Введение к работе
Актуальность темы. Заболеваемость и гибель животных на фермах обусловлены широким распространением патогенной и условно-патогенной микрофлоры, среди которых одно из первых мест принадлежит сальмонеллам. Огромное количество серовариантов сальмонелл (род Salmonella Lignieres 1900) является патогенным для многих видов животных, а также для человека. Повсеместное распространение во внешней среде, заболеваемость сальмонеллезами сельскохозяйственных животных и птицы, восприимчивость людей всех возрастов делает проблему весомой для ветеринарии и медицины, а сальмонеллезы остаются опасными болезнями в эпизоотоло-гическом и эпидемиологическом отношениях. За многие годы накоплен значительный объем информации по всем сторонам этой проблемы, однако сложные аспекты морфофункциональных особенностей и взаимосвязей систем организма, некоторые вопросы патогенеза, морфологической диагностики еще недостаточно широко освещены. Совершенствование пато-морфологической диагностики остается по-прежнему неотъемлемой частью изучения этой распространенной инфекции.
Исследования, проводившиеся сотрудниками кафедры патологической анатомии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины с 1989 года совместно с кафедрой эпизоотологии и лабораторией сальмонеллезов ВНИИ им. Л.Пастера, дают основание считать в настоящее время данную инфекцию в хозяйствах Ленинградской области актуальной проблемой. Обстоятельные фактические сведения о структурно-функциональных нарушениях при развитии инфекционного процесса приобретают особое значение при расшифровке патогенеза и прогнозирования исхода болезни, в разработке более эффективных способов диагностики и терапевтических воздействий.
Изучение патоморфогенеза сальмопеллеза у свиней является важнейшим вопросом в исследовании этой болезни. Несмотря на то, что патомор-фологические изменения «классического» проявления этой болезни давно известны, остается весьма затруднительной верификация диагноза. Течение болезни со стертыми проявлениями и при сочетании с другими патологическими процессами, а также инициация «нестандартными» для свиней серо-варами делает проблему актуальной в раскрытии иммунологической компетенции организма. Остаются не вполне уточненными патологоанатомические изменения при некоторых формах течения сальмопеллеза поросят, вопросы танатогенеза этой болезни и посмертная экспресс-диагностика.
Цель работы. Изучить морфофункциональные особенности изменений иммунокомпетентных и других органов при сальмонеллезе, вызванном различными сероварами сальмонелл, на основе патологоанатомических гистологических, электронно-микроскопических и иммунологических методов.
4 Задачи исследования:
-
Дать морфологическую оценку изменениям в иммунокомпетент-ных органах, печени, легких и надпочечниках поросят при сальмопеллезе, вызванном разными сероварами сальмонелл у свиней, выяснить морфоге-нетические элементы возникновения их.
-
Воспроизвести моделирование острого сальмопеллеза у поросят и лабораторных белых мышей с использованием выделенных от свиней се-роваров сальмонелл.
-
Определить ультраструктурные изменения в иммунокомпетентных органах, печени, легких и кишечнике у экспериментальных животных при заражении видоспецифичным и невидоспецифичным сероварами сальмонелл через 1 сутки после заражения.
-
Выявить специфичность морфологических изменений в иммунных органах в зависимости от серовара.
-
Исследовать морфологическое проявление геморрагического синдрома при остром сальмопеллезе у поросят.
-
Изучить возможность применения реакции иммунофлюоресценции для диагностики сальмопеллеза свиней.
Научная новизна заключается в системном подходе к решению поставленных задач, позволивших более подробно изучить последовательность специфических иммуноморфологических изменений в органах иммунитета поросят в зависимости от серовара возбудителя сальмопеллеза. Впервые проведено комплексное патоморфологическое, бактериологическое, иммунологическое и электронно-микроскопическое исследование сальмопеллеза поросят с использованием биологической модели. Выяснена роль клеточных и гуморальных факторов иммунитета у поросят 2-4 месячного возраста в специфической защите организма при экспериментальном заражении видоспецифичным и невидоспецифичным сероварами сальмонелл. Использование в качестве экспериментальной модели белых мышей для воспроизведения острого сальмопеллеза выделенными от павших поросят сероварами Salmonella typhimurium и Salmonella typhi suis с учетом видоспецифичности применено впервые. Проведен подробный ультраструктурный анализ состояния органов иммуногенеза, тонкой кишки, печени и легких при экспериментальной сальмонеллезной инфекции у поросят и белых мышей в первые сутки после заражения патогенными сероварами возбудителя. Морфологические признаки, характеризующие развитие при остром сальмопеллезе геморрагического синдрома изучены впервые. Определены гистологические изменения в печени, легких и надпочечниках у поросят в зависимости от серовара возбудителя. Разработана и впервые практически применена методика прямой реакции иммунофлюоресценции (РИФ) для выявления сальмонеллезного антигена в мазках-отпечатках из внутренних органов павших свиней.
Теоретическая и практическая ценность. Результаты проведенных исследований уточняют и дополняют сведения о патоморфогенезе сальмо-неллеза поросят, что способствует совершенствованию диагностики этой болезни. Изучение морфологического проявления геморрагического синдрома при остром сальмонеллезе помогает определить его участие в тана-тогенезе. Использование для воспроизведения сальмонеллезной инфекции белых мышей и поросят позволяет выявить начальные патологические процессы в органах и проследить судьбу сальмонелл разных сероваров в первые сутки после заражения при применении электронной микроскопии. Определение иммунного статуса у экспериментально зараженных разными сероварами сальмонелл поросят послеотъемного периода выявляет функционирование некоторых звеньев иммунитета в начальные этапы болезни, что может быть использовано при разработке превентивных мер борьбы с сальмонеллезной инфекцией. Применение прямой реакции иммунофлюо-ресценции (РИФ) с использованием диагностического флюоресцирующего сальмонеллезного иммуноглобулина к антигенам А, В, Д НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН может быть использовано в качестве средства экспресс-диагностики сальмонеллеза при посмертном исследовании органов свиней. Полученные данные применимы в практической деятельности ветеринарных врачей и лабораторных специалистов при посмертной диагностике сальмонеллеза поросят, позволяют глубже осмыслить суть происходящих патологических процессов.
Результаты исследований по патоморфогенезу сальмонеллеза вносят вклад в развитие ветеринарной патологии, могут быть использованы в учебном процессе на морфологических и клинических кафедрах ветеринарных факультетов, а также их можно рекомендовать для включения в учебные руководства по патологической анатомии животных.
Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на: Международном семинаре «Проблемы моделирования патологических процессов у человека и животных и испытание биологически активных препаратов» (Санкт-Петербург, 1992); Международном семинаре «Проблемы моделирования патологических процессов у человека и животных: иммуно-дефициты, их диагностика и коррекция» (Санкт-Петербург, 1994); Межвузовской учебно-методической конференции «Применение современных образовательных технологий в учебном процессе» (Кострома, 2000); Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Омск, 2000); научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2003, 2005); Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 2003); Международной научно-производственной конференции «Актуальные вопросы эпизоотологии на современном этапе» (Санкт-Петербург, 2004).
Внедрение результатов исследований. Материалы диссертации используются в учебном процессе и при проведении научно-исследовательских работ в сельскохозяйственных высших учебных заведениях и ветеринарных лабораториях России, что подтверждено соответствующими справками и заверено.
Методическое пособие для ветеринарных врачей «Обнаружение саль-монеллезного антигена в мазках-отпечатках методом РИФ» (Лаковішков Е.А., Сидоров В.Л., 2000) рекомендовано к использованию в практике ветеринарной медицины Северо-Западного района РФ научным Координационным Советом по животноводству и ветеринарии СЗНЦ Россельхозакадемии (протокол №4 от 14 июля 2000 г.) и рекомендовано Коллегией Комитета Правительства Республики Дагестан (протокол от 11 марта 2005 года № 1).
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Сальмонеллы вызывают деструктивные изменения в центральных и периферических органах иммуногенеза.
-
Патоморфологические изменения в иммунокомпетентных органах зависят как серовара возбудителя, так и от реактивности организма поросят.
-
Незавершенный фагоцитоз макрофагами приводит к внутриклеточному паразитированию сальмонелл в макрофагах внутренних органов.
-
Существенную роль в танатогенезе болезни имеет геморрагический синдром.
-
Обнаружение возбудителя в органах возможно при использовании прямой реакции иммуиофлюоресценции со стандартными диагностическими иммуноглобулинами.
Публикации. По материалам исследований опубликовано 23 научные работы.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 410 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 34 таблицами, 202 рисунками и 1 диаграммой. Включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения. Список использованной литературы включает 327 источников, в том числе 55 иностранных авторов.