Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕШ. Эхпнококкозы - хронически протекаюцпе риродно-очаговые гельминтозы, возбудитель гидатидозной стадии кото-ых - личиночная форма ленточного гельминта Е.granulosus.
Нзоляты эхинококков, относяцнеся к одному виду, но полученные з разных паразитарных систем пли географически удаленных районов, тлнчаются по ряду морфологических,биологических и пнвазивных свой-тп. В частности, у них варьируют такие характеристики как интенсив-ость проникновения, поорганная локализация в конкретном хозяине, а акже скорость развития личинки в биоценозе паразит-хозяин . До сих ор не определено, имеют ли эти различия иммунологическую основу.
Признается существование вариационной изменчивости изолятов па-азнта, сведения о которых могут многое прояснить как при оценки оймо-потенциала заболевания, так и клинического проявления инвазнв-остп паразита в плане его опастности для человека. В этой связи, в иде дополнения к морфологическим характеристикам изучаемых изолятов ?е чаще используют новые критерии, в том числе биохимические II ІШ-унохиинческие. Выявленные различия в составе жидкостей могут дать пмч к пониманию причин неодинаковой выраженности иммунологических гакцнй у промежуточных хозяев Е.granulosus в географически удаллен-ік регионах.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: изучить зависимость иммуно-биологпческих зойств секретируемьк антигенов гидатнд эхинококка от различий в wлого-географической природе и органной локализации возбудителя.
ОСНОВНЬЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. 1. Провести бно- и иммунохнмнчес-т оценку состава эхинококковой жидкости цист от различных промежу-)чных хозяев из двух географически удаленных регионов.
2. Определить фракционный состав и исследовать высокомлекул;
ные компоненты полостной жидкости гидатид.
3. Научить антигенный состав высокомолекулярных фракции эхш
кокковой жидкости цист различной органной локализации.
4. Изучить возможности использования высокомолекулярных бпог
лішеров в составе нммунодиагностикумов для оценки поведения цисты
паразито-хозянновой системе.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. 1. Впервые показаны различия в составе бпог лимеров эхинококковой жидкости цист, выделенных от одних и тех видов промежуточных хозяев из географически отдаленных районов.
-
Изучен фракционнш состав и показаны различия в био- и і мунохшшческих свойствах эхинококковых жидкостей цист у промежуті ных хозяев из одного региона.
-
Выделены антигенные компоненты, обладающие фериентативі активностью. В сьшоротках бопьньк эхинококкозом обнаружены антнт< к этим ферментосодержацны фракциям эхинококковой жидкости, что п< воляет получить дополнительные сведения о состоянии цисты у болы го.
НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. 1. Выявленные различия в антенном составе эхинококковых жидкостей цист от промежуточных ХОЗ' из разных географически удаленных регионов открывают новые возм> ности для эпидемиологических исследований в очагах инвазии.
2. Выделение из эхинококковой жидкости компонентов, обладаю! ферментативной активностью, расширяет возможности диагностики.эхи коккоза на ранних стадиях развития заболевания и прогнозирования : хода после операционного течения процесса.
П0Л0*ЕНПЯ,ВЫН0С11КШЕ НА ЗАЩИТУ. 1. Гндатндные жидкости эко го-географнческш субвариантов эхинококка различаются по набору і
гигенно активных термоотабильных и термолабильных компонентов, а также по распределению карбоксилэстеразной активности среди молеку-пярно-гетерогенных полимеров.
2. При изучении субварнантов Е.granulosus в зависимости от об
пасти распространения, вида промежуточного хозяина и органной лока
лизации цисты био- и иммунохшшческне различия могут быть использо
ваны для выделения эколого-географнческих изолятов среди популя
цій, циркулирующей на данной территории.
3. Эритроцнтарньге диагностнкумы, полученные на основе антигенно
іктнвньикомпрнент:>в гндатидноГі жидкости, обладающих ферментативной
іктивностью, позволят повысить информативность серологических тес-,
"ов, направленных на прижизненную оценку потенциальной способности
[исты к функционированию, в условиях различной органной ее локализа
ции, а также получить дополнительную информацию в конкретных паразн-
о-хозянновых системах и в очаге инвазии в целом. *
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации докладывались и обсуж-алпсь на конференциях молодых ученых Волгоградского медицинского нстптута (1987 - 1992 ); заседаниях Волгоградского отделения обцес-ва иммунологов (1987,1991); ежегодных научных сессиях Волгоградско-о медицинского института(1987-1992); 1 Всесоюзной иколе-семинаре элодых ученых и специалистов "Фундаментальные и прикладные проблемы эдицинской паразитологии " (Москва,1990).
ПУБЛИКАЦИИ. Основные положения диссертации опубликованы в 6 пе-ітнш работах, из них 3 статьи - в журнале "Медицинская паразитолога и паразитарные болезни".
СТРУКТУРА И ОБЬЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, ізора литературы,описания^ материалов и методов исследования,резуль-ітов работы и их обсуждения , заключения,выводов и приложений. Дис-
сертация изложена на 147 страницах машинописного текста/ содержит рисунков,25 таблиц. В список литературы включены 159 публикаций, которых 76 ' ^принадлежит отечественным и 83-'иностранным авторам.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Материалом для исследования послужили эхинококковые жидкое (ЭЖ) цист различной локализации ( печень,легкие ) от различных пр межуточных хозяев - овец,крупного рогатогоо скота (КРС),свиньи, г лученные из двух географически удаленных регионов ( Ростовской и С ыаркандской областей ). Исследовано 11 образцов ЭЖ, в том числе : из печени овец,2,- из легких овец, 2- из печени КРС и 1 - из печє свиньи.
Изучение .всех исходных образцов ЭЖ и компонентов их составля щих проводили по единой схеме.
Определялисодержание белка с использованием реактива Фолина-Ч окальтео.карбоксилэстеразную активности (КЭА) с нсполььзованием качестве субстрата е-нафтнл-ацетата, а фракционный состав образцов Э определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии приборе М-3500 " Spectra-Physics " с использованием "голубых" кол нок.
Для получения вьюоокомолекулярных компонентов Ш проводили по ледовательное фракционирование исходных образцов Ш методом ступе чатой диафильтрации на мембраннах ХМ-300,ХЫ-100,ХМ-50 и UM-0,5 ячейках фирмы Am icon (США) и гелевой хроматографией на колонках з полненных сефарозой 4В и 6В.
Полисахаридный компонент определяли методом аффинной хромато рафии на колонке,заполненной кон-А-сефарозой 4В.
Два основных антигена (АГ) ЭЖ (АГ-5 и АГ-В) характеризующие
ответственно тернолабильноотьм и терыостабильностьго, определяли в акции торможения пассивной гемзгглмтннацни (РТПГА) с сыворотками льных эхинококковом, содержащих антитела (AT) к основнім АГ парата - термостабильному (ТС) -используя референс- сьворотки А и В, и рмолабнльному (ТЛ) используя референс- сыворотки Б и Г . В качест-референс-препарата (PC) использовали также коммерческую полнспе-фпческую сыворотку Ставропольского НПО "Аллерген", с помощью кото-ії выявляется весь спектр AT,вырабатывающихся к общему АГ-комплек-
Перекрестно-реагирующие АГ компоненты выявляли в реакции двой-
й диффузии в геле (РДДГ) по методу Уохтерлонн в микроварианте; с
умя гппернммунными кроличьими сыворотками: коммерческой антнсыво.-
ткой против глобулинов барана (КАСг.б.) и антисывороткой к цельной
(КАСц.ЭЖ).от кроликов,иммунизированных по схеме Harboy Н. (1977).
На основе полученных высокомолекулярных компонентов Э№ были иготовлены эритроцитарные дпагностнкумы ОД) по двум схемам; 1) нсибилизацню эритроцитов антигенно активными компонентами проводи-с помощи риванола по методике,предложенной Кузьминым Ю.А. 982);2) сенсибилизацию проводили с помощью танина. ЭД были исполь-ваны в реакции непрямой гемагглютинацни (РИГА) в мнкроварианте, по тодике,разработанной в ИМПиТМ нм.Е.И.Марцнновского, с сыворотками больных эхннококкоаом.
Для вычисления значимости полученных различий по вьйранным по-зателям использовали непараметрпческие критерии статистической зчимости различий (Гублер Е.В.,1978 ).
