Эффективность пробиотика Белолин при коррекции микробиоценоза желудочно-кишечного тракта служебных собак Ласковец Рафаэль Сергеевич

Содержание к диссертации

Введение

1. Обзор литературы 13

1.1. Влияние особенностей кормления и эксплуатации на физиологическое состояние служебных собак 13

1.2. Микрофлора кишечника собак и ее характеристика 18

1.3. Дисбактериоз у собак при патологиях пищеварительной системы 24

1.4. Виды пробиотиков, применяемых в собаководстве, и их лечебно-профилактическая эффективность 31

1.5. Перспективы использования пробиотиков на основе B.subtilis и B.licheniformis в собаководстве 38

2. Собственные исследования 43

2.1. Материалы и методы исследований 43

2.2. Результаты исследований 52

2.2.1. Эпизоотологическое обследование питомника служебных собак Пограничной службы 52

2.2.2. Исследование физиолого-биохимического статуса организма клинически здоровых служебных собак 61

2.2.3. Исследование физиолого-биохимических показателей служебных собак при использовании антибиотиков и пробиотика Белолин 72

2.2.4. Определение эффективности Белолина в период физического стресса при дрессировке служебных собак 103

2.2.5. Исследование физиолого-биохимических показателей служебных собак при кормовом стрессе и его профилактика пробиотиком Белолин 119

2.2.6. Исследование эффективности Белолина в период реабилитации служебных собак после оперативного вмешательства на органах пищеварительной системы 136

3. Обсуждение результатов исследований 153

4. Заключение 177

4.1. Выводы и итоги проведенного исследования 177

4.2. Практическое использование полученных научных результатов 178

4.3. Рекомендации по использованию научных выводов 179

4.4. Рекомендации и перспективы дальнейшей разработки темы диссертации 180

Список использованной литературы 181

Приложения 200

• Микрофлора кишечника собак и ее характеристика
• Исследование физиолого-биохимического статуса организма клинически здоровых служебных собак
• Определение эффективности Белолина в период физического стресса при дрессировке служебных собак
• Исследование эффективности Белолина в период реабилитации служебных собак после оперативного вмешательства на органах пищеварительной системы

Введение к работе

Актуальность темы. Для выполнения задач по обеспечению безопасности государства и общества силовыми структурами РФ используются служебные собаки в различных климатических и техногенных условиях.

Неблагоприятные факторы внешней среды и постоянный стресс, испытываемый собаками при выполнении мероприятий оперативно-служебной деятельности, неизбежно приводят к появлению различных болезней. Наиболее уязвимой системой организма собак, первой реагирующей на стресс-факторы, является пищеварительная система (Василенко В.В., 2000; Горшков В.В., 2015).

В питомниках служебного собаководства патологии желудочно-кишечного тракта (далее – ЖКТ) имеют широкое распространение и занимают второе место после травматических повреждений (Кузнецов А.И., 2016; Ковалев А.А., 2017).

С каждым годом увеличивается доля заболеваний служебных собак, вызванных оппортунистическими инфекциями ЖКТ (Алексеева Л.Л., 2007; Кузнецов А.И., 2016; Ковалев А.А., 2017).

Причинами, вызывающими нарушение микробного баланса пищеварительной системы у собак, наиболее часто являются воспалительные процессы, инфекционные и инвазионные болезни, нарушения режима кормления, антибиотикотерапия, стрессы различного характера, хирургические вмешательства на органах ЖКТ (Галицкая М.С., 2003; Санин А.В., 2005; Севрюков А.В., 2016).

Патологии органов пищеварения служебных собак тесно связаны с дисбактери-озом кишечника, а также другими соматическими заболеваниями, которые появляются на его фоне. Доказано, что деградация микрофлоры кишечника ведет к ослаблению клеточного и гуморального иммунитета (Садыкова Ю.Р., 2008; Culligan Eamonn P., 2009; Frolkis Alexandra, 2013 и др.).

Многие ветеринарные препараты, предназначенные для коррекции микробиоценоза ЖКТ животных, не обладают высокой лечебно-профилактической эффективностью (Панин А.Н., 2005; Мефед К.М., 2007; Ивашкин В.Т., 2009; Хавкин А.И., 2012; Зудина Н.А., 2014; Грязнева Т.Н., 2017).

Следовательно, проблема фармакокоррекции дисбактериоза и болезней желу-дочно-кишечного тракта служебных собак на сегодняшний день является актуаль-3

ной. Вопрос изыскания новых эффективных препаратов при лечении собак с дисба-ктериозом ЖКТ, являющимся пусковым механизмом развития многих болезней животных, наиболее остро стоит перед исследователями в области ветеринарии и микробиологии.

Степень разработанности темы. Желудочно-кишечные болезни инфекционной и неинфекционной природы по распространенности занимают второе место среди всех болезней служебных собак. Применение антибиотиков негативно влияет на микробиоценоз ЖКТ. Недостаточная эффективность использования химиотера-певтических средств в служебном собаководстве в настоящее время, а также появление антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов, способных вызывать вторичные инфекции, привели к необходимости поиска альтернативных эффективных и безопасных лекарственных препаратов для лечения и профилактики желу-дочно-кишечных болезней собак (Василенко В.В., 2004; Бондаренко В.М., 2006; Калмыкова А.И., 2006).

Стрессовый дисбактериоз кишечника является основной причиной развития диарейного синдрома у служебных собак в условиях интенсивных физических и нервно-психических нагрузок. (Субботин В.В., 2003; Бельмер С.В., 2004; Бондаренко В.М., 2006; Барановский А.Ю., 2007; Тимченко Л.В., 2013).

Пробиотики широко используются для профилактики желудочно-кишечных болезней и лечения животных (Малик Н.И., 2005; Данилевская Н.В., 2008; Грязнева Т.Н, 2012; Севрюков А.В., 2015 и др.).

В настоящее время для использования в собаководстве имеется широкий спектр пробиотических препаратов, в том числе на основе микроорганизмов - представителей облигатной микрофлоры ЖКТ, однако многие из них не востребованы в повседневной практике. Причинами недостаточного использования пробиотиков на основе лакто- и бифидобактерий являются низкая эффективность многих из них, некорректный подбор штаммов микроорганизмов в составе препаратов, нарушения технологии производства и др. (Сорокулова И.Б., 2007; Семенов А.В., 2011 и др.).

С учетом специфики использования и дрессировки служебных собак, проблема дисбактериоза, вызванного стрессом, является наиболее актуальной.

Многие исследователи отмечают перспективность применения при дисбактери-

озах собак пробиотиков, содержащих бактерии рода Bacillus (Penner R. at al., 2005; Гатауллин А.Г., 2005; Williams Paul, 2007; Гудзь Г.П., 2008; Soccol Carlos Ricardo, 2010; Севрюков А.В., 2012; Грязнева Т.Н. 2018 и др.).

Однако, эффективность пробиотиков на основе бацилл при лечении и профилактике болезней ЖКТ у служебных собак на сегодняшний день изучена недостаточно (Галицкая М.С., 2003; Федосьина Е.А., 2009; Тимченко Л.В., 2013).

Таким образом, проблема пробиотикопрофилактики дисбактериоза и пробиоти-котерапии служебных собак при желудочно-кишечных болезнях является актуальной. Перспективными остаются вопросы изучения влияния пробиотиков на основе бацилл на организм служебных собак в условиях активной дрессировки и физических нагрузок, а также при антибиотик-ассоциированном дисбактериозе и диарее.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось изучение эффективности применения пробиотика Белолин при дисбактериозе желудочно-кишечного тракта служебных собак, вызванного антибиотикотерапией, стрессами и хирургическим вмешательством на органах пищеварительной системы.

Для решения были поставлены следующие задачи:

1. Провести эпизоотологическое обследование питомника служебных собак.

2. Изучить микробный пейзаж пищеварительного тракта здоровых служебных собак.

3. Изучить качественное и количественное состояние микрофлоры желудочно-кишечного тракта собак при дисбактериозе, вызванном антибиотикотерапией.

4. Определить эффективность Белолина в период физического стресса при дрессировке служебных собак.

5. Исследовать физиолого-биохимические показатели служебных собак при кормовом стрессе и применении пробиотика Белолин.

6. Исследовать эффективность Белолина в период реабилитации служебных собак после оперативного вмешательства на органах пищеварительной системы.

Научная новизна. Впервые определена эффективность применения пробиотика Белолин на основе бактерий рода Bacillus служебным собакам при коррекции дис-бактериоза желудочно-кишечного тракта, вызванного антибиотикотерапией, стрессами и хирургическим вмешательством на органах пищеварительной системы.

Изучены изменения физиолого-биохимического статуса и микробиоценоза ЖКТ служебных собак при стрессовых и лекарственном дисбактериозах, а также при пробиотикопрофилактике и пробиотикотерапии Белолином.

Впервые изучен микробный пейзаж ЖКТ клинически здоровых собак в питомнике служебного собаководства Пограничной службы в условиях группового содержания. Определена высокая эффективность применения пробиотика Белолин служебным собакам при профилактике дисбактериоза, вызванного физическим и кормовым стрессами, а также при терапии антибиотик-ассоциированного дисбакте-риоза и нарушении нормобиоза ЖКТ после проведения хирургического вмешательства на органах пищеварительной системы.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований по изучению эффективности применения пробиотика Белолин позволят более эффективно организовывать профилактические мероприятия, направленные на недопущение развития у служебных собак стрессовых и алиментарных диарей, дис-бактериоза ЖКТ, снизить количество неблагоприятных побочных эффектов при использовании антибиотиков в служебном собаководстве.

Результаты полученных исследований и рекомендации по использованию про-биотикотерапии включены в методические рекомендации ветеринарным врачам Пограничной службы «Пробиотикотерапия в служебном собаководстве».

По результатам применения пробиотика Белолин в питомнике служебного собаководства утверждены производственные акты. Применение пробиотика Белолин внедрено в ветеринарную практику питомника служебного собаководства и включено в план профилактических мероприятий кинологического центра Пограничной службы.

Методология и методы диссертационного исследования. Объектами количественных и качественных клинических исследований выступали служебные собаки одной возрастной группы. В течение работы были проведены несколько серий аналитических экспериментальных нерандомизированных контролируемых динамических проспективных исследований. В качестве лабораторно-клинических методов использовались бактериологический метод исследования микрофлоры, биохимический и клинический метод анализа крови, а также метод электрофореза сыворотки

крови в полиакриламидном геле и копрологическое исследование фекалий.

Степень достоверности. Результаты работы были получены при использовании сертифицированного лабораторного оборудования, прошедшего поверку средств измерений согласно ГОСТ 8.513-84 и определяются достаточным количеством проведенных исследований на средних выборках служебных собак. Экспериментальные данные обработаны методом статистического анализа.

Соответствие паспорту специальности. Диссертационная работа содержит материалы исследований в следующих областях: теоретические и прикладные проблемы экологии микроорганизмов; культивирование бактерий; методы выделения микроорганизмов из биологического материала; биологические и физико-химические свойства бактерий; явления, процессы и механизмы взаимодействия микро-и макроорганизмов в условиях воздействия экзогенных и эндогенных факторов. Работа соответствует паспорту специальности 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

Апробация работы. Результаты проведенных исследований доложены на VI Международной научно-практической конференции (Ростов-на-Дону, 2014), научно-практической конференции молодых ученых и специалистов в рамках всероссийского фестиваля науки «Актуальные вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии» (Москва, 2015), международной научно-практической конференции «Современные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных» (Москва, 2016) и международной конференции по ветеринарной иммунологии «Актуальные проблемы ветеринарной иммунологии» (Москва, 2017).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 4 научные статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК (Дезинфекция и антисептика, Ветеринария и кормление, Ветеринария, зоотехния, биотехнология), методические рекомендации «Пробиотикотерапия в служебном собаководстве».

Личный вклад автора. Автору принадлежат организация и непосредственное осуществление исследований по изучению микробного пейзажа желудочно-кишечного тракта собак в питомнике служебного собаководства кинологического центра в условиях группового содержания; определение лечебно-профилактической эффективности пробиотика Белолин при дисбактериозе у служебных собак, вызван-

ном антибиотикотерапией; проведение изучения влияния кормового и физического стрессов на микрофлору желудочно-кишечного тракта собак, в условиях питомника служебных собак кинологического центра; изучение изменения микрофлоры желу-дочно-кишечного тракта и показателей гомеостаза организма служебных собак после проведения хирургического вмешательства на органах пищеварительной системы; изучение влияния препарата-пробиотика Белолин на физиолого-биохимические показатели организма служебных собак, а также оценка эффективности коррекции микробиоценоза желудочно-кишечного тракта служебных собак данным пробиотиком; оценка лечебно-профилактической эффективности применения Бе-лолина при дисбактериозе желудочно-кишечного тракта служебных собак; внедрение мероприятий по пробиотикопрофилактике в ежегодный план противоэпизооти-ческих мероприятий кинологического центра; анализ полученных результатов, выводы и предложения для практики.

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с Шайбель А.Я. (ООО «Пробиотик-Плюс», Москва), которому выражаю глубокую благодарность за помощь и поддержку.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 220
страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, соб
ственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о
практическом использовании научных результатов, рекомендации по

Микрофлора кишечника собак и ее характеристика

Микрофлора является необходимым элементом защитных механизмов организма. Она действует как антигенный стимул для лимфоидной ткани кишки, оказывая постоянное воздействие на иммунную систему, индуцируя выработку иммуноглобулинов, интерферонов, цитокинов, пропердина, комплемента. Антигены микробных клеток в организме активируют иммунные процессы, связанные с формированием врожденного и приобретенного иммунитета [52,84, 125, 176].

Резидентная микрофлора образует в организме собак филогенетически сложившиеся микробиоценозы, в первую очередь на слизистых ЖКТ. Нормальная микрофлора принимает участие в протекании таких физиолого-биологических процессов как: пищеварение, выделение, дыхание, обменные процессы, участвует в поддержании постоянства внутренней среды [107, 124, 127, 177].

На функционирование микрофлоры кишечника собак влияет множество факторов как экзогенного, так и эндогенного характера. Микробиота с макроорганизмом, находясь в состоянии динамического равновесия, создают симбиотические отношения [52, 130, 178].

Как правило, организм собак имеет в ЖКТ стабильную (доминантную) микрофлору, которая обеспечивает колонизационную резистентность биотопа от различных патогенных и условно-патогенных бактерий [156, 164, 164].

В макроорганизме созданы определённые условия, обеспечивающие эффективное выполнение микрофлорой своих функций [112, 133, 141]:

- анатомические (илеоцекальный клапан (баугиниевая заслонка), слизистая оболочка кишечника);

- физиологические (наличие моторики кишечника, обновление эпителиоцитов, защитная биопленка);

- химические (выработка соляной кислоты и пепсиногена, выработка панкреатических ферментов и желчных кислот);

- иммунологические (выработка секреторного IgА слизистыми оболочками). В кишечнике собак различают мукозную и просветную микрофлору. Мукозная или пристеночная микрофлора располагается пристеночно в виде микроколоний, которые фиксируются на эпителиоцитах [52, 144].

Просветная микрофлора находится в просвете кишечника. Она не адгезируется на слизистой оболочке, а использует в качестве субстрата для ее жизнедеятельности непереваренные пищевые волокна. По виду выделяемых ферментов толстокишечная микрофлора разделяется на протеолитическую и сахаролитическую. В таблице 1 указаны основные представители микрофлоры кишечника собак и метаболические процессы, которые они выполняют [6, 16, 53, 147].

В опытах Субботина В.В. и Данилевской Н.В. (2002) была установлена нормальная численность микрофлоры кишечника у здоровых собак в возрасте до 5 лет. Так, в кишечном содержимом были обнаружены бифидобактерии (9,04 lg КОЕ/г), лактобактерии (8,38 lg КОЕ/г), эшерихии (7,89 lg КОЕ/г), энтерококки (7,59 lg КОЕ/г), дрожжеподобные грибы (3,69 lg КОЕ/г). После 5 летнего возраста у собак отмечался сдвиг в составе микрофлоры в сторону преобладания эшерихий со слабой лактазной активностью (на 5,7 %), эшерихий с гемолитическими свойствами (на 9,1 %), происходило снижение бифидобактерий до 7,1 lg КОЕ/г, лактобацилл до 6,67 lg КОЕ/г.

Е.М. Романова (2011) получила следующие данные по составу микрофлоры кишечника здоровых собак: бифидобактерии (8,8 lg КОЕ/г), лактобактерии (8,30 lg КОЕ/г), эшерихии (8,30 lg КОЕ/г), стафилококки (2,95 lg КОЕ/г), клостридии (0,11 lg КОЕ/г), протей (0,20 lg КОЕ/г).

УПМ являются представители родов Esherichia, Staphylococcus, Enterococcus, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Morganella, Providencia, Serratia, Pseudomonas, Candidа. Условно-патогенные микроорганизмы способны вызывать у собак различные гнойно-воспалительные болезни, диагностика которых осложнена тем, что многие из возбудителей входят в состав транзиторной нормальной микрофлоры. Ферменты патогенности, выделяемые УПМ способны значительно влиять на физиологию пищеварения собак и на гуморальные факторы иммунитета организма. Такими ферментами являются ДНК-аза, РНК-аза, лецитиназа, щелочная фосфатаза, каталаза. Протеолитические ферменты приводят к активации целого ряда процессов, приводящих к воспалению стенки кишечника [28, 113].

Кишечная палочка с нормальными свойствами вырабатывает колицины, отвечает за антителообразование, синтез витамина К. В кишечнике собак имеются также ослабленные штаммы кишечной палочки со сниженными ферментативными свойствами, в частности лактозонегативные (до 10 %), которые негативно влияют на микробиценоз толстой кишки, так как считается, что только лактозопозитивные эшерихии активно участвуют в пищеварительных процессах. Кишечные палочки, имеющие гемолитические свойства, вызывают у собак энтероколиты и геморрагическую диарею. Если при микробиологическом исследовании высевается более 10 % лактозонегативных эшерихий или их гемолитических форм, то это указывает на наличие дисбактериоза [22, 29].

При рутинных методах посева фекалий собак из анаэробных микроорганизмов обнаруживаются в основном бифидобактерии, составляющие 85-98% от всей микрофлоры кишечника [40, 29, 120].

Бифидобактерии отвечают за пристеночное пищеварение, защиту кишечной стенки от проникновения бактерий, стимуляцию выработки интерферона и синтез лизоцима. В опытах была доказана антагонистическая активность бифидобактерий по отношению к сальмонеллам, шигеллам, а также другим условно-патогенным микроорганизмам. В организме бифидобактерии присутствуют в составе биоплёнки. Биоплёнкой принято называть слой слизи вместе с находящимися в нём микроорганизмами [17, 32, 84, 90].

Лактобациллы вырабатывают большое количество противомикробных веществ (перекись водорода, пропионовую кислоту, молочную кислоту), отвечают за синтез иммуноглобулинов, стимуляцию макрофагов и нейтрофилов [26, 64, 70].

В желудке собак микробиоценоз характеризуется наличием кислотоустойчивых бактерий родов Lactobacillus, Streptococcus, Staphylococcus. Микроорганизмы рода Enterococcus характеризуются антагонистической активностью в отношении патогенных микроорганизмов Микроорганизмы рода Streptococcus участвуют в гидролизе белков молока, ферментации углеводов [26].

Выделяют следующие местные и системные функции микрофлоры собак [114, 120]:

1) Поддержание обмена веществ и энергообеспечение;

2) Регуляция моторики кишечника;

3) Участие в молекулярном обмене;

4) Поддержание внутреннего кислотно-щелочного и осмотического постоянства среды кишечника;

5) Обезвреживание и выведение вредных токсичных веществ;

6) Стимуляция иммунной системы и местного иммунитета;

7) Поставка субстратов глюконеогенеза;

8) Синтез витаминов группы В, пантотеновой кислоты, витаминов К, С, РР.

Антимикробная активность микрофлоры обеспечивается наличием молочной, уксусной и пропионовой кислот, вырабатываемых лакто- и бифидобактериями. Другим продуктом метаболизма является углекислый газ, который обеспечивает наличие анаэробной среды. Вырабатываемая лактобактериями перекись водорода имеет ярко выраженные антагонистические свойства при воздействии на грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы [72, 91].

Отмечается, что бактериоцины и бактериоциноподобные вещества, которые синтезируются лакто- и бифидобактериями, а также другими представителями индигенной микрофлоры, проявляют антагонистическую активность к УПМ. Механизм действия бактериоцинов схож с таковым у антибиотиков, однако отличается избирательным действием на сопутствующую микрофлору. Также отмечается противоопухолевое действие бактериоцинов [52, 76].

У собак нормальная микрофлора (нормофлора) включает в себя большое количество видов микроорганизмов, число которых в толстом отделе кишечника насчитывается более 1011 клеток. Положительные функции микрофлоры отражены в таблице 3 [2, 21, 34, 17, 141].

Исследование физиолого-биохимического статуса организма клинически здоровых служебных собак

Исследование было проведено с целью оценки физиологических показателей организма клинически здоровых собак в питомнике, определения нормальных показателей крови, функциональности ЖКТ, сравнения с физиологическими нормами, сравнительной оценки полученных нормальных показателей с данными, полученными при последующих исследованиях у собак с патологическими нарушениями.

Для исследования было отобрано 4 группы собак различных пород (немецкая овчарка, бельгийская овчарка, лабрадор-ретривер):

1 группа – 12 собак в возрасте 6 - 12 месяцев;

2 группа – 11 собак в возрасте 12 месяцев - 2 года;

3 группа – 14 собак в возрасте 2 - 5 лет;

4 группа – 10 собак в возрасте старше 5 лет. Все служебные собаки в группах на момент исследования были клинически здоровы, содержались в типовых вольерах. Собаки для исследования подбирались с учетом отсутствия у них возможных стрессовых ситуаций в течение 30 дней до проведения опыта (занятий по дрессировке, смены типа кормления, применения лекарственных препаратов и т.д.).

С целью исключения болезней органов ЖКТ, которые могли бы искажать полученные данные и являться сопутствующими, перед проведением опытов каждой служебной собаке нами проводился комплекс диагностических мероприятий, состоящий из следующих методов исследований:

- ультразвуковое исследование органов брюшной полости;

- анализ кала методом ПЦР на наличие корона- и парвовирусов;

- анализ на наличие яиц гельминтов и простейших. Только после исключения сопутствующих болезней у собак они допускались в экспериментальные группы. При проведении общего клинического анализа крови в данном исследовании получены следующие результаты (таблица 10).

Исходя из данных, отраженных в таблице 10, нами был сделан вывод о том, что патологических отклонений от референсных значений [13, 42, 116] показателей крови собак в ходе исследования выявлено не было, во всех группах собак были получены результаты, соответствующие нормальным. Отмечено, что наиболее явные различия в полученных данных были выявлены у группы собак «5 - 8 лет». У этой группы собак был отмечен самый низкий уровень гемоглобина, что указывает на происходящие возрастные изменения, связанные с угнетением гемопоэза. Высокое содержание лимфоцитов у собак первой группы, возможно, указывает на иммунозависимые процессы, происходящие в организме молодых собак, которые в условиях питомника неизбежно сталкиваются с различными циркулирующими инфекциями.

Одновременно с проведением общего клинического анализа крови у собак был произведен забор венозной крови для исследования сывороточных биохимических показателей, результаты которого отражены в таблице 11.

При исследовании сыворотки крови установлено соответствие полученных значений физиологической норме для собак, основные показатели обмена веществ в организме опытных животных укладываются в рамки допустимых интервалов для здорового организма. Показатель уровня мочевины в крови у 4 группы собак, был значительно выше, чем в других группах, что может быть следствием плохого всасывания и переваривания белков организме стареющих животных. Также у данной группы собак отмечено повышение уровня общего билирубина по сравнению с другими группами и нормальными показателями (нормальное значение 3,0-13,5 мкмоль/л), что может свидетельствовать о повреждении клеток печени, дистрофических процессах либо других гепатопатиях [90].

Для оценки факторов иммунной защиты организма собак, были изучены показатели белковых фракций сыворотки крови. Данное исследование позволяет оценить способность организма поддерживать осмотическое давление и осуществлять транспорт веществ, выявить наличие инфекционного процесса в организме.

Нами было проведено электрофоретическое разделение белковых фракций сыворотки крови, а также биохимическое определение общего белка и альбуминов, результаты которых отражены в таблице 12.

По результатам исследования значительных отклонений от нормальных показателей собак не выявилось, немного заниженными оказался уровень общего белка (49,2±5,6 г/л) и альбуминов (24,1±3,1 г/л) у 4 группы собак по сравнению с остальными группами. Данный факт может быть связан со снижением синтеза белков в печени и преобладанием катаболических процессов в организме у старых животных.

Для изучения состояния гуморального иммунитета исследуемых собак было проведено исследование сыворотки крови на содержание иммуноглобулинов трёх классов (A, M, G). Этот вид исследования был проведен для оценки способности организма собак к выработке специфических белков, выявления возможных иммунодефицитных состояний, приводящих к снижению резистентности организма. Данные классы иммуноглобулинов являются одним из основных факторов противоинфекционной защиты организма. Полученные данные отражены в таблице 14.

Анализируя полученные данные по исследованию иммуноглобулинов сыворотки крови, мы пришли к выводу, что все значения соответствуют физиологической норме. Низкое содержание в крови IgA, отвечающего за местный иммунитет (слизистые оболочки, кожа) было отмечено у собак в возрасте 5-8 лет. Высокий уровень гуморального иммунитета, характеризующийся в том числе содержанием IgM и IgG в крови, отвечающими за первичный и последующий иммунный ответ на проникновение вирусов, бактерий, токсинов, был отмечен у служебных собак в возрасте до 5 лет.

Для формирования наглядной картины функциональной активности ЖКТ собак нами был проведен клинический анализ кала (таблица 15), который помог установить ферментативную, моторно-эвакуаторную функции ЖКТ, дать косвенную оценку состоянию микрофлоры ЖКТ.

Определение эффективности Белолина в период физического стресса при дрессировке служебных собак

Целью исследования явилась необходимость изучения микрофлоры ЖКТ, а также других основных физиологических показателей служебных собак, в период интенсивных физических нагрузок. Актуальность изучения влияния физического стресса на организм собак обусловлена тем, что чрезмерное физическое напряжение при работе и дрессировке приводит к патологическим изменениям, связанным с нарушением функции различных органов и систем, в том числе пищеварительной системы. Нарушение функции ЖКТ, выражающееся в нарушении желудочной секреции, печеночной недостаточности, гипофункции поджелудочной железы, усилении перистальтики кишечника у собак сопровождаются отказом от корма, вялостью, иногда рвотой, диареей, болезненностью брюшной стенки [15, 96, 156]. При появлении этих симптомов, физическую нагрузку при дрессировке служебной собаке необходимо уменьшить либо вообще исключить, для того чтобы не ухудшить состояние животного. Функциональная диарея и другие осложняющие клиническое состояние служебных собак синдромы являются причиной вывода из дрессировки в период проведения курса лечения, нарушению программы обучения.

Исследование групп служебных собак в период физического стресса, которым был назначен пробиотик в качестве терапии, поддерживающей микрофлору ЖКТ на физиологическом уровне, позволило оценить степень эффективности препарата, как профилактического средства при нарушении функции ЖКТ.

Для проведения исследований было отобрано две группы служебных собак в возрасте от 2 до 5 лет пород немецкая и бельгийская овчарка:

1 группа (n=20) – собаки, с которыми в после длительного (1-2 месяца) простоя в вольере, начинали проводить интенсивные ежедневные тренировки по 4-6 часов в день в течение 14 дней. Суть тренировок собак в данной группе заключалась в прохождении полосы препятствий, бега на 5-10 км, тренировок по задержанию преступников и поиску на местности.

2 группа (n=20) – собаки, которые находились в тех же условиях, что и собаки первой группы. Животным данной группы в качестве поддерживающей терапии был назначен пробиотик Белолин в дозе 0,4 г внутрь на голову один раз в сутки.

Все группы находились в одинаковых условиях содержания, с одинаковой интенсивностью дрессировки, силовых нагрузок и нагрузок на выносливость. Вес собак был в среднем 20-25 кг. Исследования были проведены у обоих групп через 7 и через 14 дней после начала эксперимента. Полученные данные подвергнуты анализу. В таблице 31 отражены основные характеристики состава крови служебных собак в данном исследовании.

По результатам проведённых исследований выявлено, что уровень гемоглобина собак первой группы в течение эксперимента был ниже контроля на 13,3 % и 33,3 % (на 7 и 14 день соответственно). При физических нагрузках количество гемоглобина в крови, как правило физиологически снижается, что учитывалось нами при проведении эксперимента [42]. Однако, в группе собак, получавших пробиотик эти изменения были выражены не так явно как в группе № 1. В группе № 2 отмечено повышение показателя гемоглобина на 13,9 % и 24,9 % по сравнению с группой № 1. Такая же тенденция наблюдалась с уровнем эритроцитов. На 7 день в 1 группе он был ниже контроля на 61,5 %, на 14 день – на 47,0 %. Во 2 группе эти значения равны 35,4 % и 15,0 %. Тромбоцитопения в первой группе была на уровне 22,1-32,6 %, во второй группе – 7,9-0,8 %.

Изменения со стороны количества лейкоцитов обнаруживали следующие изменения: значительный лейкоцитоз через 14 дней в группе собак без пробиотика по сравнению с контролем (на 29,2 % выше). При физическом стрессе лейкоцитоз возможен как физиологическая норма, но в данном случае превышение контрольных значений было значительным. В группе № 2 через 14 дней лейкоцитоз также отмечался, но на уровне 6-9,9 %. В связи с повышением количества лейкоцитов в группе № 1 следует предположить (с учётом отсутствия у собак других патологий) наличие воспалительных процессов, происходивших в организме собак. Причиной лейкоцитоза при физическом стрессе является общая ответная реакция организма, а также транслокация УПМ через энтеральный барьер в кровоток и выделение эндотоксинов при гибели микробных клеток [59, 88, 131]. В таблице 33 отражены результаты биохимического исследования собак в период исследования.

Как указано в таблице 33, уровень мочевины у собак, не получавших пробиотик, был повышен по отношению к контролю через 7 дней на 39,7 %, через 14 дней – на 34,8 %. Данные показатели значительно превышают аналогичные в опытной группе (соответственно на 18,2% и 26,2% больше). В группе № 1 через 7 дней опыта был повышен уровень мочевой кислоты на 18,9 %. Такие изменения в организме собак можно объяснить усиленным катаболизмом белков и образованием мочевины как побочного продукта. Однако данный показатель у собак, получавших пробиотик был ниже. Физические нагрузки могут быть также причиной незначительного повышения уровня креатинина, мочевой кислоты и калия в крови собак [42].

Концентрация глюкозы значительно понижалась у собак первой группы по сравнению со 2 группой на 7 и 14 день (на 57,5 % и 36,8 %), что говорит о возможном обеднении запасов гликогена в организме в период усиленных тренировок. Количество кальция в крови собак в опыте без пробиотика было понижено по сравнению со 2 группой через 7 дней на 21,4 %, через 14 дней – на 27,5 %. Возможной причиной такого явления в 1 группе служит нарушение всасывания ионов кальция при воспалительных процессах в кишечнике, которое постепенно приходило в норму под влиянием пробиотика. У собак второй группы биохимические показатели крови постепенно выравнивались с физиологической нормой через 14 дней опыта. В таблицах 34 и 35 указаны результаты исследования белковых фракций крови в данном опыте.

Было установлено, что количество альбуминов через 7 дней исследования в группах значительно не изменялось, через 14 дней опыта во 2 группе собак, получавших пробиотик, этот показатель был выше на 20,8 %, по сравнению с 1 группой. Количество глобулинов через 7 дней в 1 группе было на 15,9 % выше чем во второй, через 14 дней выше на 19,3 %. Белки острой фазы 2-глобулины, наиболее активные при стрессовых раздражителях, были выше в крови собак первой группы через 7 дней опыта на 18,8 %, чем в контрольной. Также был отмечен высокий уровень гамма-глобулиновой фракции у собак 1 группы (через 7 дней выше на 27,5 %).

Вышеуказанные изменения указывают на низкие показатели синтеза белков в группе собак, не получавших пробиотик (уменьшение альбуминов). В связи со значительными физическими нагрузками, напряжением нервной системы собак, а также возможными дисбиотическими нарушениями в кишечнике собак, увеличивается поток токсичных метаболитов через энтеральный барьер [49, 57, 61]. Такая нагрузка на клетки печени, участвующей в детоксикации химических веществ, приводит к понижению ее функции по синтезу белков плазмы крови. Как видно, применение пробиотика привело к повышению синтеза белков печенью и снизило токсическую нагрузку. Собаки, получавшие пробиотик менее выраженно реагировали на стрессовый раздражитель, белки острой фазы выделялись у них в меньшем количестве. Наличие повышенного количества гамма-глобулинов в крови собак первой группы указывает на интенсивное развитие дисбиотических процессов и рост условно-патогенных микроорганизмов в кишечнике собак.

Исследование эффективности Белолина в период реабилитации служебных собак после оперативного вмешательства на органах пищеварительной системы

В условиях питомникового содержания собак и использования служебных собак в различных погодных условиях, присутствия агрессивных факторов внешней среды, а также при значительном физическом напряжении, пищеварительная система служебных собак наиболее подвержена риску появления патологий. Множественная вариативность данного рода болезней, сопровождающихся различными симптомами, характером течения и патогенезом, требует от ветеринарного врача применения широкого диапазона знаний в области гастроэнтерологии и действенных методик лечения. Довольно часто ветеринарным врачам в питомнике служебного собаководства приходится применять хирургический метод лечения болезней ЖКТ. Этот метод применяется при лечении заворота и острого расширения желудка, различных (странгуляционная, обтурационная) непроходимостей кишечника, язвы желудка и кишечника, при инородных предметах в ЖКТ и т.д. После проведённых хирургических манипуляций в постоперационном периоде в организме собак происходят значительные метаболические и физиологические изменения в связи с тем, что во время проведения операции ЖКТ подвергается морфологическим изменениям. Определенное влияние оказывают лекарственные средства. Собаки испытывают сильнейший болевой стресс. Опосредованными болезнями, вызванными проведением хирургической операции, согласно МКБ-10, являются синдром оперированного желудка, дисфунция после колостомии и энтеротомии, нарушение всасывания после хирургического вмешательства.

Микробиоценоз, как хрупкий баланс индигенной и условно-патогенной микрофлоры, в случаях оперативного вмешательства на органах ЖКТ изменяется всегда. С целью коррекции и восстановления работы ЖКТ и его микробиоценоза, животному в постоперационный период назначается диета, витаминные препараты, инфузионная терапия, пробиотики. Пробиотикотерапия в данном случае используется с целью восстановления микрофлоры ЖКТ, в которой произошли изменения в результате механического травмирующего воздействия в период проведения хирургической операции, а также в период постоперационного восстановления организма [11, 76].

С целью оценки влияния пробиотика Белолин на гомеостаз организма служебных собак в постоперационном периоде, после проведенной операции на органах ЖКТ, нами в течение 2 лет было исследовано 2 группы служебных собак.

Первая группа (10 голов) собак в возрасте 2-5 лет, содержащихся в питомнике, которым была проведена операция на органах ЖКТ:

- лабрадор-ретривер, 3 года, инородное тело в желудке;

- немецкая овчарка, 4 года, заворот желудка;

- лабрадор-ретривер, 3 года, инвагинация тонкой кишки;

- бельгийская овчарка, 5 лет, острое расширение желудка;

- немецкая овчарка, 2,5 года, инородное тело в 12-перстной кишке;

- восточно-европейская овчарка, 3 года, новообразование толстой кишки;

- немецкая овчарка, 2 года, заворот желудка;

- английский кокер-спаниель, 3 года, инородное тело в желудке;

- немецкая овчарка, 4 года, заворот желудка;

- восточно-европейская овчарка, 3 года, инородное тело в 12-перстной кишке.

Собакам первой группы в постоперационный период проводилась стандартная терапия в течение 14 дней: диета, внутривенные вливания растворов (7 дней), антибиотик (цефазолин) 7 дней, обезболивающие и кровоостанавливающие средства.

Вторая группа (10 голов) собак в возрасте 2-5 лет, которым также была проведена хирургическая операция на органах ЖКТ:

- немецкая овчарка, 5лет, заворот желудка;

- английский кокер-спаниель, 2,5 года, инородное тело в тонкой кишке;

- лабрадор-ретривер, 4 года, инвагинация тонкого кишечника;

- немецкая овчарка, 2,5 года, инородное тело в тонкой кишке;

- бельгийская овчарка, 4 года, заворот желудка;

- немецкая овчарка, 2 года, инвагинация тонкого кишечника;

- немецкая овчарка, 4 года, заворот желудка;

- лабрадор-ретривер, 3 года, инородное тело в желудке;

- восточно-европейская овчарка, 4 года, новообразование толстого кишечника;

- восточно-европейская овчарка, 3 года, инородное тело в тощей кишке.

Собакам второй группы в постоперационный период проводилась аналогичная терапия в течение 14 дней, но дополнительно, начиная с 3 послеоперационного дня, давался пробиотик Белолин в дозе 0,8 г на голову в сутки. Контролем в данном исследовании являлась группа клинически здоровых собак в возрасте 2-5 лет. Контрольный забор биоматериала от собак групп проводили на 5 и 10 день для оценки изменений, происходящих в организме. При проведении общего анализа крови были получены следующие результаты (таблица 46).

В результате гематологического исследования была выявлена тенденция к недостаточности функции кроветворения у собак в данном опыте. Гематологический анализ показал, что уровень гемоглобина в первой группе собак через 5 дней опыта был одинаковым с показателем во второй группе и на 22,9 % ниже контроля. Во второй группе гемоглобин был понижен по сравнению с контролем на 9,1-20,2 %. Через 10 дней опыта уровень гемоглобина был на 14,0 % ниже (в сравнении со второй группой). Количество эритроцитов было на 12,2 % ниже в первой группе собак через 5 дней и на 16,9 % ниже через 10 дней (в сравнении со второй группой). Снижение показателей гемоглобина и эритроцитов, очевидно, связаны с оперативным вмешательством и потерей крови. Данные изменения происходили во всех группах собак, однако восстановление кроветворной функции происходило быстрее в группе собак, получавших пробиотик. Уровень лейкоцитов был высоким в первой группе собак через 5 и 10 дней опыта по сравнению со второй группой и контролем (в среднем выше на 15,0 %). Повышение уровня лейкоцитов связано с протеканием воспалительных процессов при заживлении поврежденных тканей. Доля нейтрофилов в первой группе собак по сравнению со второй группой выше в среднем на 9-10 %, в сравнении с контролем на 23%. Повышение уровня нейтрофилов через 5 дней опыта, как правило, с хирургической операцией, но причина повышения данного показателя через 10 дней опыта скорее всего в бактериальной инфекции, обусловленной кишечным дисбактериозом.