Содержание к диссертации
Введение
1.1. Актуальность темы .4
1.2. Цель и задачи исследований .7
1.3. Научная новизна .8
1.4. Теоретическая и практическая значимость работы 9
1.5. Реализация результатов исследований .10
1.6. Основные положения, выносимые на защиту 10
1.7. Апробация работы 10 1.8.Публикации 11
1.9. Личное участие автора в получении результатов исследования .12
1.10. Структура и объем работы 12
2. Обзор литературы .13
2.1. Этиология цистита 13
2.2. Основные нарушения функций мочевого пузыря при цистите .30
2.3.Морфологические аспекты воспалительного процесса в мочевом пузыре .33
2.4. Роль гликозаминогликанов в гомеостазе мочевыделительной системы человека и животных 36
2.5. Экспериментальное моделирование цистита у лабораторных животных .39
2.6. Цистит у пушных зверей в условиях промышленного звероводства 42
3. Материалы и методы исследований 44
4. Собственные исследования .57
4.1. Сравнительная оценка методов моделирования экспериментального цистита у крыс .57
4.2. Морфологические изменения в мочевом пузыре под влиянием различных повреждающих факторов .59
4.3. Сравнительная экспериментальная оценка методов определения гликозаминогликанов в мочевом пузыре крыс гистохимическими методами 72
4.4. Биохимические и клинические показатели крови и мочи при цистите 77
4.5. Диурез и потребление жидкости при цистите .91
4.6. Гликозаминогликаны как защитные факторы мочевыводящей системы в патоморфогенезе воспалительного процесса в мочевом пузыре .93
4.7. Цистит как этиологический фактор недержания мочи («подмокания») у молодняка соболей в условиях промышленного звероводства .157
5. Обсуждение результатов исследований 179
6. Заключение .207
7. Практические предложения 211
8. Список сокращений 213
9. Список литературы .
- Теоретическая и практическая значимость работы
- Личное участие автора в получении результатов исследования
- Роль гликозаминогликанов в гомеостазе мочевыделительной системы человека и животных
- Сравнительная экспериментальная оценка методов определения гликозаминогликанов в мочевом пузыре крыс гистохимическими методами
Теоретическая и практическая значимость работы
Полученная новая научная информация о морфологии мочевого пузыря при цистите различной этиологии у животных представляет интерес для применения в области сравнительной патологии воспалительных заболеваний животных и человека. Проведеннная оценка морфологических изменений в мочевом пузыре при цистите у животных с помощью методов морфометрического, гистохимического анализа и цифрового анализа изображений гистологических препаратов позволяет расширить современные представления о развитии патологии в органах мочевыводящей системы.
Существенно дополнена информация о защитной роли гликозаминогликанов мочевого пузыря в ответ на воздействие агрессивных повреждающих факторов и в условиях воспалительного процесса.
Впервые показано наличие воспалительного процесса в мочевом пузыре у молодняка соболей с недержанием мочи («подмокание», “wet belly”), что создает предпосылки для дальнейших исследований, направленных на изучение связи воспалительного процесса с нарушением мочевыделительной функции.
Результаты диссертационного исследования и предложенные рекомендации могут быть использованы в работе научно-исследовательских лабораторий, практической деятельности ветеринарных и медицинских специалистов, при подготовке и чтении лекционного курса «нефрология и урология животных», а также при написании соответствующих разделов учебников, учебных пособий для биологов, морфологов, медицинских и ветеринарных специалистов. 1.5. Реализация результатов исследований
Разработанные в диссертации методики и полученные результаты исследований внедрены и используются в ФГУП НИИ «Гигиены, профпатологии и экологии человека» ФМБА Росссии; звероводческом хозяйстве «Заря» ОАО «Северная пушнина» Ленинградской области.
Материалы научных исследований используются в работе и в педагогическом процессе кафедры внутренних болезней ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины»; кафедры морфологии и физиологии животных Мордовского государственного университиета им. Н. П. Огарева; кафедре анатомии и физиологии Орловского государственного аграрного университета.
Основные положения, выносимые на защиту 1. Закономерности морфологических изменений тканей и клеток мочевого пузыря животных при различных этиологических вариантах цистита. 2. Влияние воспалительного процесса в мочевом пузыре на биохимические показатели крови и мочи экспериментальных животных. 3. Гликозаминогликаны как защитные факторы мочевого пузыря при цистите различной этиологии. 4. Цистит у молодняка соболя черного в возрасте 5-7 месяцев как вероятная причина недержания мочи («подмокания») в условиях промышленного звероводства.
Апробация работы
Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Санкт-Петербург, 2004; 2005; 2007); на международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы электрофизиологии и незаразной патологии животных» (Улан-Уде, 2009); на международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (Санкт-Петербург, 2010); на конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2010); на международной научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов ФГБОУ ВПО СПбГАВМ (Санкт-Петербург, 2011); на международной научно-практической конференции по патологической физиологии животных, посвященной 90 летию кафедры патологической физиологии ФГБОУ ВПО «СПбГАВМ» (Санкт-Петербург, 2011); на 2 Всероссийской интернет-конференции «Современные проблемы анатомии, гистологии и эмбриологии» (Казань, 2012) на 1 международной интернет-конференции «Современные тенденции в сельском хозяйстве» (Казань, 2012); на 2 Всероссийской конференции молодых ученых «Проблемы медицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2012); на 4 съезде токсикологов России (Москва, 2013); на международной конференции «Механизмы и закономерности индивидуального развития человека и животных», посвященной 75-летию заслуженного деятеля науки РФ, д.б.н., Тельцова Л.П. (Саранск, 2014); на III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы медицины и фармации», (Орел, 2014).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 45 научных работ, в том числе 21 статья в рецензируемых научных изданиях, рекомендуемых ВАК Российской Федерации, 2 монографии, получен патент на полезную модель «Устройство для сбора экскрементов животных в клеточном звероводстве».
Личное участие автора в получении результатов исследования
Основные результаты, представленные в диссертации, получены, обработаны и проанализированы лично автором. Исследования проведены на базе центральной ветеринарной станции Советского района г. Брянска; виварии кафедры внутреннних болезней животных ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургской Государственной Академии ветеринарной Медицины»; звероводческом хозяйстве «Заря» Ленинградской области; в клинике экспериментальных животных ФГУП НИИ «Гигиены, Профпатологии и Экологии Человека» ФМБА России.
Структура и объем работы
Диссертация изложена на 251 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследований, обсуждения полученных результатов и заключения. Указатель литературы содержит сведения о 340 источниках, 80 из которых на русском и 260 на иностранных языках. Иллюстрации представлены на 101 рисунке (из них 70 микрофотографии), цифровой материал сгруппирован в 32 таблицы.
Личное участие автора в получении результатов исследования
Ведущую роль в загрязнении окружающей среды, в том числе водоемов и продуктов питания человека и животных принадлежит тяжелым металлам (ТМ). Тяжелые металлы продолжают широко использоваться практически во всех отраслях промышленности, транспорта, присутствуют в природных и антропогенных выбросах, а также содержатся в большинстве видов промышленных и бытовых отходов (Шафран Л.М., Гоженко А.И., 2009). Высокая концентрация ТМ обнаружена в прибрежных зонах морей, океанов, особенно в летнее время в результате снижение активности перемещения воздушных масс. Загрязнение биосферы ТМ в этой зоне, как правило, является результатом сброса стоков гальванических производств. Так, например, в Балтийское море со стоками ежегодно попадает около 100 тонн кадмия (Зубкова Л.М. , 1999).
На основании вышеизложенных фактов ВОЗ относит ТМ к числу глобальных загрязнителей окружающей среды (WHO Recom.., 2002). Большинство тяжелых металлов и их соединений являются нефротоксикантами избирательного действия (Шафран Л.М., Гоженко А.И., 2009). . Продолжительный контакт человека и животных с ТМ приводит к развитию острой и хронической почечной недостаточности и воспалительным процессам в органах мочевыделительной системы (Возианов О.Ф. и др., 2003).
Из обширного перечня тяжелых металлов и их солей наибольший удельный вес в развитии интоксикаций человека и животных принадлежит свинцу, кадмию, ртути, мышьяку. По сведениям некоторых авторов в последние годы в некоторых регионах страны, в частности в республике Татарстан, практически все пробы основных групп пищевых продуктов определяются загрязненностью свинцом и кадмием (81,8-100%) и в меньшей степени ртутью (4,2-79,3%). Загрязненность свинцом характерна практически для всех групп продуктов: наиболее высокие уровни в масличном сырье, рыбе и рыбопродуктах, зерне, мясе, молочных продуктах, сахаре и кондитерских изделиях (Степанова Н.В., Идиатуллова С.Ф., 2013).
Кадмий превышает по токсичности свинец и отнесен всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) к числу наиболее опасных для здоровья человека веществ. И хотя его производство имеет сравнительно меньшие объемы по сравнению с производством ртути и свинца, этот элемент находит все большее применение в гальванике, производстве люминофоров, пигментов красок, лаков, шпатлевок, аккумуляторов (Зубкова Л.М., 1999). Главная проблема, с которой сталкиваются при исследовании присутствия кадмия в биологических субстратах, таких как кровь и моча, заключается в кумуляции элемента в органах-мишенях, в связи с чем, из организма за сутки выводится не более 0,1% от полученной дозы кадмия (Зубкова Л.М., 1999). В настоящее время установлена положительная корреляционная связь между отравлением кадмием и протеинурией, а также кровяным давление и накоплением элемента в почках (Зубкова Л.М., 1999). Известно также, что кадмий спосбствует развитию цистита и новообразований мочевого пузыря у человека (Fekiounsi M., et al., 2013).
В некоторых регионах страны, таких например, как республика Мордовия, отчетливо прослеживается взаимосвязь между техногенным загрязнением кадмиевыми выбросами предприятий и высокой инцидентностью цистита и пиелонефрита у детей в городе Саранск (Зубкова Л.М., 1999).
Техногенные катастрофы на предприятиях использующих радиоактивные элементы в последние 30 лет послужили причиной зарязнения биосферы продуктами этих соединений. В частности, последствия аварии на Чернобыльской АЭС в 1986 году до настоящего времени отражаются на состоянии здоровья людей, проживавших в районах радиоактивного загрязнения. Имеются работы, в которых установлен факт развития цистита у подобного контингента граждан (Romanenko A., et al., 2002; Romanenko A., et al., 2003; Romanenko A.M., et al., 2006). Авторами перечисленных статей был предложен термин: «Чернобыльский цистит» в связи с высокой инцидентностью воспаления мочевого пузыря у граждан загрязненных территорий. На основании гистологического исследования хронический пролиферативный цистит атипичной формыс участками дисплазии и ульцерации установлен у 139 (89%) и у 91 (58%) из 156 обследованных жителей из радиоактивно загрязненных областей. У 10 человек выявлена переходно-клеточная карцинома мочевого пузыря. В контрольной группе обследованных из «радиоционно чистых» областей Украины хронический цистит с участками дисплазии был обнаружен у только у 9 из 48 пациентов (19%) (Romanenko A., Morimura K., Wei M., 2002).
Определенную роль в этиологии цистита радиационной этиологии играет лучевая терапия новообразований внутренних органов с применением радиоактивных изотопов. Это связано с тем, что она занимает одно из ведущих мест среди методов лечения злокачественных новообразований органов малоготаза. Однако у 10-15% больных формируются лучевые осложнения органов малого таза. К ним относят лучевые циститы, ректиты и фиброзы тазовой клетчатки, сопровождающиеся в поздние сроки повреждением кровеносных и лимфатических сосудов (Бардычев М.С., 1988; Костромина К.Н., 2002; Каприн А.Д., и др., 2009). Принято различать ранние и поздние лучевые повреждения. Причины ихвозникновения: превышение дозы, недостаточные интервалы между сеансами облучения, повышенная чувствительность к ионизирующемуоблучению. Ионизирующее облучение вызывает склероз сосудов и атрофию нервных элементов. Вследствие сосудистых изменений и нарушениятрофики в стенке мочевого пузыря развивается комплекс дистрофических, некробиотических и склеротических процессов. В воспалительный процесс вовлекаются все слои стенки мочевого пузыря (панцистит). Происходит атрезия и атрофия сосудов, возникают трофические нарушения, лучевые язвы и их осложнения (кровотечения, пузырно-влагалищные свищи). Развившийся фиброз и склероз мышц мочевого пузыря, как правило, приводит к его сморщиванию и нарушению функции. Дизурия возникает уже при дозе 30 Грей (3000 рад). Признаки острого цистита появляются при дозе 40 Гр, цистит средней тяжести 50 –60Гр, тяжелый цистит после облучения в дозе 65 – 75 Гр (Скрябин Г.Н.,и др., 2006).
В 1997 году были проведены первые исследования по установлению связи между психологическим стрессом и активизацией тучных клеток мочевого пузыря, которые как предполагается, играют одну из ключевых ролей в патогенезе ИЦ. Установлено, что стрессовое воздействие приводит к активации тучных клеток мочевого пузыря в более чем 70% крыс, участвующих в эксперименте (Spanos C., Pang X., Ligris K., 1997). В последующих исследованиях, проведенных на мышах и крысах, установлена связь стресса ссимптомами и патогенезом ИЦ (Cao J., et al., 2006; Robbins M.T., DeBerry J., Ness T.J., 2007). Эти исследования документально не подтверждают развитие интерстициального цистита (ИЦ) у крыс или мышей вследствие стресса. Они, тем не менее, обеспечивают доказательства того, что крысы и мыши, в условиях стресса, проявляют достаточно много физиологических и морфологических различий в мочевом пузыре, которые согласуются с некоторыми из теорий объясняющих этиологию ИЦ.
В одной из первых экспериментальных работ на животных, где было выдвинуто предположение о стрессовой этиологии заболевания, изучили участие симпатической нервной системы в патогенезе интерстициального цистита – изменение концентрации норадреналина в крови больных животных (Buffington C.A.T, Pacak K., 2001). Авторами установлено достоверное повышение содержания норадреналина и дегидроксифенилгликоля в плазме крови кошек с ИЦ. Изучению эффектов стресса у кошек и его связь с заболеванием ИЦК посвящена работа Westropp J.L.; et al., (2006). Группы сравнения состояли из 13 больных и 12 здоровых кошек. Животных подвергали стрессовому воздействию, после чего в течение 8 дней ежедневно в/в вводили раствор флуоресцеина натрия. Определяли концентрацию флуоресцеина в сыворотке крови и моче для сравнительной оценки проницаемости мочевого пузыря. Дополнительно оценивали соотношение кортизол/креатинин (К/Кр) в моче и содержание катехоламинов в плазме крови и моче. Установлено, что у кошек с ИЦ концентрация флуоресцеина в сыворотке крови достоверно выше, чем у здоровых животных. У кошек с ИЦ плазменная концентрация катехоламинов ДОФА, норадреналина и дегидроксифенилгликоля значительно превышает аналогичные показатели в контрольной группе, однако существенной разницы по соотношению К/Кр в моче здоровых и больных животных не выявлено. Увеличение концентрации ДОФА в плазме крови больных животных, вероятно, является следствием стрессового повышения активности тирозин-гидроксилазы – фермента, лимитирующего скорость биосинтеза катехоламинов. Авторы предполагают, что отсутствие реакции показателя К/Кр у животных объясняется разобщением взаимосвязи между симпатической нервной системой и ответом гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы.
Роль гликозаминогликанов в гомеостазе мочевыделительной системы человека и животных
В наших исследованиях мы поставили цель оценить сравнительную эффективность различных методов биомоделирования воспалительного процесса в мочевом пузыре у крыс. Опытные и контрольные группы животных формировались с соблюдением принципа пар-аналогов по полу и весовым кондициям. Эксперименты проведены на 40 белых лабораторных крысах в возрасте 4 месяцев от момента рождения, со средним весом тела 190±17 грамм.
Для индуцирования цистита мы использовали два метода введения повреждающих факторов: 1. Введение ирритантов непосредственно в мочевой пузырь путем цистоцентеза через брюшную стенку 2. Внутрибрюшинная инъекция растворов циклофосфамида. Для оценки первого метода индуцирования цистита нами были сформированы 3 группы животных по 10 крыс в каждой группе. В качестве повреждающих факторов использовали: в первой группе 5 млрд. микробных тел St. Epidermidis, во второй группе – 9% раствор уксусной кислоты, и в третьей – горячий (70-80С) физиологический раствор натрия хлорида. За 15 минут до введения повреждающих факторов всем крысам для лучшего наполнения мочевого пузыря внутримышечно вводили 1 мг фуросемида. Ирританты вводили в мочевой пузырь методом цистоцинтеза через брюшную стенку.
Для оценки второго метода 10 крысам внутрибрюшинно вводили раствор циклофосфамида в дозе 150 мг/кг веса в соответствии с рекомендациями (Bon K., et al., 1996).
Спустя 7 дней от начала эксперимента произведена эвтаназия всех крыс и произведен осмотр слизистой оболочки мочевых пузырей с отбором материала для гистологического исследования. Оценку результативности индуцирования цистита проводили на основании признаков воспалительного процесса при осмотре слизистой оболочки мочевых пузырей и гистологической картины цистита. Результаты выражали в процентах от количества животных в группе.
Результативность индуцирования цистита первым методом составила в первой группе – 60%; во второй группе – 90% и в 3 группе – 33 %. Результативность индуцирования цистита вторым методом составила 100%. У 1 крысы из 2 группы (10% объема выборки), которой повреждающий фактор вводили методом цистоцентеза, наблюдали спайки серозной оболочки мочевого пузыря с кишечником, что вероятно является следствием попадания растворов в брюшную полость. У животных, которым индуцировали цистит с помощью второго метода, подобных изменений не наблюдали. Признаки воспалительного процесса в мочевом пузыре у крыс в третьей группе наблюдали только у 2 животных (20% объема выборки).
В наших исследованиях проведена сравнительная оценка эффективности моделирования воспалительного процесса с использованием в качестве повреждающих факторов интрапузырных или интраабдоминальных ирритантов. Подобные модели с использованием различных химических соединений довольно широко распространены в экпериментальной биологии. Для внутрипузырного введения в качестве ирритантов, индуцирующих развитие цистита используется 3% и 5 % уксусная кислота (Takahashi K., et al., 2001; Keay S., et al., 2012), ацетон (Kato K., et al., 1990; Shimizu I.K. Kawashima et al., 1999; Ghoniem G.M., 2005), протамина сульфат (Niku S.D. et al., 1994). Перечисленные авторы, как правило, использовали метод непосредственного введения ирритантов в мочевой пузырь лабораторных животных (обезьян, крыс, кроликов) путем катетеризации. Подобный путь введения препаратов требует навыков работы с мелкими животными, наличие специального оборудования, в том числе уретральных катетеров малого диаметра, а также сопутствующей продолжительной анестезии. В этой связи нами предложен более простой способ введения ирритантов путем трансабдоминального цистоцентеза в мочевой пузырь. Этот способ введения препаратов технически более прост, но в то же время требует знания топографической анатомии мочевого пузыря у животных. Для улучшения наполнения мочевого пузыря перед манипуляцией нами также предложено использование диуретиков (фуросемид, лазикс) в дозе 1мг. Недостатком указанного метода является развитие у животных, которым в мочевой пузырь инъецируются ирританты химического происхождения развитие внешнего слипчивого воспаления серозной оболочки мочевого пузыря с окружающими тканями.
Внутрибрюшиный путь введения ирритантов является наиболее технически простым и, как правило, не приводит к развитию побочных осложнений. Наиболее часто этим методом для индуцирования цистита используют алкилирующие препараты, такие как циклофосфамид (Cox P.J., 1979; Lanteri-Minet M., et al., 1995; Juszczak K., et al., 2007; Boudes M., et al., 2011). В наших исследованиях введение циклофосфамида (Эндоксан) оказалось наиболее результативным при моделировании воспалительного процесса в мочевом пузыре. Учитывая этот факт и многочисленные рекомендации по использованию циклофосфамида в качестве ирританта для индуцирования цистита, он был выбран нами в качестве базисного для проведения дальнейших исследований.
Повреждающие факторы, используемые для моделирования воспалительного процесса в мочевом пузыре можно условно подразделить на факторы биологического происхождения (микроорганизмы, вирусы), химического происхождения (кислоты, щелочи, лекарственные препараты) и физического происхождения (температура, ионизирующая радиация). В наших исследованиях проведено сравнительное изучение влияния повреждающих факторов каждой группы на морфологическое строение мочевого пузыря лабораторных животных (крысы).
Сравнительная экспериментальная оценка методов определения гликозаминогликанов в мочевом пузыре крыс гистохимическими методами
У животных 4 группы констатировали снижение концентрации общего белка, альбумина и глюкозы в сыворотке крови, что вероятно является следствием общетоксических эффектов метаболитов циклофосфамида при его длительном применении, а также потерь белков при хроническом геморрагическом процессе. У крыс 5 группы, которые в течение 4 дней после инъекции циклофосфамида получали препарат гликозаминогликанов в высокой дозе 100 мг/кг, наблюдали снижение концентрации альбумина по сравнению с интактными животными группы 0. Однако понижение содержания этого белка находилось в пределах референсного диапазона клинической нормы. У животных 5 группы также отмечено существенной снижение концентрации ферритина в сыворотке крови, что является характерным признаком кровопотери, сопровождающей геморрагический тип воспаления в мочевом пузыре.
Таким образом, нами показано отсутствие статистически значимых отличий по оцениваемым биохимическим показателям у интактных животных по сравнению с животными, у которых был смоделирован геморрагический цистит, а также получавших комплексный препарат гликозаминогликанов в дозе 10 мг/кг и глюкозамина гидрохлорид в дозе 50 и 100 мг/кг веса тела. Это позволяет закючить об эффективности применения препаратов в указанных дозах для коррекции последствий геморрагического воспалительного процесса у животных.
Показано, что в модели хронического геморрагического воспалительного процесса происходит потеря белков и снижение концентрации глюкозы в сыворотке крови. Применение комплексного препарата гликозаминогликанов в высокой дозе 100 мг/кг веса тела не препятствует развитию потерь пластических веществ, таких как альбумин и феритин. Этот факт позволяет заключить о недостаточной эффективности применения комплексного препарата содержащего глюкозамина гидрохлорид и хондроитина сульфат в коррекции последствий геморрагического воспалительного процесса.
При оценке изменений основных биохимических показателей сыворотки крови животных в модели ЦФ-индуцированного цистита и его коррекции препаратами ГАГ не было выявлено статистически значимых отличий большинства показателей всех групп животных от референсного диапазона клинической нормы. Исключение составляет группа животных с моделью хронического геморрагического цистита, у которых наблюдали снижение содержания в сыворотке крови общего белка, альбумина и глюкозы. Эти изменения в целом характерны для хронического течения воспалительных процессов, связанных с потерями белков, которые в частности может обусловливать геморрагический процесс в мочевом пузыре.
В наших исследованиях также отмечены некоторые отклонения от референсного диапазона у крыс, получавших препарат ГГХ+ХС 100. У этих животных наблюдали снижение содержания альбумина, креатинина и ферритина в сыворотке крови. Этот факт следует учитывать при планировании использовании высоких доз комплексных препаратов ГАГ, а также необходимы дальнейшие исследования, направленные на выявление влияния подобных препаратов гликозаминогликанов на показатели биохимического гомеостаза организма животных.
Оценка параметров жидкостного баланса организма животных при воспалительных процессах в органах мочевыводящей системы является необходимым элементом клинической диагностики, а также для оценки фунций выделительной системы, как в эксперименте, так и при наблюдении спонтанно протекающих заболеваний. В наших исследованиях проведено динамическое изучение таких параметров как уровень суточного диуреза и количества потребляемой животными жидкости в течение суток у здоровых крыс, а также у животных с индуцированным циститом и в условиях приема препаратов гликозаминогликанов.
Моделирование цистита проводили на 35 белых лабораторных крысах. Животные по принципу пар-аналогов были разделены на 7 групп по 5 голов в каждой группе. Крысы группы 0 использовались как интактный контроль; животным группы 0-2 в/б вводили ЦФ в дозе 80 мг/кг веса тела двукратно с интервалом 48 часов, после чего в течение 4 суток в/ж 1 р/день вводили комплексный препарат ГГХ+ХС 1, содержащий сульфат хондроитина и глюкозамина гидрохлорид в дозе 10 мг/кг веса тела.
Животные 1 группы использовались как позитивный контроль, им однократно в/б вводили ЦФ в дозе 100 мг/кг веса тела. Крысам 2 группы однократно в/б вводили ЦФв дозе 100 мг/кг веса и далее в течение 4 суток в/ж 1 р/день вводили препарат, содержащий глюкозамина гидрохлорид в дозе 50 мг/кг веса тела.
Крысам 3 группы однократно в/б вводили ЦФ в дозе 100 мг/кг веса тела и далее в течение 4 суток в/ж 1 р/день вводили препарат, содержащий глюкозамина гидрохлорид в дозе 100 мг/кг веса тела. У крыс 4 группы моделировали хроническую форму цистита, для чего производили 4 внутрибришинные инъекции ЦФ с интервалом 24 часа в дозе 50 мг/кг веса тела. Продолжительность наблюдения за животными 4 группы после последней инъекции циклофосфамида составила 72 часа. Крысам 5 группы в/б однократно вводили циклофосфамид в дозе 100 мг/кг веса тела после чего в течение 4 суток в/ж 1 р/день вводили комплексный препарат ГГХ+ХС 3, содержащий сульфат хондроитина и глюкозамина гидрохлорид в дозе 100 мг/кг веса тела.
Отбор проб мочи в течение 24 часов производили в специальных боксах позволяющих получать образцы минимально загрязненные фекалиями (Глава 3.2.5). Одновременно в течение 24 часов по уровню выпитой жидкости количественно оценивали ее потребление. У животных группы 0; 0-2; 1; 2; 3; 5 образцы мочи получали до начала эксперимента (точка 1) и далее двукратно с интервалом 24 часа. У крыс 5 группы первый образец мочи получали до начала эксперимента (точка 1) и далее 4 суточных точки, которые включали получение мочи после каждого введения ЦФ.
Сравнительные результаты, отражающие изменения до начала эксперимента и в течение 24 часов после инъекции циклофосфамида по точкам 1 и 2 представлены в таблице 28, а также иллюстрируются рисунками 94-97.
Как видно из данных таблицы 28, у животных всех групп, которым моделировали воспалительный процесс в мочевом пузыре, в течение 24 часов наблюдалось увеличение потребление жидкости. Статистическим анализом данных не выявлено значимых отличий по этому показателю в сравнении с интактными животными группы 0.
