; флюоресценцию; Антоцианы, халконы и; ауроньг можно? различить, по; собственной интенсивной? окраске [72-75]; ІіЗШ ИК— и ЯМР— спектроскопии фенольных соединений; Значительно меньшее распространение, в; исследовании, фенольных соединений получила; инфракрасная (ИК)-спектроскопия: Она- позволяет обнаружить ряд- характерных группировок,, например-метоксильные группы,, спиртовые и фенольные окис: группы-сложноэфирные группировки, карбонильные: группы пиронового цикла- флавоноидов ш пиронового цикла кумаринов. ИК-спектро скопил- может быть также применена для изучения строения флавоноидных гликозидов.
Выделение и идентификация химических компонентов масла лопуха.
При действии спиртового раствора FeC на раствор масла в изопропаноле появилось зелено-изумрудное окрашивание, которое при добавлении раствора Ыа СОз переходило в красный цвет [67]. б) Количественное определение пирокатехина. Для; количественного определения пирокатехина: в. масле использовали колоночную хроматографию (для= этого- использовали; хроматографичсский прибор ТЄВ(рис.9)); титриметрический- метод и метод осаждения из раствора. Хромато графически ш способ заключался? в.пропускании через колонку с целлюлозным носителем хлороформешюго раствора масла с последующим элюированием хлороформом на четыре фракции (А, Б, В, Г) (рис. 9). Пирокатехин былобиаружен и выделен в чистом виде из фракции (Б) упариванием растворителя с 25%-иым выходом [108]1. Технология хроматографирования приведена на рис. 11. Следующий способ определения пирокатехина; заключался в визуальном; титровании масла щелочью в изопропаноле. Следует отметить,,что масло содержало свободные жирные кислоты;.которые могли бы одновременно титроваться вместе с: фенолами: Для предотвращения этого пришлось блокировать карбоксильную группу органических кислот ДЦГКД-ом, который, реагируя;с кислотами, не затрагивал фепольиых гидроксильных групп, обладающих невысокими величинами РЬСА. Количество пирокатехина в мг определяли по объему титра; израсходованного на нейтрализацию пирокатехина. В качестве эталона для= сравнения, брали пирокатехин (реактив).. Содержание пирокатехина в масле из хлороформа, определённого, этим методом, соответствовало 23%. Третьим способом количественного определениям пирокатехина, было осаждение пирокатехина в, виде: кристаллов из насыщенного гептанового раствора масла путем охлаждения: При -3: -5С втечение 10-1-2 ч.Этим:способом из масла: извлекали до 23% пирокатехина: ТСХ анализ выделенного из масла пирокатехина в системах ХЛ:ЭА (1:1), ХЛ:Ме-ОН:УТС к-та; (1:1:0Д) и; БН:ХЛ (2:1): показал идентичность и гомогенность его с пирокатехином-эталоном; взятом в качестве сравнения. Rf выданного пирокатехина в системе и пирокатехина-эталона были одинаково равны 0,8; 0,78 ;0,6 соответственно, т.пл:104- 105С, {лит 105. УФ И; ИК - спектры выделенного пирокатехина из масла полностью совпадали со спектральными характеристиками пирокатехина эталона; взятого для сравнения [84].
Далее гидролизат обработали 0-IN серношкислотной-до рН7, и освободившуюся свободную кислоту экстрагировали? смесью хлороформ: этилацетата (1:1). Упаривая органическую часть, получили І смесь-, органических кислот. ТЄХ № БХ анализы гидролнзата показали, что гидролиз проходил нормально,, т.к. проявление хроматограмм спиртовым раствором бромфеноловым синим индикатором (реактив для обнаружения свободных жирных кислот) и появление в трех точках синего цвета на хроматограмме (проявитель имел желтый цвет)? свидетельствовало- о присутствии свободных жирных кислот. Путем скапливания: трех хроматографических пятен на; ТСХ пластинках, проведенных в системе БН:ХЛ (2:1)г и ХЛ:ЭА (1:1) и элюированием смесью хлороформ; -г этилацетат (1:1), удалось получить в свободном виде пальмитиновую, олеиновую и бегимовую кислоты путем идентификации с оригиналами; Идентичность, полученных соединению проверяли- путем = ИК-спектрометрии, где были зафиксированы; спектры поглощения в области 1350 -1450 см , характеризующие наличие: карбоксильной группы. Также использование метод сравнения коэффициентов, распределения Rf [84]JB системе пиридан- бензол - уксусная кислота (2:1:0,1), сравнивая экспериментально полученный Rf кислот с литературными данными, где результаты в обоих случаях были идентичными. Температура плавления; и коэффициент рефракции выделенных кислот также соответствовали литературным данным [84]. Далее ги др о л шат обработали 0, IN. серной: кислотной до рН7, и освободившуюся свободную кислоту экстрагировали? смесью хлороформ? : этилацетат (1:1)- Упаривая органическую часть,, получили; смесь органических кислот. ТЄХ и; БХ; анализы гидролизата показали, что гидролиз проходил нормально,, т.к.. проявление, хроматограмм спиртовым раствором бром феноловым синим индикатором (реактив для обнаружения: свободных, жирных кислот) и; появление: в трех точках синего; цвета на : хроматограмме-(проявитель имел: желтый цвет)? свидетельствовало о присутствии! свободных жирных кислот. Путем скапливания трех хроматографических пятен на ТЄХ пластинках, проведенных в системе БН:ХЛ (2:1); и? ХЛ:ЭА (1:1) № элюированием смесью хлороформом; -г этилацетат" (1 :1=),. удалось, получить в свободном: виде пальмитиновую, олеиновую-и-бегимовую кислоты путем и дентификации с оригиналами.
Идентичность, полученных соединений проверяли; путем; ИК-спектрометрии;, где: были- зафиксированы! спектрьт поглощения в; области 1350 -1450 СМЇ1,.характеризующие1 наличие карбоксильной группы,; Также использовали метод: сравнения; коэффициентов распределенияfRf.[84]-в системе пиридан — бензол - уксусная кислота; (2:1:0;!),. сравнивая; экспериментально полученный Rf кислот с литературными? данными; где результаты в обоих случаях были идентичными; Температура-.-плавления и коэффициент рефракции- выделенных кислот также соответствовали литературным данным[84]: Фракция (В) была пропущена через колонку, наполненную порошком целлюлозы (01-0,2 мм), в качестве элюента использовали смесь хлороформ + бутилацетат (1:1). Элюант был. собран? в 95 пробирках по 5 мд посредством автоматического; коллектора фракции;. Присутствие компонентов проверяли; по изменению оптическошшютности выделенных фракций при длине волны 370 нм с: помощью СФ - 26. В результате были выделены. двеьфракции в кристаллическом виде (а) и (б) (рис. 14). Они были подвергнуты ТСХ анализу. Обнаружили, что фракция (а) состоит из двух компонентов, а фракция (б) из одного компонента. Качественная, реакция с 1% раствором; SnCI3,. дающая; синюю окраску, свидетельствовала о присутствии: витамина Р (рутин) в спиртовом растворе фракции (б). Действие раствора бромфенола синего- на сииртовый раствор фракции (а) показало содержание свободных жирных кислот, которые были разделены! друг от друга путем скапливания хроматографических пятен с дальнейшим элюированием. Анализы приведенные аналогично в разделе 2-ш показали, что этими, кислотами являются олеиновая (1",3%) и: стеариновая; (0;6%) кислоты: Для отделения алкалоидов от глицеридов, присутствующих во фракции (Г), использовали метод осаждения из раствора, для этого фракцию (Г) растворяли в метаноле, не растворившуюся часть отделяли и исследовали хроматографически УФ- и ИК-спектрофотометрически. В результате установили, что осадок состоит из смеси глицеридов, где значения ИК—спектра были следующими: УФ 1тах 290 -325, ИК-спектр 1200, 1500, 1550, 1800, 2700, 3000, 3400 см"1 (рис. 16). Для подтверждения проводили гидролиз данной смеси и обнаружили присутствие свободных жирных кислот: олеиновую, стеариновую, пальмитиновую, линолевою, линоленовую, арахриновую и бегиновую кислоты, структуру которых определяли физико-химическими методами: т. пл., 1п\ л ИК -, УФ- спектром. Некоторые ИК—спектры выделенных связанных кислот переведены на рис. 17 и 18. Также сравнивали Rf этих кислот с эталонами, которые оказались идентичными.
Химические константы масла лопуха
Для; определения суммы органических кислот в масле потенциометрическим методом титрования использовали; рН-метр миливольтметр-150 (СССР), в качестве сравнения; брали: масляную, пальмитиновую и стеариновую кислоты.. Приготовили 0,1 N растворы карбоновых кислот в изопропкловом; спирте; Затем- брали но 2:мл-из каждого раствора, потом добавили в каждый образец! 5 мл изопронанола и= оттитровали 0,1 N раствором гидроксида. калия в изопропаноле,. капая из микробюретки,- перемешивая магнитной мешалкой:. Точку эквивалентности определяли; по скачу потенциала: (табл. 19). В качестве индикатора использовали стеклянный электрод. Вслед за этим; проводили1 холостой: опыт. Брали по 30 мл изопропанола в двух: стаканчиках, в один из них добавляли 0,5 г N.N ДЦГКД с перемешиванием на магнитной: мешалке. Титровали 0,3 н раствором КОН в изопропаноле. Объем титранта, пошедшего на холостой опыт без добавление ДЦГКД составляли 0,03 мл; а с: добавлением ДЦГКД 0,04 мл. КЧ. определяли; по; приведенной формуле на:стр 48, КЧ. который равен 7,2 мг КОН/г. Брали: две навески масла по L г, экстрагированного этилацетатом, растворяли в 30 мл изопропанола. К одной из них добавляли 0,5г N.N ДЦГКД- тщательно перемешивали магнитной мешалкой и оставляли на. сутки. Затем раствор титровали 0,3 н. раствором КОН в изопропаноле, точку эквивалента; определяли по скачку потенциала. Затем тожесамое: проводили со второйшавеской Брали: две навески по 0,5 г и: работу выполняли аналогично 1ШЗ:2.в.. Объем титранта, пошедшего на титрование; масла в отсутствии ДЦГКД, 0,25 мл, а в присутствии ДЦГКД- — 0,24 мл.
Вычисленное значение КЧ. масла,.равно 2,6 мгКОН/г. Ш.З.2.Г. Определение КЧ. растноров органических кислот Бралш 2і стаканчика, в них поместили; по:0,05т. пальмитиновой, 0,05- г стеариновой кислот и. 0,1 г резорцина;. Содержимое растворяли в изопропаноле (по 10 мл), в один из: стаканчиков прибавляли 0,5 г ДЦГКД; перемешивали па магнитной: мешалке; в течение 30 минут н оставили; на сутки, титровали аналогично ІІІІ 3. 2. (б): Объем титранта при титровании соответствовал; 0,65; мл, аналогично поступили со вторым раствором без ДЦГКД: Объем, титранта: в этом: случае равен 1,1мл; а также; объем титранта, пошедшего на титрование: в? холостом; опыте с ДЦГКД- составил: 0 065: мл а без, ДЦІ7КДІ - 0,035 мл;. Вычисленное значение; КЧ; искусственного раствора составило 73-9 мг/КОН/г. Ш.33!;а..Определение ИЧ1 масла;семян собранных после полного созревания В"двух литровых, плоскодонных колбах, содержащих по 250 МЛ: 95%-ного этилового; спирта,, растворял и: отдельно: по 25 г_ йодашіЗО г сулемы (HgCl?): Перемешав оба раствора; их объединяли;, выдерживая в течение 12 часов: В трех стаканах раздельно; взвешивали: определенное количества масла (таблица 21); В каждый; стакан: налили: определенный объем; приготовленного; реактива-Гюбела (J +HgCl +CSHsOH) до появления; устойчивого кофейного цвета. Точно такие же объемы без; масла приготовили для слепого опыта. Затем из микробюретки; титровали; каждый; объем; 0,1N тиосульфатом натрия (Na S O ) до исчезновения кофейного цвета. Опыты повторяли трижды для получения среднего результата. g где: а- объем 0,1 NNa2S203,.пошедший на титрование в слепом опыте: в-.- объемО,] N Na2S203v пошедший на титрование: в опыте с: навеской; масла: (мл); gr:- навеска масла в граммах; Результаты, полученные по ИЧ., приведены в таблице 22; ПШ;3.б. Определение ИЧ1,масла из семян собранных:в период плодоношения шиеред полным созреванием Аналогично Ш.З.З.(а) к. 1,240 г масла добавляли; 7 мл приготовленного реактива Гюбеля и титровалт титрантом (0,1 N NaoS O],)- Параллельно проводили холостой: опыт. ИЧ-. масла, из семян, собранных в период плодоношения и; перед полным созреванием, равно 22 г и 16 г соответственно. В: двух круглодонпых колбах,, снабженных обратным холодильником, помещают но- Г г КОН и растворяют в- 40 мл изопропанола. К одному из приготовленных раство ро в і добавляют 1,7 г масла, полученного экстрагированием н.гексаном.
Растворы кипятят при1 температуре 85-90 G в течение 30 минут. Затем в І оба образца?(в горячем состоянии) добавляют 4-5 капель.0;]% раствора фенолфталеина (в спирте) ш титровали 0,1 н HGli до исчезновения малиновой окраски. На титрование пошло 275 мл, а:на?слепошопыт 226 мл. 40. омыления определяли по формуле: а.-объемтитранта, пошедпіего на титрование в слепом опыте (мл); в- объем титраша, пошедшего на титрование в. опыте-с навеской. масла (мл); THTPOUNHGI; g: -навеска масла (г) 40:. определяли; аналогично определению ЧО; других, образцов масла; экстрагированных этилацетатом;; w хлороформом;, ш которые составляли 259 мг КОН/г и 280 мгКО НУг соответственно; 1ШЗ:41б. Определение ЧО; масла;, собранного в;период плодоношения (А) и; в пери од-полным созреванием (Б) В трех круглодонньш колбах, содержащих по tr KQ ffi добавляют по: 30 мл- изопропанола И: перемешивали до полного растворения: К двум! из: растворов добавляют по; 0;5; п свежеэкстрагированного масла: из: семян, собранных в период; плодоношения. (А) ; и в і период перед І полными созреваниеМі (Б); Далее титровали аналогично методике. III.3.4;(а). Объемы титрантов, пошедшие на титрование масла из семян, собранных в период плодоношения и в период перед полным созреванием, составил 103 мл и 122 мл соответственно. На основе полученных, данных вычисляли; ЧО. но вышеприведенной формуле;, значения которого для (А) составило 75мг КОНЕ/г, а для (Ь)-209 мп КОЫ/г. ЭЧ.. определяли по разнице между числам-; ЧО: ш КЧ: согласно формуле ЭЧ. = ЧО.-КЧ. где:ЧО; — число омыления (мгКОН/г); КЧ. - кислотное число (мг КОН/г); 1. ЭЧ. для масла, экстрагированного хлороформом, этилацетатом и гексаном, из созревших семян; равно 210 227 и, 159,94 мг/КОН/г соответственно. 2. ЭЧ: масла, экстрагированного хлороформом; из: семян, СОбранИЫХ В. ПерИОД ПЛОЛОНОШСШШ- И В ПерНОД Передо ПОЛНЫМ1 созреванием; равно 30,74 и 167,97 мг КОН/г соответственно; II 1.3.6. Определение фенольного числа (ФЧі) масла; экстрагированного хлороформом, этилацетатом и н.гексаном В; трех конических колбах поместили: соответствующее количество масла (табл; 23), экстрагированного хлороформом этилацетатом; и шгексаном: К каждому образцу добавляли1 пог30 мл-изопропанола и- перемешали;; до полного: растворения;. Затем; к раствору добавляли по0,5 г N,N= Д1.ЩКД, энергично? перемешивали? наї магнитной мешалке в течение 30 минут и оставляли- на сутки. Затем раствор:титровали 0;3N КОН;в;изопропаноле:(индикатор-0,1%. спиртовой раствор фенолфталеина); Точку эквивалентности определяли по появлению малиновой; окраски: раствора. Вслед і за; этим: проводили холостой; опыт: брали 30 і мл; изопропанола; добавляли 0 5 г N,N ДЦГКДі и титровали; 0, И N КОНІ в изопропаноле.
