Введение к работе
Разработанные методы криоконсервацни спермы хряков основаны на концентрировании спермы путем центрифугирования ( Шапиев И.Ш. и др. , 1985; Курбатов А.Д ч др. , 1988). Эти методы обеспечивают огшодотворясмость свиноматок в пределах 50-70%. Использовшше их возможно только в стационарных условиях на крупных, хорошо оборудованных станциях искусственного осеменения свиней. Разработка простого , результативного способа позволила бы повысить эффективность работ по созданию и использованию генофондного банка ценных пород свиней в условиях фермерских хозяйств.
В последние годы в нашей стране разрабатывается новый способ замораживания спермы хряков , основанный на диализе с использованием полупроницаемых мембран ( Галич В.И., 1989; Кононов В.П. и др., 1990; Мороз Л.Г., Козлхкова К.Б., 1991). В процессе диализа происходит постепенное насыщение спермы криозашитными веществами , удаляется избыток солей натрия , активизирующих сперму , и токсические гидроперекиси. Метод исключает центрифугирование и , следовательно , применение громоздкого оборудования , отличается простотой и портативностью. Однако показатели спермы , замороженной после диализа на 10-20% ниже, чем после центрифугирования. Оплодотворяемость составляет около 50% ( Галич В.И., 1989). В связи с этим метод нуждается в дальнейшем совершенствовании.
В литературе имеются сведения о положительном действии белков сыворотки крови при хранении диалиэированной спермы при плюсовых температурах ( Bambe К. , Takeda К. , Sone М. , 1979). Предполагается , что положительный эффект сыворотки обусловлен адсорбцией на белках токсических гидроперекисей , накапливающихся в сперме в процессе хранения. Однако возможны и другие механизмы защитного действия сыворотки крови. Эти данные послужили основанием для исследования влияния различных веществ , обладающих сорбцнонными свойствами, при их введении в диализные среды на физиологические и биохимические показятели криоконсервированной спермы.
Важным условием повышения эффективности метода , является изучение теоретических вопросов , связанных с раскрытием механизмов повреждения и устойчивости спермы к охлаждению в процессе диализа и замораживания и на этой основе совершенствование сред и условий диализа. В этом плене представляет интерес исследование скорости распределения криозащитных веществ в системе сперма У среда в процессе диализа и изучение изменения показателей , связанных с регуляцией окислительного обмена в сперматозоидах на этапах охлаждения в процессе диализа и замораживания. Показано (Мороз Л.Г. , Корбан Н.В. , Шапиев И.Ш. , 1980; 1985) , что с устойчивостью сперматозоидов к охлаждению в значительной мере связаны механизмы сопряженности дыхания с синтезом АТФ и редокс-реакции пиридшшуклеотидов (НАД-Н) на действие тестирующих веществ.
При разработке метода долговременного хранения спермы основанного на диализе , чрезвычайно важны вопросы санации спермы. В последние годы для санации спермы успешно. применяется антибактериальный препарат Антибакс-1 , разработанный институтом антибиотиков и ферментов (медицинского назначения) совместно с ВНИИ генетики и разведения сельскохозяйственных животных (А.С. 1427644. Прокопцев В.М., Урбан В.П., Марчук О.И., Гречухші А.М., Шнур В.И. , 1993). Исследование Антибакса-1 на показатели диализированной спермы представляют несомненный интерес.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. В связи с вышеизложенным с целью совершенствования метода замораживания спермы , основанного на диализе , решали следующие задачи:
- влияние состава диализной среды и условий диализа на показатели качества
криоконсервированной спермы;
скорость распределения основных криозащитных веществ в системе сперма\среда в процессе диализа;
влияние адсорбентов различного химического состава на показатели функциональной полноценности криоконсервированной спермы ;
-влияние Антибакса-1 на жизнеспособность криоконсервированной спермы;'
- изменение показателей окислительного обмена на этапах охлаждения и
замораживания спермы в процессе диализа разными адсорбентами ;
- апробация новой диализной камеры и совершенствование режима охлаждения в
ней;
- оплодотворяющая способность спермы , замороженной после диализа с
разными адсорбентами.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Исследовано влияние состава диализной среды и условий диализа на основные функциональные показатели спермы , замороженной после диализа. Впервые в качестве адсорбентов исследовано влияние веществ белковой и небелковой природы на показатели функциональной полноценности криоконсервироваїшой спермы. Установлено , что введение белка куриных шщ, сыворотгч крови и Антибакса-1 позволяет получить более высокие и стабильные показатели при замораживании криоконсервированной спермы. При исследовании показателей окислительного обмена на этапах охляждеїшя и замораживания спермы в процессе диализа установлено , что наибольшие изменения электронтранспортной системы имеют место на этапе охлаждения до + 5 С . Установлено , что наличие адсорбентов в среде . способствует снижению концентрации малонового диальдегида в сперматозоидах хряков при замораживании-оттаивании. Все опыты проводились с использованием новой диализной камеры, предложенной и подготовленной лабораторией воспроизводства и искусственного осеменения свиней ВНИИГРЖ. Оплодотворяющая способность спермы, замороженной после диализа не ниже, чем после центрифугирования.
Экспериментальные исследования , анализ полученных данных проводились автором лично.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Предложена технология криоконсервации спермы хряков , основанная на использовании диализа , адсорбентов и нового санирующего препарата. По результативности технология не уступает криоконсервации спермы хряков с использованием центрифугирования ,
является более простой и доступной для замораживания в производственных условиях.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации докладывались на отчетных сессиях аспирантов ( ВНИИГРЖ , 1993 , 1994 , 1995) , на Международном симпозиуме : Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов с.-х. животных (ВНИИГРЖ , 19940 , на 111 съезде физиологов Казахстана ( Казахстан-Уральск , УПИ, 1995).
СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения , обзора литературы , материала и методов исследований , обсуждения , выводов и предложений производству. Диссертация изложена на 7" * стр. машинописного текста , содержит 19 таблиц и 7' рисунков. Список литературы включает/&0 источников , в том числе^} иностранных.