Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Классификация неопухолевых меланиновых гиперпигментаций кожи .18
1.2. Меланин и меланогенез 19
1.3. Паракринная регуляция меланогенеза .21
1.3.1. Клеточное окружение: кератиноциты 22
1.3.2. Клеточное окружение: фибробласты 28
1.3.3. Клеточное окружение: иммунные клетки .31
1.3.4. Белки экстрацеллюлярного матрикса 32
1.3.5. Нервная система .33
1.4. Современный взгляд на основные этиологические факторы образования гиперпигментаций .35
1.4.1. Влияние УФ-излучения .35
1.4.2. Генетические факторы 37
1.4.3. Возрастные изменения 39
1.4.4. Влияние женских половых гормонов 39
1.4.5. МикроРНК 41
1.4.6. Экологический фактор 42
1.4.7. Патология щитовидной железы .43
1.5. Терапия неопухолевых меланиновых гиперпигментации кожи .43
1.5.1. Солнцезащитные средства .44
1.5.2. Топическая терапия неопухолевых меланиновых гиперпигментаций 44
1.5.3. Химический пилинг .59
1.5.4. Современная лазерная и световая терапия неопухолевых меланиновых гиперпигментаций 63
1.6. Метод фореза: теоретические и практические аспекты применения 71
Глава 2. Методы и материалы исследования
2.1. I этап исследования 81
2.1.1. Клинико-анамнестические сведения о пациентах 81
2.1.2. Критерии включения и невключения в исследование 84
2.1.3. Рандомизация пациентов на группы 85
2.1.4. Метод генетического анализа 86
2.2. II этап исследования 91
2.2.1. Клинико-анамнестические сведения о пациентах 91
2.2.2. Критерии включения и невключения в исследование 96
2.2.3. Рандомизация пациентов на группы .98
2.2.4. Методы терапии .99
2.2.4.1. Лазерная терапия .99
2.2.4.2. Фармафорез .101
2.3. Специальные методы исследования .102
2.3.1. Шкала Фитцпатрика .103
2.3.2. Шкала IGA .104
2.3.3. Дерматологический индекс качества жизни 104
2.3.4. Шкала GAIS .106
2.3.5. Дерматоскопия .107
2.3.6. Мексаметрия 108
2.3.7. Фотографирование 110
2.3.8. Исследование с помощью лампы Вуда 111
2.4. Статистика 111
Глава 3. Результаты исследования полиморфизма генов MMP1, XRCC1, HFE(2), GSTT у пациентов с меланиновыми гиперпигментациями неопухолевого характера и их анализ
3.1. Анализ распределения полиморфизмов генов MMP1, XRCC1, HFE (2), GSTT у пациентов с меланиновыми гиперпигментациями неопухолевого характера 113
Глава 4. Анализ терапевтической эффективности селективной лазерной терапии (755 нм) и фармафореза топического средства на основе гидроксикислот у пациентов с гиперпигментацией
4.1. Оценка клинической эффективности применения селективной лазерной терапии (755 нм) и фармафореза топического средства на основе гидроксикислот у пациентов с меланиновой гиперпигментацией неопухолевого характера 119
4.2. Оценка влияния разработанной комбинации физиотерапевтических методов терапии на качество жизни пациентов с меланиновой гиперпигментацией неопухолевого характера 124
Глава 5. Анализ результатов, полученных с помощью объективных методов исследования у пациентов с меланиновой гиперпигментацией неопухолевого характера под влиянием селективной лазерной терапии (755 нм) и фармафореза топического средства на основе гидроксикислот
5.1. Анализ данных дерматоскопии у пациентов с меланиновыми гиперпигментациями неопухолевого характера до и после применения комбинированного метода и его составляющих 129
5.2. Анализ данных мексаметрии у пациентов с меланиновыми гиперпигментациями неопухолевого характера до и после применения комбинированного метода и частей, его составляющих 130
Клинические примеры .133
Заключение 140
Выводы .150
Практические рекомендации 151
Список литературы .152
- Клеточное окружение: кератиноциты
- Метод генетического анализа
- Анализ распределения полиморфизмов генов MMP1, XRCC1, HFE (2), GSTT у пациентов с меланиновыми гиперпигментациями неопухолевого характера
- Оценка клинической эффективности применения селективной лазерной терапии (755 нм) и фармафореза топического средства на основе гидроксикислот у пациентов с меланиновой гиперпигментацией неопухолевого характера
Клеточное окружение: кератиноциты
Кератиноциты и меланоциты распределены в коже в приблизительном соотношении 30:1 и составляют эпидермальную меланиновую единицу, которая, в свою очередь, тесно взаимодействует с различными типами клеток в эпидермисе [17, 86].
Возникновение острого или хронического воспаления происходит в зависимости от различных экзогенных и эндогенных факторов, включая УФ-облучение, травмы и различные воспалительные заболевания кожи, наиболее распространенными из которых являются атопический дерматит, экзема, акне, псориаз.
Система пигментных клеток активно участвует в воспалительных процессах в эпидермисе и дерме, что приводит к стимулированию продукции меланина и может привести к гиперпигментации [213].
Поствоспалительная гиперпигментация (PIH) является наиболее распространенным приобретенным нарушением пигментации. Распространенность и интенсивность PIH связаны с причиной, длительностью и интенсивностью предшествующего пигментации воспаления [213].
УФ-индуцированная реакция кожи в виде ее потемнения (загара) регулируется через различные паракринные механизмы [181].
При УФ-облучении кератиноциты генерируют различные факторы, которые способны регулировать меланогенез, включающие проопиомеланокортин (POMC) и его производные, такие как альфа-меланоцит-стимулирующий гормон (-MSH) и адренокортикотропный гормон (ACTH) [16,193], оба из которых являются ключевыми стимуляторами меланогенеза [54, 110].
Секретируемый -MSH / ACTH связывается с рецепторами меланокортина 1 (MC1R) на меланоцитах для активации пути cAMP / PKA / CREB [54]. Таким образом повышается уровень тирозиназы, тирозиназа связанного белка-1 (TRP-1) и TRP-2 - трех решающих меланогенных ферментов [71] повышающих уровень микрофтальмия-ассоциированного фактора транскрипции (MITF), который является регулятором транскрипции гена, кодирующего тирозиназу [218].
В ответ на УФ-облучение кератиноциты человека также производят еще один важный POMC-производный пептид – -эндорфин [82], который участвует в жизнедеятельности меланоцитов посредством регуляции их пролиферации и производства пигмента, образования дендритных отростков. Он взаимодействует непосредственно с -опиатным рецептором [122].
Недавние исследования показали, что каждый из этих POMC-пептидов (-MSH, ACTH и -эндорфин) секретируется не только кератиноцитами человека, но и кератиноцитами волосяных фолликулов человека in vitro, и указывают на весомую роль в повышении регуляции меланогенеза в волосяном фолликуле паракринным способом во время цикла активного роста волос [123,124].
Меланогенез зависит от пролиферации меланоцитов и их дифференцировки. TGF- (трансформирующий фактор роста-), важный цитокин, производимый кератиноцитами, который регулирует дифференцировку меланоцитов, относится к семейству TGF-. В отсутствие УФ-облучения TGF-, секретируемый кератиноцитами, ингибирует дифференцировку меланоцитов.
Напротив, УФ-облучение активирует путь Jun-N-терминальной киназы (JNK)/активирующего протеина-1 (АР-1) для подавления производства TGF- в кератиноцитах, что приводит к стимуляции меланогенеза в культуре нормальных человеческих меланоцитов [234].
Активин-а, еще один представитель члена ТФР- семьи, способен подавлять синтез меланина в клетках меланомы мыши [161]. В дополнение к ТФР- и активину, можно отметить костные морфогенетические белки (BMP), которые являются важными членами семейства ТФР-. Они модулируют пигментацию кожи различными путями, которые варьируются в зависимости от конкретного молекулярного типа белка [51].
В ранних исследованиях было показано, что BMP2 стимулирует меланогенез путем регуляции уровня тирозиназы в клетках меланомы мыши [49]. Более позднее исследование показало, что BMP6 увеличивает синтез меланина в нормальных меланоцитах человека путем активизации экспрессии и активности тирозиназы, тогда как BMP4 оказывает ингибирующее влияние на продукцию меланина. Более того, BMP6 также стимулирует транспорт меланина из меланоцитов в кератиноциты, тогда как BMP4 оказывает противоположное влияние [202]. Кроме того, УФ-B активирует экспрессию BMP6 в кератиноцитах человека и снижает экспрессию BMP4, обладающего антимеланогенной активностью. В целом, этот синергизм может способствовать формированию УФ-индуцированного загара [202].
Вариативность эффектов различных молекулярных типов BMP и других членов семейства TGF- предполагают непредвиденные сложности в регуляции пигментации кожи [49,160,161,202].
Фактор стволовых клеток (SCF) и его рецептор KIT играют важную роль в меланогенезе [87,98]. В недавних исследованиях было показано, что мембраносвязанный KIT (m-KIT) и его растворимая форма (s-KIT) в эпидермисе человека в естественных условиях и в меланоцитах человека in vitro играют противоположную роль в пигментации кожи [121]. Связывание SCF с m-KIT на поверхности меланоцитов стимулирует меланогенез, который может быть подавлен синтезом s-KIT в культуре нормальных меланоцитов человека.
Эта антимеланогенная роль s-KIT также наблюдается в трехмерной культуре (3D) модели кожи, которая состоит из эпидермальных меланоцитов и кератиноцитов человека [121].
Интересен тот факт, что после облучения УФ-B, уровень как SCF, так и m-KIT увеличились в культуре как кератиноцитов, так и меланоцитов. Кроме того, УФ-B излучение уменьшает экспрессию s-Kit в меланоцитах и в сочетании с меланогенным эффектом других форм KIT усиливает меланогенез, который приводит к УФ-индуцированной гиперпигментации [121].
Эндотелины (EDNs) в большей степени секретируются кератиноцитами и связываясь с EDN рецепторами на меланоцитах принимают участие в регулировании меланогенеза [113]. В ответ на воздействие УФ-излучения, экспрессия EDNs значительно повышается, что приводит к активизации сигнальных каскадов, среди которых путь EDN1/EDN рецептора типа В (EDNRB) играет значительную роль в УФ-индуцированной пигментации, регулируя фосфорилирование MITF в нормальных человеческих меланоцитах [111,175,237].
Оксид азота (NO), представляет собой свободнорадикальный газ, синтезируемый с помощью фермента NO синтазы (NOS). NO считается одной из основных внутриклеточных и межклеточных сигнальных молекул в различных типах клеток и тканей [159].
Стимулирование меланогенного эффекта посредством паракринных факторов, продуцируемых кератиноцитами в ответ на УФ-излучение, как сообщается, может быть существенно снижено посредством подавления образования NO в со-культуре нормальных человеческих меланоцитов и кератиноцитов. Таким образом предполагается, что NO играет важную роль в УФ-индуцированном меланогенезе [191].
Синтез NO может быть значительно увеличен после воздействия УФ-излучения, что приводит к активации растворимой гуанилат циклазы и последующей активации циклической гуанозин-3 ,5 -монофосфат (cGMP)-зависимой протеинкиназы (PKG) через сильное и быстрое повышение внутриклеточного cGMP, что приводит к усилению активности MITF и тирозиназы, что, в свою очередь, стимулирует меланогенез [74,190].
Простагландины (PGs) – липидные гормоны, которые являются производными арахидоновой кислоты (синтезируются с помощью фермента циклооксигеназы (ЦОГ). Показано, что основным источником их производства в коже являются кератиноциты, также они имеют сродство к рецепторам на эпидермальных меланоцитах [90]. Количество PGE2 и PGF2, основных кератиноцитарных простагландинов, быстро увеличивается после воздействия УФ-излучения и способствует интенсивному дендритному росту у меланоцитов и повышению экспрессии гена тирозиназы посредством активации G-белок-связанных рецепторов на меланоцитах человека, что приводит к усилению пигментации [196,197,198].
Метод генетического анализа
В работе были использованы реактивы: Tween 20 (“Serva”, USA), SDS, Tris-base (ICN, USA), акриламид (ICN, USA), N,N- метилен бисакриламид (ICN, USA), ПСА (Sigma), ТЭМЕД (Reanal). Ферменты: Taq-полимераза (ИХБФМ), лизоцим (Serva), протеиназа К (Serva). Все остальные реактивы: KCl, MgCl2, (NH4)2SO4, ЭДТА, NaCl, NaAc, NaOH, HCl были отечественного производства и имели категорию не ниже осч. Дезоксинуклеотидтрифосфаты (dNTP) и олигонуклеотидные праймеры (табл.1) были синтезированы в ИХБФМ СОРАН.
Выделение ДНК. Метод. В пробирки объемом 1,5 мл с клиническими образцами вносят по 250 мкл лизирующего раствора а1 и тщательно перемешивают на вортексе. Прогревают пробирку 5 мин при 65 С (45-70С), тщательно перемешивают на вортексе до полного растворения материала. Добавляют 20 мкл ресуспендированного на вортексе сорбента (в каждую пробирку отдельным наконечником), хорошо перемешивают содержимое пробирки на вортексе и оставляют в штативе на 2 мин для осаждения сорбента. Суспензию еще раз перемешивают и отстаивают 7-9 мин. Осаждают сорбент на микроцентрифуге в течение 30 с. Отбирают супернатант из каждой пробирки отдельным наконечником (удобно использовать вакуумный отсос с колбой-ловушкой для отбираемой жидкости). Добавляют по 400 мкл отмывочного раствора а2, перемешивают на вортексе до полного ресуспендирования сорбента (если сорбент плохо разбивается, тогда его разбивают при помощи наконечника пипетки) осаждают на "Микроспине" в течение 30 с и отбирают супернатант. Повторяют процедуру отмывки раствором а2 еще раз, тщательно отбирают супернатант. Аналогичным образом осадок промывают 70% этиловым спиртом 1 раз, тщательно отбирают супернатант, и высушивают осадок сорбента при открытых крышках пробирок в термостате при 56С, в течение 10 мин. Добавляют 100 мкл элюирующего буфера а3, тщательно ресуспендируют сорбент, помещают в термостат при 56С на 10 мин. Суспензию осаждают на микроцентрифуге при 13000 об/мин в течение 2 минут. Супернатант содержит очищенную ДНК, проба готова к постановке ПЦР.
Лизирующий раствор а1:
6M Gu HCl
40 mM Tris HCl pH 7-8
36 mM EDTA
Раствор профильтровать через бумажный фильтр и добавить Triton X-100 до концентрации 2% (m/v). Затем довести рН раствора до 8,0 добавлением нескольких капель 10 N NaOH.
Раствор хранить в темноте при комнатной температуре. Срок годности, по крайней мере, три недели.
Отмывочный раствор а2:
55% этанол
10 мМ Tris HCl pH 7-8
100 мМ NaCl
Хранить при комнатной температуре. Срок годности, по крайней мере, три недели.
Элюирующий буфер а3:
10 mM Tris HCl pH 7-8
0,5 mM EDTA
Генотипирование однонуклеотидных замен в режиме реального времени с использованием конкурирующих TaqMan-зондов, комплементарных полиморфным участкам ДНК
Генотипирование однонуклеотидных замен в генах HFE (rs1799945), HFE (rs1800562), XRCC1 (rs25487), MMP1 (rs1799750), GSTT (POL GF 49) проводили методом генотипирования однонуклеотидных замен в режиме реального времени с использованием конкурирующих TaqMan-зондов, комплементарных полиморфным участкам ДНК.
На первом этапе исследования были разработаны методы генотипирования однонуклеотидных замен в генах HFE (rs1799945), HFE (rs1800562), XRCC1 (rs25487), MMP1 (rs1799750), GSTT (POL GF 49) с помощью ПЦР в режиме реального времени с использованием конкурирующих TaqMan-зондов, комплементарных полиморфным участкам ДНК. Зонды отличаются по структуре на один нуклеотид, соответствующий SNP (находится в центре олигонуклеотидного зонда). В реакционной смеси зонды конкурируют друг с другом за гибридизацию с матрицей. При полной комплементарности матрицы и зонда гибридизация будет эффективнее, чем в случае неполной комплементарности. Следовательно, накопление флуоресцентного сигнала, соответствующего полностью комплиментарному зонду, будет преобладать.
Основным параметром, который учитывали для каждой из реакций, являлось соотношение значений флюоресценции (relative fluorescence unit, или RFU) в диапазонах эмиссии красителей FAM и R6G. Так для генотипа С/С (MMP1) интенсивность флюоресценции увеличивалась преимущественно в диапазоне R6G, при генотипе Т/Т (MMP1) интенсивность флюоресценции увеличивалась преимущественно в диапазоне FAM, при гетерозиготном генотипе интенсивность флюоресценции увеличивалась в обоих диапазонах.
Важным критерием достоверности генотипирования служила кластеризация генотипов в группы, строившаяся на основе показателей интенсивности флюоресценции (в относительных единицах флюоресценции -RFU).
Каждый образец амплифицировался с использованием пары праймеров и двух зондов, несущих «гаситель» на 3 -конце и разные флюоресцентные красители (FAM либо R6G) на 5 -конце. Общий объем реакционной смеси составлял 25 мкл, смесь содержала 40-100 нг ДНК; 300 нМ каждого праймера; по 100-200 нМ Taqman-зондов, коньюгированных с FAM или R6G; 200 мкМ-ные dNTP, амплификационный буфер термостабильную Taq-полимеразу – 0,5 ед. акт. /реакц. ПЦР проводилась в следующих условиях: начальная денатурация 3 при 96 С; затем 40 циклов, включающих денатурацию при 96С-8”, отжиг праймеров и последующую элонгацию при 60С- 35” (каждый шаг сопровождался регистрацией флюоресцентного сигнала в диапазонах, соответствующим интервалам флюоресценции флюорофоров FAM и R6G).
Генотипирование однонуклеотидных замен с использованием флюоресцентно-меченого олигонуклеотидного зонда и анализа кривых плавления Типирование полиморфных локусов HFE (rs1799945), HFE (rs1800562), XRCC1 (rs25487), MMP1 (rs1799750), GSTT (POL GF 49) проводили методом Fluorescent melt curve analysis (FMCA) с использованием флюоресцентно меченого олигонуклеотидного зонда с последующим плавлением амплификационных продуктов и анализа кривых плавления. Суть метода заключается в том, что участок гена, содержащий полиморфную замену, амплифицируется с использованием прямого и обратного праймеров, при этом для преимущественной наработки одной из цепей концентрация одного из праймеров в несколько раз превышает концентрацию другого (лимитирующий праймер). В амплификационную смесь также добавляется олигонуклеотидный зонд, комплементарный полиморфному участку нарабатываемой цепи и несущий на 5 -конце флюоресцентную метку, а на 3 -конце – тушитель флюоресценции. Далее амплификационная смесь инкубируется при температуре, позволяющей зонду образовать дуплекс с наработанной цепью, и плавится со съёмом сигнала в режиме реального времени. Кинетика плавления дуплекса различается благодаря полной или неполной гибридизации зонда с амплификационным продуктом, содержащим полиморфную замену, что позволяет определить генотип образца. В случае полной гибридизации температура, при которой цепи плавились, была выше, чем в случае неполной.
Краситель флюоресцировал с разной интенсивностью в зависимости от того, прикреплен ли зонд к ДНК или нет, соответственно в момент плавления дуплекса флуоресценция резко падала.
Анализ распределения полиморфизмов генов MMP1, XRCC1, HFE (2), GSTT у пациентов с меланиновыми гиперпигментациями неопухолевого характера
Было проведено исследование полиморфизма следующих генов:
Ген ММР1 – при воздействии УФ-излучения резко увеличивается его экспрессия, следствием чего является усиление активности ферментов, способных оказывать разрушающее воздействие на внеклеточный матрикс. Вследствии этого происходит деградация коллагена, а также фрагментарное разрушение и повреждение базальной мембраны, благоприятствующее проникновению меланина и меланоцитов в дерму. Это может способствовать возникновению стойкой гиперпигментации, устойчивой к терапии.
Ген XRCC1 (ген репарации ДНК) и ген BLM (кодирует белок, участвующий в поддержании стабильности ДНК в процессе ее репликации).
При понижении активности вышеуказанных генов способность к нейтрализующему действию УФ-излучения понижена или отсутствует, следствием чего является накопление повреждений в ДНК, что может приводить к патологической пигментации.
Ген HFE – ассоциация с наследственным гемохроматозом. Полиморфизм HFE приводит к избыточному поглощению железа в желудочно-кишечном тракте, что опосредованно может способствовать возникновению гиперпигментации. Дефект гена HFE имеет широкое распространение в североевропейских популяциях.
Ген GSTT – отвечает за активность фермента глутатион-S-трансферазы. При дефекте гена GSTТ или его мутации данный фермент не образуется, вследствие чего значительно снижается нейтрализация токсичных соединений и снижается возможность эффективной коррекции оксидативного стресса. Дефект данного гена может быть патогенетической основой гиперпигментации. Сравнительный анализ полиморфизмов генов MMP1, XRCC1, HFE (2), GSTT определил статистически значимую разницу в распределении аллелей между тремя группами пациентов (табл. 5).
1 группа: пациенты с диагнозом мелазма/хлоазма (12 пациентов):
ген MMP1: шифр аллеля 3 определен у 11 пациентов (91,6%), шифр аллеля 2 – у 1 пациента (8,4%), шифр аллеля 1 – у 0 (0%) пациентов;
ген XRCC1: шифр аллеля 3 определен – у 10 пациентов (83,4%), шифр аллеля 2 – у 1 пациента (8,3%), шифр аллеля 1 – у 1 пациента (8,3%);
ген HFE (rs1799945): шифр аллеля 3 определен – у 1 пациента (8,3%), шифр аллеля 2 – у 2 пациентов (16,7%), шифр аллеля 1 – у 9 пациентов (75%);
ген HFE (rs1800562): шифр аллеля 3 определен – у 0 пациентов (0%), шифр аллеля 2 – у 2 пациентов (16,6%), шифр аллеля 1 – у 10 (83,4%) пациентов;
ген GSTT: шифр аллеля 3 определен – у 5 пациентов (41,6%), шифр аллеля 2 – у 4 пациентов (33,3%), шифр аллеля 1 – у 3 пациентов (25,1%).
2 группа: пациенты с диагнозом поствоспалительная/ посттравматическая гиперпигментация (14 пациентов):
ген MMP1: шифр аллеля 3 определен у 12 пациентов (85,7%), шифр аллеля 2 – у 2 пациентов (14,3%), шифр аллеля 1 – у 0 пациентов (0%);
ген XRCC1: шифр аллеля 3 определен у 1 пациента (7,3%), шифр аллеля 2 – у 2 пациентов (14,2%), шифр аллеля 1 – у 11 пациентов (78,5%);
ген HFE (rs1799945): шифр аллеля 3 определен у 10 пациентов (71,6%), шифр аллеля 2 – у 2 пациентов (14,2%), шифр аллеля 1 – у 2 пациентов (14,2%);
ген HFE (rs1800562): шифр аллеля 3 определен у 11 пациентов (78,5%), шифр аллеля 2 – у 3 пациентов (21,5%), шифр аллеля 1 – у 0 пациентов (0%);
ген GSTT: шифр аллеля 3 определен у пациентов 9 (64,2%), шифр аллеля 2 – у 4 пациентов (28,5%), шифр аллеля 1 – у 1 пациента (7,3%).
3 группа: пациенты с диагнозом солнечное лентиго (12 пациентов):
ген ММР1: шифр аллеля 3 определен у 2 пациентов (16,6%), шифр аллеля 2 - у 2 пациентов (16,6%), шифр аллеля 1 - у 8 пациентов (66,8%);
ген XRCC1: шифр аллеля 3 определен у 9 пациентов (75%), шифр аллеля 2 - у 3 пациентов (25%), шифр аллеля 1 - у 0 пациентов (0%);
ген HFE (rs 1799945): шифр аллеля 3 определен у 3 пациентов (25%), шифр аллеля 2 - у 2 пациентов (16,6%), шифр аллеля 1 - у 7 пациентов (58,4%);
ген HFE (rsl800562): шифр аллеля 3 определен у 1 пациента (8,3%), шифр аллеля 2 - у 4 пациентов (33,4%), шифр аллеля 1 - у 7 пациентов (58,3%);
ген GSTT: шифр аллеля 3 определен у 7 пациентов (58,3%), шифр аллеля 2 - у 3 пациентов (25%), шифр аллеля 1 - у 2 пациентов (16,6%).
При этом у пациентов из 1 группы среднее значение шифра аллеля гена ММР1 составило 2,9 ±0,1 (р 0,01), гена XRCC1 - 2,7±0,1 (р 0,01), гена HFE (rsl799945) - 1,3±0,1 (р 0,01), гена HFE (rsl800562) - 1,2±0,1 (р 0,01), гена GSTT - 2,2±0,l(p 0,01).
У пациентов из 2 группы среднее значение шифра аллеля гена ММР1 составило 2,8±0,1 (р 0,01), гена XRCC1 - 1,2±0,1 (р 0,01), гена HFE (rsl799945) - 2,5±0,1 (р 0,01), гена HFE (rsl800562) - 2,7±0,1 (р 0,01), гена GSTT - 2,5±0,l(p 0,01).
У пациентов из 3 группы среднее значение шифра аллеля гена ММР1 составило 2,5±0,1 (р 0,01), гена XRCC1 - 2,7±0,1 (р 0,01), гена HFE (rs 1799945) - 1,4±0,1 (р 0,01), гена HFE (rs 1800562) - 1,5±0,1 (р 0,01), гена GSTT - 2,4±0,1 (р 0,01) (рис.14).
Соответственно, у пациентов с мелазмой отмечалось высокое значение шифра аллелей генов MMP1, XRCC1, GSTT, в то же время шифр аллеля гена HFE (rs1799945) и HFE (rs1800562) показал средние значения.
У пациентов с посттравматической/поствоспалительной пигментацией отмечалось высокое значение шифра аллелей генов MMP1, HFE (rs1799945) и HFE (rs1800562), GSTT, в то же время шифр аллеля гена XRCC1 показал средние значения.
У пациентов с солнечным лентиго отмечалось высокое значение шифра аллелей генов MMP1, XRCC1, GSTT, в то же время шифр аллеля гена HFE (rs1799945) и HFE (rs1800562) показал средние значения.
Таким образом, отмечается аналогичность результатов генетического исследования в 1 и 3 группах.
Оценка клинической эффективности применения селективной лазерной терапии (755 нм) и фармафореза топического средства на основе гидроксикислот у пациентов с меланиновой гиперпигментацией неопухолевого характера
При анализе эффективности терапии разными методологическими подходами (сочетанная терапия СЛИ+ФФ; СЛИ; ФФ) не определено статистически значимой разницы внутри групп пациентов в зависимости от этиологического фактора гиперпигментации, поэтому сводка статистических результатов освещается в среднем по группам.
Оценка терапевтической эффективности использования методов моно-и комбинированной терапии проводилась с помощью шкал IGA (адаптированная) и GAIS.
Во всех группах пациентов после завершения терапевтического курса было определено значимое улучшение как по шкале IGA (рис. 15,16), так и по шкале GAIS (рис.17,18,19).
До начала проведения курса терапии в 1 группе (29 пациентов, селективная терапия александритовым лазером + фармафорез препарата на основе гидроксикислот) значение IGA составляло 1,8 ± 0,6. После проведенного курса лечения параметры IGA снизились на 72,2% и достигли 0,5 ± 0,4.
До начала проведения курса терапии во 2 группе (28 пациентов, селективная терапия александритовым лазером) значение IGA составляло 1,6 ± 0,2. После проведенного курса лечения параметры IGA снизились на 50% и достигли 0,8 ± 0,4.
До начала проведения курса терапии в 3 группе (28 пациентов, фармафорез препарата на основе гидроксикислот) значение IGA составляло 1,9 ± 0,3. После проведенного курса лечения параметры IGA снизились на 36,8% и достигли 1,2 ± 0,3.
Оценка пациентами эффективности проведенного лечения по результатам данных шкалы GAIS определила, что большая часть больных были удовлетворены результатом (рис.17,18,19). В 1 группе отмечалась наибольшая удовлетворенность результатами терапии: 14 пациентов (48,2%) оценили результат терапии на 3 балла, 8 пациентов (27,5%) – оценили на 2 балла, 7 пациентов (24,1%) – на 1 балл.
Во 2 группе 6 пациентов (21,4%) оценили результат на 3 балла, 13 пациентов (46,4%) – на 2 балла, 9 пациентов (32,1%) – на 1 балл.
В 3 группе 3 пациента (10,7%) оценили результат терапии на 3 балла, 14 пациентов (50%) – оценили на 2 балла, 11 пациентов (39,2%) – на 1 балл.
Оценка результатов терапии врачом-исследователем почти полностью совпала с оценкой пациентов (рис. 20,21,22).
В 1 группе – 13 пациентов (44,8%) - 3 балла, 12 пациентов (41,3%) - 2 балла, 4 пациента (13,7%) - 1 балл.
Во 2 группе – 7 пациентов (25%) - 3 балла, 15 чел. (53,5%) - 2 балла, 6 пациентов (21,4%) - 1 балл.
В 3 группе - 5 пациентов (17,8%) - 3 балла, 15 пациентов (53,5%) - 2 балла, 8 пациентов (28,5%) - 1 балл.
Большинство пациентов из 1 группы (16 пациентов из 29), из 2 группы (20 пациентов из 28) и из 3 группы (21 пациент из 28) отметившие результат терапии как хороший, высказали готовность продлить курс процедур.
Статистически значимая разница между оценкой врача и пациентов не отмечалась (в общем и в каждой группе). Оценка врача совпала с оценкой пациентов: результат проведенной терапии в 1 группе оказался, по их мнению, более существенным, чем во 2 и 3 группах (p 0,01).
Соответственно, по итогам опроса как пациентов, так и врача, следует, что комбинированный метод терапии гиперпигментации (селективная терапия александритовым лазером + фармафорез препарата на основе гидроксикислот) обеспечил явный эстетический результат осветления очагов гиперпигментации и выравнивания тона лица у большинства пациентов. Самооценка испытуемых и врачебная оценка результативности курса терапии практически совпали.