Содержание к диссертации
Введение
1. Введение
1.1. Актуальность темы .4
1.2. Цель и задача исследований 6
1.3. Научная новизна .7
1.4. Теоретическая и практическая значимость 7
1.5. Личный вклад 8
1.6. Апробация работы 8
1.7. Основные положения, выносимые на защиту .8
1.8. Публикация результатов исследований .9
2. Обзор литературы 9
2.1. Туберкулез (Tuberculosis) общие сведения о возбудителях туберкулеза...9
2.2. Проблема неспецифических реакций на туберкулин и атипичные микобактерии .11
2.3. Атипичные (нетуберкулезные) микобактерии 15
2.4. Классификация микобактерии 20
2.5. Сенсибилизирующие свойства атипичных микобактерии 22
2.6. Лабораторные методы диагностики туберкулеза животных .36
2.6.1. Бактериоскопический метод 36
2.6.2.Культуральный метод 38
2.6.3.Биологический метод .43
2.7. Патоморфологический метод 47
2.8. Молекулярно-генетические исследования .52
3. Собственные исследования .57
3.1. Материалы и методы исследования .57
4. Результат исследований 69
4.1. Актуальность проблемы выделения различных видов микобактерий на территории республики Таджикистан и климато-географическая характеристика Хатлонская область . 76
4.1.1. Климато географическая характеристика Хатлонской области РТ 77
4.1.2. Анализ эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в Хатлонской области РТ .78
4.1.3. Оптимизация системы идентификации наиболее часто выделяемых видов микобактерий с применением культурально-морфологических, биохимических и бактериологических методов .82
4.1.4. Определение родовой принадлежности выделенных культур на яичных питательных средах .83
4.1.5. Дифференциация возбудителей туберкулеза и нетуберкулезных микобактерий .84
4.1.6. Дифференциация нетуберкулезных микобактерий на группы по Раньону .88
4.1.7. Частота выделения микобактерий из биоматериала от реагировавщих и нереагировавщих на туберкулин животных и объектов внешней среды 89
4.1.8. Изучение сенсибилизирующих свойств выделенных культур атипичных микобактерий .103
5. Обсуждение результатов исследований 110
6. Выводы 115
7. Практические предложения .117
8. Список литературы 118
- Теоретическая и практическая значимость
- Атипичные (нетуберкулезные) микобактерии
- Актуальность проблемы выделения различных видов микобактерий на территории республики Таджикистан и климато-географическая характеристика Хатлонская область
- Определение родовой принадлежности выделенных культур на яичных питательных средах
Введение к работе
1.1. Актуальность темы. Среди инфекционных заболеваний животных особого внимания
заслуживает туберкулез крупного рогатого скота, так как эта болезнь не только причиняет
большой экономический ущерб животноводству, но и представляет серьезную опасность для
здоровья людей.
Известно, что основой профилактических и оздоровительных мероприятий при туберкулезе животных является диагностика этой болезни. Для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота на сегодняшний день основным, массовым и общедоступным для применения в широкой ветеринарной практике методом является внутрикожная туберкулиновая проба с ППД туберкулином для млекопитающих.
В последние годы при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота внутрикожной пробой с ППД туберкулином для млекопитающих все более актуальной становится проблема неспецифических реакций на туберкулин.
Атипичные микобактерии широко распространены в природе. Многие авторы считают, что атипичные микобактерии входят в состав нормальной почвенной микрофлоры. Кроме того установлено, что атипичные микобактерии являются частью окружающей нас внешней среды и мы не можем от них избавиться.
В эпизоотологии туберкулеза проблема видового состава выделяемых микобактерии и его региональных особенностей имеет не только теоретическое, но и большое практическое значение, так как создает основу для дифференцированного проведения профилактических и оздоровительных мероприятий при туберкулезе животных.
Н.П. Овдиенко, В.И. Косенко, А. Х. Найманов, А.М. Кадочкин, Б.И. Антонов, М.И Гертман (1990) указывают, что атипичные микобактерии широко распространены в природе и их можно выделять из разных объектов внешней среды, фекалий и молока коров. Однако, не ясны причины при которых начинает проявляться сенсибилизация, по видимому неоднократное поступление значительного количества атипичных микобактерий и изменение физиологического состояния организма животных, под влиянием неблагоприятных условий содержания, способствует такой сенсибилизации и у животных происходит иммунологическая перестройка. Поэтому, целесообразно проводить изучение реактивности организма животных и носительства разных видов микобактерий на разных территориях страны.
С учетом указанного, считаем, что на современном этапе борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота в Республике Таджикистан, изучение распространения, видовой принадлежности и сенсибилизирующих свойств выделенных культур атипичных микобактерий является своевременной и актуальной темой для выполнения диссертационной работы.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось изучение
распространенности, видового состава атипичных микобактерий, выделенных от реагировавших
на туберкулин животных в животноводческих хозяйствах Республики Таджикистан, а также
определение сенсибилизирующих свойств наиболее распространенных на территории республики
видов атипичных микобактерий.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
выделить культуры микобактерий из проб биоматериала от реагировавшего на туберкулин крупного рогатого скота;
изучить культурально-морфологические свойства выделенных культур микобактерий;
изучить биохимические свойства выделенных культур микобактерий;
- изучить сенсибилизирующие свойства некоторых видов выделенных культур атипичных
микобактерий.
1.3. Научная новизна. Впервые в Республике Таджикистан изучено распространение и
видовой состав атипичных микобактерий, выделенных от реагировавших на туберкулин животных
неспецифическими реакциями. Изучены и охарактеризованы культурально-морфологические
свойства основных видов атипичных (нетуберкулезных) микобактерий, выделенных из
биоматериала от реагировавших на туберкулин животных. Оптимизирована схема идентификации
наиболее часто выделяемых видов микобактерий. Установлены сенсибилизирующие свойства
атипичных микобактерий: M. Intracellularae, M. Fortuitum, M. Smegmаtis, M. Scrofulaceum.
1.4. Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований по определению
распространенности и видового состава микобактерий, выделенных от реагировавших на
туберкулин животных создают основу для дифференцированного проведения профилактических и
оздоровительных мероприятий при микобактериальных инфекциях. Определение видового
состава и сенсибилизирующих свойств атипичных микобактерий является основой для создания и
конструирования аллергенов для дифференциации неспецифических реакций на туберкулин
методом симультанной туберкулиновой пробы.
Оптимизированная схема идентификации основных видов атипичных микобактерий повышает качество бактериологических исследований при микобактериозах животных и может быть использована в бактериологических лабораториях в повседневной работе с культурами микобактерий.
1.5. Личный вклад соискателя заключается в бактериологическом исследовании проб
биоматериала от реагировавшего на туберкулин крупного рогатого скота, изучении культурально-
морфологических, биологических свойств микобактерий, анализе и обобщении результатов
исследований, разработке оптимизированной схемы идентификации атипичных микобактерий.
1.6. Апробация работы. Материалы исследований доложены на:
заседании Ученого Совета Ветеринарного института ТАСХН 2010-2014 гг.;
научной конференции Ветеринарного института посвященной 20-летию ТАСХН в 2011 г.;
научной конференции молодых ученых Ветеринарного института ТАСХН, Душанбе 2013-2014 гг.
1.7. Основные положения, выносимые на защиту. Полученные результаты исследований
позволяют вынести на защиту следующие положения:
- результаты установления распространенности и видового состава атипичных
микобактерий, выделенных от реагировавших на туберкулин животных неспецифическими
реакциями;
- результаты изучения культурально-морфологических и биохимических свойств разных
видов микобактерий;
результаты изучения сенсибилизирующих свойств некоторых видов атипичных микобактерий;
оптимизированная схема идентификации наиболее часто выделяемых атипичных микобактерий.
1.8. Публикации результатов исследований. По материалам диссертационной работы
опубликовано 5 научных работ, в том числе 3 в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования
и науки РФ.
1.9. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 142 страницах
компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований,
обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и списка литературы.
Список использованной литературы включает 259 наименований из них 155 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 14 таблицами.
Теоретическая и практическая значимость
После открытия возбудителя туберкулеза (Р.Кох, 1882; 1890), уже в начальной стадии применения туберкулиновой пробы и аллергической диагностики туберкулеза некоторые исследователи обратили внимание на неспецифические реакции – когда у реагирующих на туберкулин животных отсутствовали характерные для туберкулеза изменения, а лабораторные исследования патматериала от убитых животных давали отрицательный результат.
А. Eber (1895) впервые столкнулся с фактом, когда не у всех реагировавших на туберкулин животных на вскрытии был подтвержден диагноз на туберкулез.
В дальнейшем этой проблемой занимались I. Marsh (1932) A. Grawford (1936), A. Meyn (1953), D. Lauterbach (1953), T. Schliseser (1953).
В 50-е годы большинство авторов причисляли к причинам неспецифических реакций возбудителей туберкулеза птичьего вида, паратуберкулеза, «узелкового дерматита» (Dermanits nodosa) М.К. Юсковец (1953), И.В. Поддубский (1953), W. Witcherlich, J. Reus (1953), C. Peterson (1956), A. Meyn (1957).
В дальнейшем в разные годы, в разных странах все больше исследователей стали получать доказательства того, что неспецифические реакции из казуистических случаев стали превращаться в острую проблему повсеместного проявления неспецифических реакций при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота.
В настоящее время основой оздоровительных и профилактических мероприятий при туберкулезе крупного рогатого скота является диагностика болезни внутрикожной туберкулиновой пробой. Основной недостаток внутрикожной туберкулиновой пробы, в том что она указывает только на заражение животных различными видами микобактерий. В связи с тем, что животные могут быть заражены или сенсибилизированы не только микобактериями туберкулеза (M. Bovis и M. Tuberculosis), но и разного вида близкородственными нетуберкулезными (атипичными) микобактериями – внутрикожная туберкулиновая проба выявляет наряду с больными животными и здоровых животных с неспецифическими реакциями на туберкулин.
Атипичные микобактерии имеют общие с M. Bovis антигенные детерминанты, которых достаточно для сенсибилизации и аллергического ответа организма на туберкулин М.М. Авербах, 1976; Н.В. Медуницин, 1983. Такие атипичные микобактерии приживаются в организме от 1 до 3 и более месяцев (J. Ueiszfeiler, 1975; В.Д. Свиридов, 1989).
При убое реагирующих животных с неспецифическими реакциями, характерных для туберкулеза изменений не обнаруживают, биопроба на морских свинках - отрицательная, а при культуральном исследовании патматериала от убитых животных, как правило, выделяют атипичные микобактерии. В этой связи лабораторная диагностика туберкулеза приобретает первостепенное значение для оценки эпизоотического состояния хозяйств по туберкулезу.
Неспецифические реакции на туберкулин условно разделяют на парааллергические, когда в основе возникновения их лежит сенсибилизация организма животных различными видами микобактерий, и псевдоаллергические, обусловленные причинами немикобактериального характера или неустановленной природы.
Дифференциальная диагностика неспецифических реакций остается основной проблемой при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. Со времени возникновения этой проблемы были предложены различные методы их дифференциации: применение малых доз туберкулина, переисследование реагирующих животных глазной пробой, внутривенной пробой, пальпебральной пробой, реакция бласттрансформации лимфоцитов, реакция специфического лизиса лейкоцитов, надплевральная новокаиновая блокада, метод подавления неспецифических реакций раствором хлористого кальция, симультанная туберкулиновая проба с различными аллергенами, применение серологических реакций (РСК с КТА УНИИЭВ, РНГА с полисхаридным антигеном ВИЭВ и др.
Однако, наибольшее признание и распространение во всем мире получил метод симультанной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и ППД-туберкулином для птиц. Этот метод известен давно. Так, еще в 1925 году K. Plum отметил повышенную реактивность скота, зараженного микобактериями туберкулез птичьего вида, на туберкулин для птиц и меньшую на туберкулин для млекопитающих.
В дальнейшем многими исследователями было подтверждено, что при исследовании «неспецифически» реагирующих животных, одновременно туберкулинами для млекопитающих и птиц, более выраженные реакции отмечают на туберкулин для птиц.
В настоящее время во всех зарубежных странах для дифференциации неспецифических реакций применяют симультанную пробу с ППД-туберкулином для млекопитающих и ППД-туберкулином для птиц. В Российской федерации для дифференциации неспецифических реакций с 1978 года используется симультанная проба с применением ППД-туберкулина для млекопитающих и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ). В состав КАМ раньше входили три вида атипичных микобактерий:
M. Intracellularae (3 гр. по Раньону), M. Scrofulaceum (2 гр.) M. Kansasii (1 гр.). Впоследствии, в связи с тем, что M. Kansasii на территории России не выделяется, его исключили из состава КАМ, т.е. в настоящее время КАМ готовят только из двух видов атипичных микобактерий (M. Intracellularae и M. Scrofulaceum).
Атипичные (нетуберкулезные) микобактерии
Через 2-3 дня пробки пробирок парафинировали, посевы культивировали при температуре 37оС в течение 3 месяцев. При появлении роста определяли характер колоний, готовили мазки и красили их по Циль-Нельсену.
Скорость роста и культуральные свойства субкультур микобактерий изучали на среде Левенштейна-Йенсена при 25оС, 37оС, 45оС и 52оС, а также на мясопептонном агаре (МПА) и мясо-пептоном бульоне (МПБ) при 37оС.
Для определения вида микобактерий использовали биологический метод. С этой целью ставили биопробу на трех морских свинках, трех кроликах и на трех курах. Культуру микобактерий вводили животным в дозе 1 мг сырой бактериальной массы, суспендированной в 1 мл стерильного физиологического раствора. Морским свинкам – подкожно в области паха, кроликам – внутривенно в краевую вену уха, курам – в подкрыльцевую вену. У морских свинок при развитии туберкулезного процесса через 2-4 недели на месте введения культуры образовалась язва, а также увеличение и уплотнение регионарного лимфатического узла. Свинки прогрессивно худели. У кроликов и кур при развитии туберкулеза наблюдали истощение и снижение аппетита. Кур исследовали туберкулином. Через три месяца морских свинок, кур и кроликов убивали, вскрывали и проводили бактериологичекое исследование паренхиматозных органов. Принадлежность исследуемой культуры к тому или иному виду определяли по следующим данным: - при генерализованном процессе у морских свинок и кроликов – M. Bovis; - при генерализованном процессе у морских свинок и кроликов -отсутствие поражения или единичные очажки в легких – M. Tuberculosis; - при генерализованном процессе у кур, а у кроликов сепсис – M. Avium Бактериологическую и биохимическую идентификацию микобактерий проводили в несколько этапов:
Первый этап - родовая идентификация: самым важным родовым свойством МБ является строгая кислоустойчивость. Это свойство микроорганизмов определяли при окраске по Циль-Нельсену или флуорохромами. Для этого все культуры, выросшие на питательной среде подвергали окрашиванию и микроскопированию. Микобактерии при окрашивании карболовым фуксином устойчивы к обесцвечиванию солянокислым спиртом или неорганическими кислотами и имеют красный цвет. Родственные микроорганизмы при окрашивании отличаются по форме, проявляют слабую кислоустойчивость и наряду с красными палочками могут отмечаться синие. Второй этап – заключается в разделении микобактерий относящихся к M. Tuberculosis Complex (M. Bovis, M. Tuberculosis и т.д.) и на атипичные нетуберкулезные микобактерии (НТМБ). Для дальнейшего изучения культуральных свойств микобактерий накапливали бактериальную массу выросших колоний на яичной среде. Для пересева отбирали колонии, наиболее характерные по внешнему виду для микобактерий туберкулеза. Для дифференциации культур возбудителей туберкулеза бычьего, человеческого и атипичных микобактерий, накопленную бакмассу пересевали на различные питательные среды яичные, мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА) и яичную среду с салицилатом натрия. Культивировали их при разных температурных режимах: 20-22о, 37-38о и 45оС.
Для пересева платиновой петлей (диаметр 2-3 мм) снимали 1-2 петли культуры и переносили в стерильную пробирку или пенициллиновый флакон. Бактериальную массу тщательно растирали в 1-1,5 мл физиологического раствора, который добавляли небольшими порциями в пробирку (флакон). Приготовленную взвесь вносили пастеровской пипеткой по 2-3 капли в девять пробирок со средой Левеншей-на-Иенсена (по 3 пробирки на каждый температурный режим), в три пробирки яичной среды с салицилатом натрия, в три пробирки с МПА и МПБ. На пробирках делали надписи с указанием номера экспертизы, даты пересева и температурного режима культивирования. Пробки парафинировали и пробирки устанавливали в термостат при заданных температурах. Пробирки с посевами на мясопептонный бульон, мясопептонный агар и на яичную среду с салицилатом натрия инкубировали в термостате при 37оС.
При пересевах учет появления роста в первые 10 суток культивирования проводили каждые двое-трое суток и каждые пять дней в последующие три недели. Характер роста на яичных средах МПБ описывали в следующем порядке: пленка – наличие, отсутствие; интенсивность развития пленки – тонкая, умеренно развитая, толстая; поверхность пленки – гладкая, зернистая, морщинистая; цвет пленки; нити (наличие и характер): тонкие, толстые, короткие, длинные; осадок – плотный, рыхлый, хлопьевидный, цвет. изменение среды культирования – помутнение, цвет. Помутнение среды указывало на загрязнение культуры. - на МПА: Микобактерии туберкулеза не образуют пигмент и растут на яичных средах без салицилата натрия, M. Tuberculosis и M. Bovis растут при температуре 38-37о, не растут на МПБ и МПА. Появление роста в первые 7 дней и приобретение пигмента указывает на то, что выделенная культура не относится к M. Tuberculosis сomplex. Для этой группы микобактерий характерно появление роста через 20-60 сутки, колонии имеют светло-кремовый цвет, шероховатую поверхность (R - форма), неровные края.
Актуальность проблемы выделения различных видов микобактерий на территории республики Таджикистан и климато-географическая характеристика Хатлонская область
В результате проведенных исследований все 59 изучаемых культур атипичных микобактерий были распределены на 4 группы по классификации Раньона. К I группе отнесли только одну культуру атипичных микобактерий, которая росла в S- форме, образовала пигмент под воздействием света, росла медленно при t -250С и 370С, не росла при t- 450С. К II группе отнесли 9 медленнорастущих в S-форме культур атипичных микобактерий, образующих желтый или оранжевый пигмент на свету и в темноте. Рост при t – 450С отсутствовал. К III группе отнесли 17 медленно растущих без пигментных культур атипичных микобактерий, которые росли и в S- форме, и в R-форме. К IV группе быстрорастущих микобактерий отнесли 32 культуры атипичных микобактерий, которые вырастали с образованием пигмента и без образования пигмента. Росли на МПБ в виде пристеночного кольца или пленки на поверхности МПБ в течении 3 дней.
Данные таблицы 10 показывают, что из 59 изучаемых культур- 1 (1,7%) была отнесена к I группе, 9 (15,2%) - к II группе, 17 (28,8 %) - к III группе и 32(54,2 %) - к IV группе атипичных микобактерий по классификации Раньона, т.е. на территории республики Таджикистан наиболее часто (54,2%) выделяются атипичные микобактерии IV группы по классификации Раньона. Следует указать, что для уточнения и проверки скорости роста атипичных микобактерий, а также дифференциации быстрорастущих атипичных микобактерий от медленно растущих микобактерий мы использовали мясо - пептонный бульон (МПБ). Все изучаемые культуры атипичных микобактерий росли при t – 37 0С на МПБ, но все 32 быстрорастущих атипичных микобактерий уже через 3 дня после посева росли с образованием на поверхности МПБ пристеночного кольца или пленки, тогда как медленнорастущие атипичные микобактерии образовывали только придонный рост. При проведении исследований также установлено, что хранение культур микобактерий нужно проводить на МПБ, так как хранение культур на плотной питательной среде Левенштейна - Йенсена более чем 3 месяца, приводит к высыханию питательной среды и соответственно культур микобактерий.
Хранение культур микобактерий в пробирках с МПБ сохраняет культуры микобактерий более чем 12 месяцев.
В дальнейшем, в своих исследованиях, с целью установления видов изучаемых нами атипичных микобактерий I, II, III и IV группы по классификации Раньона мы проводили изучение биохимических свойств культур атипичных микобактерий. Изучение биохимических свойств выделенных культур атипичных микобактерий Для изучения биохимических свойств культур атипичных микобактерий мы использовали следующие тесты: реакцию каталазной активности, реакцию термостабильности каталазы, гидролиз-твин – 80, осаждение лимонно-аммиачного железа, формамидазную, никотинамидазную, пиразинамидазную и арилсульфатазную активность, редукцию теллурита и телерантность к хлористому натрию. Такие биохимические тесты, как ниациновая проба, корд- фактор, редукция нитратов и другие, связанные с идентификацией M. Tuberculosis и M. Bovis. Мы не использовали, так как возбудители туберкулеза среды изученных нами культур отсутствовали и такой задачи мы не ставили.
Каталазная активность. Реакция основана на свойстве фермента каталазы, разлагать перекись водорода на воду и кислород. Реакция является простой и быстро выполнимой, но, как и другие биохимические тесты, требует одинаковых условий при ее выполнении для всех культур. Необходим определенный возраст (для быстрорастущих культур 5-7 дней, для медленнорастущих - не менее 3 недель) в фазе интенсивного роста, с достаточным количеством бактериальной массы.
При изучении каталазной активности все неследуемые культуры, отнесенные по культуральным и морфологическим свойствам к микобактериям I, II и IV группы по Раньону, дали положительную реакцию, а культуры микобактерий, отнесенные к нефотохромогенным микобактериям III группы по Раньону – отрицательную реакцию.
Культуры микобактерий I и II группы по Раньону образовывали столбик пены более 100 мм, а быстрорастущие микобактерии, хотя и давали положительную реакцию, но высота столбика пены была различная. У одних культур она разнялась 55, у других- 80, а у третьих – 100 и более мм.
Термостабильность каталазы. Реакция основана на неодинаковой устойчивости фермента каталазы к нагреванию у различных видов микобактерий. Она проста для выполнения, но требует дефицитных реактивов.
Гидролиз твин-80. Тест использован нами для дифференциации фотохромогенных, скотохромогенных, а также микобактерий комплекса avium-intracellulare от других видов нефотохромогенных микобактерий III-й группы по Раньону. Его проводили с медленно растущими культурами. Для видовой дифференциации быстрорастущих микобактерий IV группы по Раньону он мало пригоден. Реакция осаждения лимонно- аммиачного железа. Эту реакцию применили для видовой дифференциации быстрорастущих микобактерий IV группы по Раньону. Реакция проста при выполнении, но окончательный ее учет проводится только через 2 недели, что не совсем удобно. При проведении реакции осаждения лимонно- аммиачного железа получили положительную реакцию у всех 32 культур быстрорастущих микобактерий.
Определение родовой принадлежности выделенных культур на яичных питательных средах
Проведенные нами исследования и полученные результаты анализа этих исследований полностью подтверждают эти положения. Кроме того, мы поддерживаем мнение В.Н. Кисленко, 1976; Н.А. Шкиль с соавт., 1999; А. С. Донченко, 1992, 1994; Р.А. Нуратинова, 1998; что чем выше расположен район над уровнем моря и ниже уровень грунтовых вод, тем ниже напряженность эпизоотической ситуации по туберкулезу животных.
Изучение эпизоотологии туберкулеза животных неразрывно связано с определением ареала распространения и выделения микобактерий среди животных и объектах внешней среды. Следует отметить, 80-90 годы в период выявления значительного количества больных туберкулезом животных и регистрации неблагополучных пунктов в Республике Таджикистан постоянно выделяли культуры M.Bovis от реагировавших на туберкулин животных и объектов внешней среды.
В последние годы, по мере улучшения эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота, все чаше стали выделяться атипичные микобактерии. Атипичные микобактерии выделяются от реагирующих и нереагирующих на туберкулин животных и объектов внешней среды. Установлены случаи, когда из одной и той же пробы биоматериала от убитых животных выделяли культуру M.Bovis и различные виды атипичных микобактерий. Полученные нами результаты исследований вполне соответствуют данным о возможности смешанной инфекции (M.Bovis + различные виды атипичных мкобактерий) А.И. Алиева с соавт. (1986), И.Т.Нечваля (1986), И.И. Румачик (1987), Н.П. Овдиенко (1991), А.Х. Найманова (1993, 2004), А.С. Донченко, В.Н. Донченко (1994).
Культуры атипичных микобактерий также выделяли из проб объектов внешней среды. Установлено, что из проб объектов внешней среды равнинной зоны, микобактерий выделяли гораздо чаше, чем из проб горной зоны. Так, при бактериологическом исследовании проб биоматериала от 124 проб, реагировавших и нереагировавших на туберкулин коров, нами выявлено 44 культуры атипичных микобактерий. При бактериологическом исследовании 44 проб из объектов внешней среды выделено 15 культур атипичных микобактерий. В итоге всего нами было выделено 59 различных культур атипичных микобактерий.
В соответствии классификации атипичных микобактерии по Раньону по скорости роста и способности к пигментообразованию эти 59 культур атипичных микобактерий были отнесены: к I группе- 1 (1,7 %); к II группе – 9 (15, 2 %); к III группе – 17 (28, 8 %); IV группе - 32 (54, 2 %). То есть наибольшие количество 54, 2 % атипичных микобактерий выделенных на территории Республики Таджикистан, отнесены к IV группе быстрорастущих атипичных микобактерий по классификации Раньона.
Полученные нами данные вполне соответствуют результатам выявления атипичных микобактерий на территории Российской Федерации, где так же выявляют наибольшее количество атипичных микобактерий (59,5 %) IV группы по классификации Раньона (А.Х. Найманов, 2004; Н.С.Боганец, 2006; М.В. Качкин, 2007 и др.).
При дальнейшем изучении выделенных нами 59 культур различных микобактерий различными биохимическими тестами и с учетом культурально - морфологических свойств все культуры микобактерий были распределены по группам и видам микобактерий: I группа- 1 культура M. Marinum ; II группа- всего 9 культур, из них 5 культур- M. Scrofulaceum , 4 культуры - M. Gordonae ; III группа- всего 17 культур, из них 10 культур- M. Avium – Intracellulare , 3 культуры- M. Nonchromogenicum, 2 культуры - M. Triviale, 2 культуры - M. Terrae и IV группа- 32 культуры, из них 17 культур- M. Fortuitum, 8 культур- M.Smegmatis, 4 культуры - M.Flei и 3 культуры - M. Vaccae.
Следует отметить, что распределение культур атипичных микобактерий, выделенных на территории Республики Таджикистан, проведено впервые в дальнейшем могут использованы при проведении противоэпизоотических мероприятий, составлении плана противоэпизоотических мероприятий, при конструировании аллергенов и т.д.
При изучении сенсибилизирующих свойств атипичных микобактерий при подкожном введении культур микобактерий в дозах 1 мг/ мл и 5 мг/ мл мы не установили сенсибилизирующих свойств ни одной из изучаемых культур (M. Marinum, M. Scrofulaceum, M. Gordonae, M. Avium, М. Intracellulare, M. Nonchromogenicum, M. Triviale, M. Terrae, M Fortuitum, M.Smegmatis, M.Flei и M. Vaccae).
Следует отметить, что сенсибилизацию атипичными микобактериями морских свинок мы установили при подкожном заражении в дозе 10 мг/ мл, т.е. при изучении сенсибилизирующих свойств имеет значение и доза вводимой культуры атипичных микобактерий. Указанная закономерность подтверждает сообщение Н.Н. Кошеева, В. Ф. Бордюг, В.Г. Ошепкова, А.Д. Панкратовой, А.Д. Семеченко (2011),что схема введения атипичной культуры микобактерий в дозе 10 и 20 мг / мл вызывает сенсибилизацию у 100 % морских свинок, а в дозе 1 мг / мл не обладает сенсибилизирующими свойствами.