Введение к работе
Актуальность исследования:
Качество диагностики, контроля эффективности лечения и оптимизация прогноза лимфопролиферативных заболеваний требуют постоянного поиска наиболее чувствительных биологических маркеров и совершенствования технических средств и методов клинико-лабораторного исследования.
Проблема количественной диагностики на клеточном и тканевом уровнях приобрела исключительно важную роль в морфологии и клинике благодаря необходимости объективизации и связывания в единый комплекс новейших методов структурно-функционального анализа с цито- и гистохимическими, иммуноцитологическими, молекулярной биологии, проточной цитофлуори-метрии, гибридизации in situ, электронной микроскопии, которые подтверждают четкие структурные изменения субклеточных единиц (Коган Э.М., 1983; Жукоцкий А. В., 1992; Румянцев А.Г., 1993; Cornelisse С.J., 1994; Falkmer U.G., 1994).
Необходимость в новых скрининговых автоматизированных методах анализа морфологических изменений клеток крови при экзо- и эндогенных воздействиях, которые могут распознаваться и оцениваться количественно, дала толчок к развитию такого инструментально-аналитического метода как компьютерная морфометрия (Brugal G. 1984; Автандилов Г.Г., 1990, Жукоцкий А.В., 1984,1992; Лейси, 1993).
Разработанный в лаборатории цитологии НИИ физико-химической медицины МЗ РФ новый метод изучения хроматина с помощью компьютерной телевизионной морфоденситометрии (КТМДМ) дает возможность составить индивидуальный морфоденситометрический образ клеточного ядра. (Жукоцкий А.В. и соавт., 1992; Коган Э.М. и соавт., 1991, 1995).
Известно, что все клетки лейкемического клона являются потомками одной клоногенной клетки, испытавшей на себе лейкемогенное воздействие, приведшее к перестройке ее генома. Как показано в работах лаборатории раковой клетки Латвийского института экспериментальной медицины совместно с лабораторией цитологии НИИ ФХМ, количественные показатели структуры интерфазного хроматина могут служить устойчивыми детерминантами над-хромосомной организации генома (Kogan Е. М, Zhukotsky А. V., 1989; Эрен-прейсаЕ. А., 1990).
Эти данные могут расширить фундаментальные знания об эволюции лей-кемических клонов в динамике течения и лечения острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ), помочь в выявлении атипичных клеток среди других элементов лимфоидного пула даже в тех случаях, когда другие маркерные характеристики не представляют такой возможности, а также проследить влияние на клетки внешних воздействий и внутренней эволюции, составляющей основу опухолевой прогрессии. Можно полагать, что поиск информативных количественных маркеров, отражающих процессы, происходящие в ядре клетки, позволит зарегистрировать патологические изменения в самом начале патологического процесса. Особенно актуальны в этом отношении проблемы ранней диагностики злокачественных лимфопролиферативных заболеваний.
Исходя из этого, исследования, посвященные изучению структуры хроматина лимфоидных клеток при различных состояниях, представляются высоко актуальными.
Цель настоящего исследования: количественно определить характерные особенности перестроек структуры интерфазного хроматина лимфоидных клеток в норме, при воздействии инкорпорированных радионуклидов, при различных иммуноцитологических вариантах острого лимфобластного лейкоза у
детей и при злокачественных Т-клеточных лимфомах кожи, используя новый метод компьютерной телевизионной морфоденситометрии.
Для достижения указанной цели сформулированы следующие задачи исследования:
-
Адаптировать метод КТМДМ для оценки структурно-морфологических свойств интерфазного хроматина лимфоидных клеток периферической крови и костного мозга.
-
Изучить характерные особенности структуры интерфазного хроматина лейкемических лимфобластов при различных иммуноцитологических вариантах острого лейкоза.
-
Выявить наиболее информативные морфоденситометрические критерии оценки изменения структуры интерфазного хроматина при различных субвариангах ОЛЛ.
-
Провести сравнительный анализ структуры хроматина лимфоидных клеток в норме, при остром лимфобластном лейкозе и при воздействии инкорпорированных радионуклидов для определения возможных маркеров ма-лигнизации.
-
Разработать морфоденситометрические критерии ранней диагностики злокачественных Т-клегочных лимфом кожи.
Научная новизна работы: Выявлены достоверные различия и особенности надмолекулярной организации интерфазного хроматина лимфоидных клеток костного мозга и периферической крови по количественным показателям и их соотношениям в норме, при воздействии инкорпорированных радионуклидов, при различных иммуноцитологических вариантах ОЛЛ, а также при злокачественных Т-клеточных лимфомах кожи (ЗТЛК).
На основании этого дополнены дифференциально-диагносигческие критерии при различных субвариантах ОЛЛ у детей; показана возможность построения новых МДМ-критериев прогноза ОЛЛ; разработан способ ранней и дифференциальной диагностики злокачественных Т-клеточных лимфом кожи.
Практическая значимость: На основании примененного нами метода компьютерного телевизионного морфоденситометрического исследования пока-
зана возможность построения новых дифференциально-диагностических и прогностических критериев, критериев оценки воздействий неблагоприятных экологических факторов. Созданные компьютерные видеоархивы ядер и полученные количественные характеристики интерфазного хроматина лимфо-идных клеток могут быть использованы в дальнейших исследованиях, посвященных изучению генома при радиационном воздействии и при лимфопроли-феративных заболеваниях. Разработанный способ диагностики Т-клеточных лимфом кожи может использоваться в клинической практике для ранней и дифференциальной диагностики ЗТЛК.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: конференциях лаборатории цитологии и Ученых Советах НИИ ФХМ (1992 -1996); Ученом Совете НИИ ДГ (1997); конференции по биомедицинской оптике "Optical diagnosis of blood and blood components" (Лос-Анджелес, 1993); 3-й конференции Европейской Ассоциации по аналитической клеточной патологии "Analytical cellular pathology" (Гренобль, 1994); на 22 Европейском конгрессе по цитологии (Амстердам, 1994); XI и XII научно-практических конференциях "Морфометрия в диагностике болезней" (Москва, 1993, 1994); III съезде детских онкогематологов республики Беларусь (Минск, 1995); международном семинаре "Роль эпидемиологических исследований в оценке риска при радиационных авариях" (Минск, 1995); International Conference on Healt Cousequences of the Chernobyl and Other Radiological Assidents (Женева, 1995); 3-м конгрессе международной ассоциации морфологов (Тверь, 1996); Всероссийской научно-практической конференции "Чернобыль: 10 лет спустя. Итоги и перспективы" (Брянск, 1996); VII Российском съезде дерматологов и венерологов (Казань, 1996); Республиканском научном симпозиуме "Пролиферативные заболевания кожи" (Москва, 1996); III Всероссийском съезде гематологов и трансфузиологов (Санкт-Петербург, 1996); конференции "Анализ изображения клеток системы крови: настоящее и будущее" (Москва, 1996).
Публикации: По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, в том числе 6 за рубежом, получен патент РФ "Способ диагностики злокачественных Т-клеточных лимфом кожи".
Структура и объем диссертации: Диссертация изложена на страницах
машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания
материала и методов исследования, результатов исследования и их обсужде
ния, заключения, выводов, приложения и библиографического указателя. Со
держание работы иллюстрировано 26 рисунками, количественные данные
представлены в 25 таблицах. Библиографический указатель содержит ра-
бот отечественных и зарубежных авторов.