Введение к работе
Актуальность темы исследования. В настоящее время объем информации по различным аспектам проблемы стресса необычайно расширился. Имеющийся Фактический материал, содержит данные, свидетельствующие о глубоких Функциональных и органических изменениях, происходящих в организме человека и животннх в условиях стресс-реакции.
Общепринято считать, что по своей биологической СУЩНОСТИ стресс является адаптивной реакцией организма, однако в определенных условиях она может способствовать, и. ла.т.е стать причиной возникновения Различных заболеваний. Это положение побудило ученых вести поиски путей и средств. - предотвращающих или онани-чнваюших возможные негативные последствия стресс-реакиии. В :->той связи возникло новое направление - Фармакологическая рєіуляііия стресса при поноши различных средств.
Как показывают имеющиеся данные литературы зі и срєдсті і могут быть использованы в целях повышения обшей резистентное!и организма, увеличения энергетической потенции клеток. снижения уровня свободнораликального окисления (ПРО) п тканях и многое другое.
В свете приведенного имея ввиду все расширяют*еся использование собак в жизни общества, а также и то, что использогание собак нередко происходит в экстремальных условиях (войны - іоря-чие точки. землетрясения. пожары, наводнения и т.п.), лелает настоятельно необходимым глубокое и разносторонне!; изучение изменений, происходящих в организме собак в условиях стресс-реакции и не менее важное изыскание срелств и способор направленного
bo'jiii-нствии неї течение стресс-реакиии. предупреждение и коррекция нежелательных последствий стресса.
Учитывая все вышесказанное а настоящее время представляются актуальными исследования, направленные на глубокое изучение процессов, происходящих ь организме собак при стрессе - в том числе cwr-jiirtniie окислительно-восстановительных процессов и процессов iwpi г.исної о океиления липидов (ПОЛ) - как важных составных обмена i« шесть и энергии, а также поиск средств, с помошью которых стала бы возможной профилактика стресса и его последствий, важності, которых диктуется разносторонней потребностью использования '"бак в экстремальных условиях.
Цель работы. Целью настоящей работы явилось изучение влияния экстракта элеутерококка на, некоторые показатели окислитель-нп-ьосстаноьительных процессов и процессов ПОЛ как у интактных животных, так и у животных в условиях стресса.
Основные задачи.
1. Провести определение показателей окислительно-восстано-
ьительных процессов на примере количества эритроцитов. гемогло
бина, гематокритного числа, содержания сахара и активности ката-
лазм крови, а также величины интегральных показателей (темпера
тура, пульс, яьіхгіние)
-
у крыс в условиях стресса, вызванного вибрационным, вибр.ишонно-аку стистическими Факторами;
-
у собак - при иммиоилизаиионном стрессе.
-
Исследовать влияние экстракта элеутерококка на вышеуказанные показатели у интактнил животных и в условиях стресса.
-
Провести определен!, нижеследующих показателей ПОЛ на примере- следующих показатс--: :и:
а) аскорбатзависимое ПОЛ (ЛЗП> в мембранах эритроцитов и
митохондриях головного мозга и печени:
б) НАДФН-зависимое ПОЛ (НЭП) в мембранах эритроцитов и ми
тохондриях головного мозга и печени:
в) содержание ацилгидроперекисей (ПГП) в плазме крови,
мембранах эритроцитов и митохондриях головного мозга и печени:
г) содержание диеновых кон-могатов (ДК) в плазме крови,
мембранах эритроцитов и митохондриях головного мозга и печени:
д) содержание шиффовых оснований (ШО) в плазме крови, мем
бранах эритроцитов и митохондриях головного мозга и печени:
е) содержание сС -токоферола ( <*- -ТФ) в плазме крови,
мембранах эритроцитов и митохондриях головного мозга и печени
-
у крыс в условиях стресса, вызванного вибрационннм. вибрационно-акустистическими Факторами:
-
у собак - при иммобилизационном стрессе.
4. Изучить влияние экстракта элеутерококка на гышеукаэанные показатели у интактных животных и в условиях стрессі.
Научная новизна работы. Нами впервые в систематических исследованиях на крысах и собаках установлено регуляторное влияние экстракта элеутерококка на показатели окислител» н<>-иосстанони-тельных процессов и процессов ПОЛ в условиях стресса, вызванного вибрационным и комбинированным вибрационно-акустичс-ским факторами у крыс, и имммобилизационным (жесткая фиксация) у собак.
Нами показано, что предварительное введение экстракта элеутерококка предотвращает развитие гипергликемии, возрастание активности каталазы, развитие анемического синдрома, увеличение фоновых лнпидных перекисей (ФЛП) в плазме крови, возрастание интенсивности индуцированных процессов ПОЛ, увеличение содержания
ЛГИ и ДК, изменение содержания ШО и эндогенного антиоксиданта -токоферола в плазме крови, вышеуказанных мембранных структурах.
Нами получены новые данные, показывающие, что предварительно введенный экстракт элеутерококка ведет к нормализации показателен окислительно-восстановительных процессов и процессов ПОЛ, что и известной мере будет способствовать восстановлению нарушенного при стрессе гомеостаза организма, что позволит более эф-Фектиьно иciujfi ховать собак соответствующими службами в экстремальных условиях, а также избежать возможность того, чтобы стресс стал пусковым механизмом какой-либо патологии.
Теоретическое и практическое значение работы. Результаты приведенного исследования расширяют имевшиеся представления об изменениях, происходящих в Физиологических и биохимических процессах организма в условиях стресса у собак, тем самым обогащая новыми данными общее учение о стрессе и кинологию - основу современного собаководства. Установленное нами влияние экстракта элеутерококка на показатели окислительно-восстановительных процессов и процессов ПОЛ у собак при стрессе найдут широкое применение в практике собаководства, и, в особенности, при использо-ьаннп собак разными службами в экстремальных условиях.
У всех животных нами изучались показатели окислительно-восстановительных процессов и процессов ПОЛ.
Подсчет количества эритроцитов проводился по Горлеву в двух параллельных камерах. Содержание гемоглобина определялось по Са-ли.
Определение гематокритного числа проводилось при помощи прямого гематокрита одновременно в двух параллельных трубках при 500 об/мин.
Содержание глюкозы в крови определялось методам Гультмана в модификации Кнварина Никкила (Колб В.Г.. Камышников B.C.. 1982). В основе этого метода лежит определение интенсивности раствора, образующегося при взаимодействии ортотолуидина с глюкозой.
Активность каталазы в крови определялась методом А.Н.Блха и С.Г.Зубковой (Предтеченский В.Е., I960). Метод заключается в разложении каталазой перекиси водорода, что и определяется при титровании перманганатом калия.
Определение индуцированного ПОЛ (АЭП и НЗП > г гомогенатах тканей, в мембранах эритроцитов, мембранах митохондрий проводилось методом Ю.А.Владимирова и А.И.Арчакова. основанного на цветной реакции малонового диальдегила (МДА) с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), оптическую плотность окраски измеряли при длине волны Г>35 им.
Определение уровня ФЛП (ТБК-активных продуктові в тканях и плазме крови проводилось по методу, описанному Yonhlokn. Knwnda и основано на определении ТБК-окрашенных продуктов в бутанольнпй Фазе, т.е. промежуточных или вторичных продуктов переокисления липидов (МЛН и других карбонильных соединений). образующихся в результате распада гидроперекисей полиненасыш<ннмх жирных кислот.
Содержание АГП и ДК определялось спектрофотом(трнчески.
Для пирс-деления ЯК в гомогенатах тканей и цельной крови бил ін-ііі'Лі.гзоьан метод Планера с модификациями. ДК определялись си.!, ірофотометрическн по максимуму в спектре поглощения при длине і.илми 233 им.
Очд^ржание ШО и 0 -токоферола определяли флюорометрически. сС -токоферол в гомогенатах печени, мозга, плазмы крови, в мі'Мі.'ранах эритроцитов, микросом и митохондрий определяли флюоро-метричс-ским способом на флюоресцентном спектрофотометре Hitachi (модель МРГ 2А) при максимуме флюоресценции 330 нм.
Результаты исследований подвергались статистической обра-оотк. по И.Л. Ойвину (1960).
Схема исследований. Объектом исследований были крысы-самцы мае ; к и 150-200 г и беспородные, собаки-самцы массой 15-20 кг, содержащиеся в обычных условиях вивария. Под опытом находились 64 бслік крысы и 8 собак. Крысы и собаки содержались соответственно и одинаковых условиях и на обычном рационе для данного вида жи-
ВОТНОІ о.
Подопытные крысы были разделены на восемь групп:
и, рная группа - контрольная.
ь тора я группа - получала экстракт элеутерококка из расчета 0.07!, мл на одно животное в течение семи дней,
г(чи,и группа - получала экстракт элеутерококка из расчета 0.075 мл в течение двух дней,
ччтні-рг.чи группа - при помощи шюттель аппарата подвергалась действию горизонтальной вибрации (112 качательных движений камер ь мин) ,
питая группа - была подвергнута комбинированному действию вибрационного (в тех же условиях, что и крысы четвертой группы)
и акустического (91 дБА с максимальной энергией в области средних и высоких частот) факторов,
шестая группа - до того, как подвергнуться действию вибрл-онного фактора получали в течение семи дней экстракт элеутерококка в вышеуказанной дозе,
седьмая группа - до того, как подвергнуться комбинированному действию вибрационного и акустического факторов получали в течение семи дней экстракт элеутерококка в вышеуказанной дозе.
восьмая группа - до того, как подвергнуться комбиниророван-ному действию вибрационного и акустического факторов получали экстракт элеутерококка в вышеуказанной дозе в течение двух дней.
Иммобилизационный стресс у собак вызывали путем жесткой фиксации их на специальном станке (в нашей модификации) в продолжение двух часов. Определение показателей кропи проводилось до и после иммобилизации. В целях предотвращения происходящих нарушений при стрессе на примере изучаемых нами показателей подопытным собакам задавали внутрь экстракт элеутерококка из расчета 0,5 мл на 1 кг веса в течение семи дней. Для определения результатов этой части исследований забор крови проводили также до и после повторной иммобилизации.
Кровь, мозговую и печеночную ткани брали у крыс после дг-ка-питации, у собак забор крови проводили путем катетеризации передней наружной плюсневой вены.