Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк ПУПЛАМПУ ДЖОШУА БУЕР

Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк
<
Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк
>

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

ПУПЛАМПУ ДЖОШУА БУЕР. Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк: диссертация ... кандидата химических наук: 02.00.03 / ПУПЛАМПУ ДЖОШУА БУЕР;[Место защиты: Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет"].- Казань, 2015.- 120 с.

Содержание к диссертации

Введение

ГЛАВА 1. Взаимодействие производных (тиа)каликс[4]арена с нуклеиновыми кислотами (литературный обзор) 11

1.1 Синтез и строение тиакаликс[4]аренов 12

1.2 Функционализация (тиа)каликс[4]аренов аминными, аммонийными и гуанидиниевыми группами и их взаимодействие с нуклеиновыми кислотами

1.2.1 Синтез амино- и аммонийных производных (тиа)каликсаренов и их взаимодействие с нуклеиновыми кислотами 14

1.2.2 Синтез гуанидиниевых производных (тиа)каликс[4]аренов и их взаимодействие с нуклеиновыми кислотами 19

1.2.3 Синтез амино-, аммонийных и гуанидиновых мультикаликсаренов и их взаимодействия с нуклеиновыми кислотами 25

1.3. Макромолекулярные системы с амино-, аммонийными и гуанидиновыми группами и их взаимодействия с нуклеиновыми кислотами 28

1.3.1 Природные макромолекулярные системы для доставки генов 28

1.3.2 Синтетические макромолекулярные системы для доставки генов .. 29

1.3.2.1 Катионные липиды 30

1.3.2.2 Катионные полимеры 31

1.3.2.3 Предорганизованные макромолекулы 32

ГЛАВА 2. Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк (обсуждение результатов) 34

2.1 Синтез п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов, функционализированных по нижнему ободу трис(2-аминоэтил)аминными фрагментами 37

2.2 Синтез п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов, функционализированных по нижнему ободу полиаминными фрагментами 46

2.3 Синтез производных п-трет-бутилтиакаликс[4]арена, функционализированных по нижнему ободу фрагментами N-(2-гидроксиэтил)этилендиамина, и их взаимодействие с метилакрилатом 54

2.4 Синтез п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов, функционализированных по нижнему ободу N-(2-аминоэтил)пропанамидными и N-(3-(3-ами нопропиламино)пропил)пропанамидными фрагментами 60

2.5 Взаимодействие производных п-трет-бутилтиакаликс[4]арена с модельными биомембранами на основе дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC) 64

2.6 Взаимодействие полиаминов на основе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов с ДНК 69

2.6.1 Изучение взаимодействия полиаминов на основе п-трет бутилтиакаликс[4]арена с ДНК методом УФ спектроскопии 69

2.6.2 Изучение взаимодействия полученных соединений с ДНК методом динамического светорассеяния (ДСР) 71

ГЛАВА 3. Экспериментальная часть 89

3.1 Синтез и подготовка исходных реагентов и растворителей 89

3.2 Методы эксперимента 100

Заключение 103

Список условных обозначений и сокращений 105

Список использованных библиографических источников

Синтез амино- и аммонийных производных (тиа)каликсаренов и их взаимодействие с нуклеиновыми кислотами

Адресная доставка полинуклеиновых кислот в клетку (трансфекция) с терапевтической целью сильно ограничена рядом препятствий, начиная с клеточной мембраны до экспрессии гена. Для преодоления клеточных барьеров требуется использование носителей генов – вирусных и невирусных векторов. Невирусные векторы, в основном, не вызывают иммунный ответ организма. Они легко синтезируются, обладают способностью переносить генетический материал неограниченного размера, а также относительно безопасны [1,2]. Одним из актуальных подходов, используемых при разработке синтетических невирусных векторов, является функционализация легко доступных молекулярных платформ группами-рецепторами (амино-, аммонийные и гуанидиниевые группы), способными взаимодействовать с нуклеиновыми кислотами. Известно, что макроциклические соединения, содержащие аналогичные группы, эффективно взаимодействуют с биологическими субстратами. Поэтому не удивительно, что множество биомиметических рецепторов были разработаны с применением синтетических рецепторных платформ, таких как краун-эфиры, криптанды, порфирины, каликсарены, тиакаликсарены и циклодекстрины [3–12].

В литературном обзоре рассмотрены последние успехи в разработке и создании синтетических векторов, а также принципы, лежащие в основе их взаимодействий с нуклеиновыми кислотами. Основное внимание уделено рецепторам на основе (тиа)каликсаренов, которые интенсивно изучаются последние сорок лет. Этот тип макроциклов является синтетически легко доступным и представляет собой уникальный трехмерный каркас, который может быть функционализирован разнообразными группами с формированием различных рецепторных фрагментов на катионные, анионные и нейтральные субстраты [13,14].

Замена в классическом каликс[4]арене 1 метиленовых мостиков на атомы серы заинтересовала исследователей два десятилетия назад [15]. Тиакаликс[4]арены 2, как новый класс в семействе каликс[4]аренов 1, получены не так давно и до недавнего времени были мало изучены. Однако сейчас ученые уделяют пристальное внимание исследованию тиакаликс[n]аренов благодаря их уникальным свойствам [15]. Размер их полости больше, а сульфидные мостики могут быть окислены [16–19], что приводит к появлению новых рецепторных свойств [9,20–30].

Наиболее предпочтительными методами синтеза п-трет-бутилтиакаликс[4]арена 2 являются одностадийный метод, согласно которому смесь п-трет-бутилфенола и элементной серы нагревается в присутствии основного катализатора NaOH (выход 54%), и двухстадийный метод, в котором промежуточным реагентом является димер п-трет-бутилфенола с сульфидным мостиком (выход 83%), а также их модификации [15,31]. Как и для каликс[n]аренов, различные конфигурации тиакаликс[n]аренов, а также возможность модифицировать их сульфидные мостики, верхний и нижний ободы, делает их перспективными синтетическими рецепторами на различного рода субстраты. Алкилирование фенольных гидроксилов нижнего обода тиакаликс[4]арена хорошо изучено [15,32,33]. В связи с этим большой интерес представляют тетраацетатные стереоизомеры 3-5 [34], получаемые алкилированием тиакаликс[4]арена 2 этилбромацетатом. OEt QEt

Комформационная гибкость тиакаликс[4]аренов делает их удобными строительными блоками для конструирования на их основе рецепторных систем, содержащих производные карбоновых кислот, амиды и прочие функциональные группы [15]. Поэтому они часто используются как промежуточные соединения для дальнейшей функционализации тиакаликсареновой платформы.

Функционализация (тиа)каликс[4]аренов аминными, аммонийными и гуанидиниевыми группами и их взаимодействие с нуклеиновыми кислотами

Липофильная природа каликсареновой платформы ограничивает биологическое применение метациклофанов вследствие их низкой растворимости в воде. Поэтому для повышения их гидрофильности, к макроциклической платформе присоединяют различные полярные группы. Однако растворимость метациклофанов в большей степени определяется индивидуальными особенностями их структуры [15]. Обычно для повышения растворимости (тиа)каликс[4]аренов в водных средах по нижнему/верхнему ободу макроцикла вводятся амино- и/или гуанидиновые группы [3,35–40]. В обзоре [20] показано, что аминокаликсарены растворяются лучше, чем соответствующие им незамещенные каликсарены. При взаимодействии с биологическими «гостями», нейтральные аминогруппы выступают в роли доноров водородных связей, тогда как заряженные аммонийные и гуанидиниевые группы принимают участие в связывании «гостей» также и посредством электростатического взаимодействия. Хорошо известно, что полиамины природного происхождения различаются по длине углеводородного линкера (количество метиленовых групп в цепочке). В случае длины цепочки менее трех атомов углерода (этильные линкеры) соединения имеют хотя бы одно значение pK меньше 7 [41,42]. Разница в длине цепочки линкера (этил, пропил) приводит к различиям в их биологических функциях, так как в физиологических условиях их аминогруппы протонируются по-разному. Количество метиленовых звеньев в цепочке отчасти отвечает и за широкий диапазон значений рК (от 7 до 11) полиаминов, что в свою очередь упрощает контроль над конформацией и взаимодействием с биомакромолекулами. Так, ассоциация и диссоциация полиаминов с ДНК легко контролируется небольшими изменениями (рН, ионная сила, диэлектрическая проницаемость и/или температура) в микросреде [41,42]. Небольшие, но явные изменения в их структуре, которые происходят вследствие изменения их микроокружения, способствуют конденсации нуклеиновых кислот, обеспечивают защиту от нуклеаз (ферментативного разрушения) и улучшают клеточное поглощение и эндосоматическое высвобождение - все, что необходимо для успешной трансфекции.

Синтетические макромолекулярные системы для доставки генов

С целью исследования способности синтезированных соединений к взаимодействию с биомембранами и, как следствие, к направленному переносу «упакованной ДНК» через биомембрану, мы выбрали п-трет бутилтиакаликс[4]арены 54-56, функционализированные по нижнему ободу трис(2-аминоэтил)аминными фрагментами. Наш выбор связан со структурной вариабельностью – в их структуре сочетаются линейные и разветвленные полиаминные цепочки, и они могут быть получены в трёх структурных конфигурациях. Таким образом, нами было изучено взаимодействие с модельной биомембраной производных п-трет-бутилтиакаликс[4]арена, функционализированных по нижнему ободу трис(2-аминоэтил)аминными фрагментами. В качестве модельной биомембраны нами были выбраны монодисперсные везикулы дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC) диаметром 100 нм. По изменению температуры фазового перехода Tm можно определить наличие взаимодействия между мембраной и соединением [99].

Температура фазового перехода (Tm) липидных везикул была определена методом турбидиметрического титрования на спектрофотометре при длине волны 400 нм [100]. Полученные зависимости оптической плотности от температуры аппроксимировали параметрическим уравнением, полученным на основе уравнения Вант-Гоффа для фазовых переходов (уравнение 1). где x – значения температуры, a, b, c, d – аппроксимационные параметры, Н – энтальпия фазового перехода, Т – температура фазового перехода. В полученном уравнении в качестве y(x) используются нормированные значения оптической плотности. На рисунке 16 представлен график зависимости нормированного значения оптической плотности от температуры на примере соединения 54 : DPPC (1:75). Кривая построена по аппроксимационному уравнению с оптимизированными значениями параметров. В результате математической обработки были получены значения Tm для различных мольных соотношений исследуемых соединений к липиду [101].

График зависимости нормированного значения оптической плотности от температуры на примере соединения 54 с DPPC (1:75) и кривая, построенная по аппроксимационному уравнению (1) с оптимизированными значениями параметров.

Из таблицы 4 видно, что при мольном соотношении 1:100 (соединение : DPPC), наблюдается небольшое изменение Tm липосом DPPC в присутствии соединений 54 и 55. В присутствии же соединения 56 Tm (41.2 ± 0.1) практически не изменилась, что свидетельствует об отсутствии взаимодействия 56 с липосомами DPPC при данном мольном соотношении. Известно, что небольшие амфифильные молекулы, как правило, располагаются у головного участка липидных мембран [102-106]. Кроме того, амфифильные каликсарены способны встраиваться в липидные мембраны [107-110].

Также синтетические рецепторы, содержащие амидные и сульфонамидные производные трис(2-аминоэтил)амина (TREN), способны обеспечивать миграцию фосфолипидов и могут осуществлять трансмембранную диффузию материала в обоих направлениях [111]. Таким образом, можно сделать предположение, что соединения 54 и 55, содержащие выраженные гидрофильные и гидрофобные участки, располагаются ближе к головным группам фосфолипидов своими протонированными NH3+ группами, образуя ионные пары с фосфатными остатками в дополнение к водородным связям P=0---H-N. Их липофильный фрагмент встраивается и взаимодействует с гидрофобными участками мембраны. Эти взаимодействия приводят к небольшому увеличению Тт. В то время как последующее увеличение мольной концентрации (соединений : DPPC = 1:75) соответствует увеличению Tm. Полная солюбилизация липосом наблюдается только в случае соединения 55 при данной концентрации (1:75). Возможно, что проникновение гидрофобной части соединения 55 в липофильную часть липидного бислоя приводит к нарушению организации липосомной структуры из-за несимметричного пространственного положения гидрофильных и гидрофобных групп соединения 55. Таким образом, небольшое увеличение молярной концентрации соединения 55 привело к солюбилизации липосом. Этот эффект для соединения 54 наблюдается только при мольном соотношении 1:75 (54 : DPPC). Несмотря на то, что соединения 54 и 56 симметричны, выраженное гидрофобное ядро соединения 56 недоступно для взаимодействия с гидрофобными хвостами липидных мембран, потому что, в отличие от соединений 54 и 55, окружено гидрофильными группами. Только гидрофильные участки эффективно взаимодействуют с фосфатными группами липида. Солюбилизация в данном случае происходит только при молярном соотношении 1:50, при превышении которого наблюдается полное разрушение липосом (рис.17).

Спектрофотометрическое титрование соединения 56 (7, 9.3, 14 и 70 цМ) 0.7 мМ раствором липосом DPPC при 400 нм. Следует отметить, что в соединении 56 присутствует восемь концевых аминогрупп, против пяти у соединения 55 и двух у соединения 54. Очевидно, что взаимодействие с мембраной зависит не только от гидрофильных – гидрофобных взаимодействий, но и от пространственной организации соединения, как и количества аминогрупп в соединениях. 2.6 Взаимодействие полиаминов на основе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов с ДНК

Способность синтезированных производных тиакаликсарена 57 и 58 взаимодействовать с ДНК была изучена методом УФ спектроскопии. Были записаны спектры поглощения ДНК в присутствии различных количеств производных тиакаликс[4]арена для всех полученных производных за исключением тех случаев, когда растворимость в водном буфере была слишком низкой (буфер ЮмМ Трис-HCl, ЮмМ NaCl, рН=7.4). Известно, что успешное взаимодействие небольших молекул с ДНК приводит к образованию ассоциатов, характеризуемых смещением полосы поглощения ДНК и/или соответствующими изменениями в поглощении смеси. Таким образом, в отсутствие взаимодействия поглощение отдельных компонентов в растворе должно иметь аддитивный характер. При увеличении концентрации производных тиакаликс[4]арена (от 1.94 цМ до 5.82 цМ) в смеси с ДНК из тимуса телёнка (44.1 цМ), наблюдался гиперхромный эффект в области 257 нм для всех исследованных соединений (рис.18 и 19, на примере соединений 57 и 58).

Несмотря на то, что интенсивность поглощения в области 257 нм для ДНК из тимуса телёнка возросла с увеличением концентрации лигандов, аддитивности поглощений индивидуальных компонентов для всех исследованных соединений не наблюдалось. Также, в спектре ассоциатов 57/ДНК из тимуса телёнка, в области 300 нм наблюдалась изобестическая точка (рис.18).

Изменения в спектрах указывают на наличие взаимодействия между соединениями и ДНК. Тем не менее, полученных данных недостаточно для точного определения вида связывания, однако a priori можно предположить тривиальный тип экзосвязывания (встраивание в бороздку), основываясь на структуре тиакаликс[4]арена и литературных данных [57].

Синтез производных п-трет-бутилтиакаликс[4]арена, функционализированных по нижнему ободу фрагментами N-(2-гидроксиэтил)этилендиамина, и их взаимодействие с метилакрилатом

Полиамины эффективно конденсируют ДНК, а следовательно, можно предположить, что введение бис(3-аминопропил)амидных фрагментов в макроциклическую платформу должно увеличить конденсацию, так как число аминогрупп в молекуле увеличится в случае тетразамещённого соединения по сравнению с TREN-производными. Кроме того, известно, что аналогичное производное каликс[4]арена и спермидина в конфигурации 1,3-альтернат легко взаимодействует с фосфолипидным бислоем и селективно переносит анионы через мембрану [117]. Таким образом, успешная конденсация потенциально позволит создать эффективный трансфекционный агент.

Из таблицы 6 можно сделать выводы, что увеличение мольного соотношения 57/ДНК с 0.26 до 3.90 сопровождается понижением основного размера частиц для ассоциатов 57/ДНК с 1862 нм (91.4%) до 41.9 нм (62.6%). Последующее увеличение мольного соотношения до 13.13 привело к увеличению размеров частиц для ассоциатов соединения 57/ДНК. Были обнаружены два вида частиц, близкие по размерам: 167.6 (50.8%) и 132.6 (44.9%) нм. Это может быть следствием агрегации избыточных количеств молекул соединения 57 вокруг сформированных наночастиц ассоциатов 57/ДНК. При взаимодействии 58 с ДНК наблюдается такая же картина. В данном случае размер основных частиц снизился до 79.9 нм (87.8%) при мольном соотношении 58/ДНК равном 3.90. Интенсивность минорных частиц (d2) была значительно ниже (площадь пика 10 %). Система была полидисперсной, т.е. во всех случаях было более одного пика при различных мольных соотношениях.

Интересно отметить, что и конфигурационный изомер конус, и изомер 1,3-альтернат образуют наноразмерные ассоциаты. При мольном соотношении макроцикл / ДНК, равном 1.0, размер основных частиц ассоциатов 57/ДНК составил 74.8 нм (68.9%) (рис.21, А), в то время как размер агрегатов с конфигурационным изомером 1,3-альтернат, 58/ДНК, составил 99.1 нм (98.8%) (рис.21, Б). Таким образом, введение полиаминных групп в платформу тиакаликс[4]арена приводит к эффективной конденсации ДНК до нанометрового размера.

При сравнении производных тиакаликс[4]арена, функционализированных TREN фрагментами (54, 56), с макроциклами, функционализированными бис(3-аминопропил)амидными фрагментами (57, 58) в конфигурациях конус и 1,3-альтернат (рис.22, А и Б), заметно, что при мольном соотношении макроцикл / ДНК, равном 1.0, все изученные соединения вне зависимости от конфигурации проявляли одинаковую способность к упаковке ДНК (средний размер частиц около 100 нм), за исключением TREN производных в конфигурации 1,3-альтернат, которые образуют частицы с размерами более 1 мкм (рис.22, А). При более высоком мольном соотношении [H] / [G] = 2.81, TREN производные в конфигурации 1,3-альтернат конденсировали ДНК примерно до 330 нм, в то время как другие макроциклы (54, 57, 58) способствовали сворачиванию ДНК до размеров, близких к 100 нм диапазону (рис.22, Б). В целом, соединения в конфигурации конус более эффективны, чем в конфигурации 1,3-альтернат.

Влияние конфигурации макроцикла и типа полиаминного заместителя на нижнем ободе на эффективность конденсации ДНК: А) [макроцикл] / [ДНК] = 1.0; Б) [макроцикл] / [ДНК] = 2.81, в буфере (10 мM Трис-HCl, 10 мM NaCl, pH=7.4).

Кроме того, бис(3-аминопропил)амидные производные оказались намного эффективнее, чем TREN производные п-трет-бутилтиакаликс[4]арена. Эффективность конденсации уменьшается в ряду 57 54 58 56. Таким образом, соединения 54, 57 и 58 представляют интерес в качестве потенциальных трансфекционных агентов, поскольку способны конденсировать ДНК в наноразмерные агрегаты, что является одним из обязательных условий эффективных трансфекционных агентов. На следующем этапе исследования способности синтезированных макроциклов к «упаковыванию» ДНК были изучены производные п-трет бутилтиакаликс[4]арена в конфигурациях конус (67) и 1,3-альтернат (68), содержащие фрагменты М-(2-гидроксиэтил)этилендиамина. Несмотря на то, что у данного заместителя отсутствует первичная аминогруппа, заместители в макроциклах 67 и 68 содержат дополнительную гидроксильную группу, что должно увеличить сродство к ДНК за счет межмолекулярных взаимодействий гидроксигруппы с фосфатными и углеводными группами ДНК.

В растворах модельной ДНК с концентрацией 1.6-10"5 моль/л методом динамического светорассеяния показано образование агрегатов микронного размера (табл. 7). При этом наблюдалось достаточно высокое значение индекса полидисперсности PDI= 0.65.

Методом динамического светорассеяния (табл. 7) показано, что взаимодействие соединений 67 и 68 с ДНК не привело к образованию агрегатов наночастиц. Даже при высоком мольном соотношении «соединение / ДНК», равном 13.13, в случае соединений 67 и 68 образуются агрегаты сравнительно больших размеров с высоким индексом полидисперности. Тем не менее, из табл. 7 видно, что макроцикл 67 в конфигурации конус способен образовывать монодисперсные системы (PDI=0.24 ± 0.02) и упаковывать молекулы ДНК в агрегаты с наименьшим размером 239.6 ± 9.03 нм при высоком мольном соотношении [H]/[G]=13.13 (рис.23).

Наоборот, макроцикл 68 в конфигурации 1,3-альтернат образует монодисперсные системы, содержащие агрегаты с размером 492.1 ± 41.9 нм при низком мольном соотношении [H]/[G]=0.26 (рис.24). Причем гидродинамический размер агрегатов 68/ДНК в два раза больше агрегатов 67/ДНК. Очевидно, это обусловлено различной формой агрегатов и способностью различных конфигураций макроцикла (конус, 1,3-альтернат) к «упаковыванию» ДНК [47,118]. Таблица 7. Размеры агрегатов (гидродинамические диаметры частиц dj, d2, d3, нм) и площади максимумов (Si, S2, S3, %) распределения частиц по интенсивности, образованных в результате самоассоциации и агрегации макроциклов 67 и 68 (2.1-Ю"6 М) с ДНК из тимуса теленка (1.6-10"5 М) в буфере (10 мМ фосфатный буфер, 10 мМ NaCl, рН=7.4), и соответствующие индексы

Синтез и подготовка исходных реагентов и растворителей

Наблюдаемая низкая способность к упаковке у соединений 71 и 73 может быть объяснена их сильно разветвленной структурой, которая препятствует эффективному взаимодействию с ДНК другими способными к связыванию группами: третичными амино- и гидроксильными.

Таким образом, синтезированы новые тетразамещенные производные п-трет-бутилтиакаликс[4]арена, функционализированные по нижнему ободу трис(2-аминоэтил)аминными [119], бис(3-аминопропил)аминными, N-(2 88 гидроксиэтил)этилендиаминными [120], N-(2-аминоэтил)пропанаминными [121],

N-(3-(3-аминопропиламино)пропил)пропанаминными фрагментами [121], в конфигурациях конус и 1,3-альтернат. Структура всех полученных макроциклов охарактеризована комплексом физических и физико-химических методов - ЯМР 1Н, 13С и ИК-спектроскопией, MALDIOF масс-спектрометрией, индивидуальность – измерением температуры плавления и ТСХ, а состав – данными элементного анализа. Были разработаны подходы к синтезу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов, функционализированных по нижнему ободу трис(2-аминоэтил)аминными фрагментами, позволяющие формировать один или два циклических мостиковых фрагмента. Изучение взаимодействия синтезированных производных тиакаликс[4]арена с модельными биомембранами на основе дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC) показало, что взаимодействие с мембраной зависит не только от гидрофильных – гидрофобных взаимодействий, но и от пространственной организации соединения и от количества в макроцикле терминальных первичных аминогрупп. Методом динамического светорассеяния изучено влияние пространственной структуры макроцикла, типа и количества аминогрупп на эффективность конденсации ДНК. Установлено, что все синтезированные соединения склонны к самоассоциации уже при концентрации 4.210-4 М. Обнаружено, что п-трет-бутилтиакаликс[4]арены в конфигурациях конус и 1,3-альтернат, функционализированные по нижнему ободу трис(2-аминоэтил)аминными, бис(3-аминопропил)аминными, N-(2-аминоэтил)пропан-аминными и N-(3-(3-аминопропиламино)пропил)пропанаминными фрагментами, упаковывают ДНК из тимуса телёнка в наноразмерные частицы ( 100 нм). Синтез и подготовка исходных реагентов и растворителей

Спектры ЯМР 1Н и 13С записывали на спектрометре Bruker Avance 400 на рабочей частоте 400.1 МГц и 100.6 МГц соответственно; Химические сдвиги протонов определялись относительно сигналов остаточных протонов дейтерированного растворителя (дейтерохлороформ-d1, ДМСО-d6). Для отнесения сигналов в спектрах ЯМР 1Н и 13С использовались гетероядерные 2D методики 1Н – 13С HSQC на спектрометре Bruker Avance 400. Концентрация анализируемых растворов составляла 3-5 % (по массе).

ИК-спектры регистрировали на Фурье-спектрометре Tensor 27 (Bruker): разрешение 1 см-1, накопление 64 скана, время регистрации 16 сек; в таблетках KBr либо в вазелиновом масле в интервале волновых чисел 400-4000 см-1.

Масс-спектры записывали на спектрометре Bruker Ultraflex III MALDIOF. В качестве матриц были использованы п-нитроанилин, 2,5-дигидроксибензойная кислота.

Элементный анализ кристаллических образцов был выполнен на приборе Perkin Elmer 2400 Series II. Температуру плавления веществ определяли на нагревательном столике "Boetius".

Дополнительный контроль чистоты веществ (исходных реагентов и впервые синтезированных) и контроль протекания реакции осуществляли методом тонкослойной хроматографии на пластинках Silica G, 200 m, UV 254. ТСХ-пластинки проявляли облучением при = 254 нм.

В работе использовали следующие реагенты и растворители: ацетон (х.ч.), ацетонитрил (х.ч.), гидроксид натрия (х.ч.), диэтиловый эфир (х.ч.), диизопропилэтиламин (х.ч.), метиловый спирт (х.ч.), метил акрилат, соляная кислота (х.ч.), толуол (х.ч.), триэтиламин (х.ч.), хлорид аммония (х.ч.), хлороформ (х.ч.), этиловый спирт (х.ч.), S-метил изотиоуроний сульфат (х.ч.), 3,5-диметил-1Н-пиразол-1-карбоксимидамид нитрат (х.ч.), этилендиамин (х.ч.), трис(2-аминоэтил)амин (х.ч.), бис(3-аминопропил)амин, N(2-гидроксиэтил) этилендиамин (х.ч.), тетраэтиленпентамин (х.ч.), пентаэтиленгексамин (х.ч.), ДНК тимуса теленка (Sigma), Трис-HCl (Sigma), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC) (Sigma).

Похожие диссертации на Синтез полиаминов на платформе тетразамещенных по нижнему ободу п-трет-бутилтиакаликс[4]аренов и их взаимодействие с днк