Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 7
1.1. Распространение болезней органов пищеварения телят 7
1.2. Этиология болезней органов пищеварения телят 9
1.3. Характеристика семейства энтеробактерий 14
1.4. Специфическая профилактика и терапия болезней органов пищеварения 24 телят .
1.5. Заключение по обзору литературы 34
Собственные исследования 35
Глава 2. Материалы и методы 35
2.1. Эпизоотологические методы исследований 39
2.2. Клинико-морфологические методы исследований 40
2.3. Бактериологические методы исследований 46
2.4. Методы исследования препарата «Пинсильвин» на организм животных 53
2.5. Методы статистической обработки результатов исследований 55
Глава 3. Результаты исследований 57
3.1. Эпизоотологическая ситуация и этиологическая структура болезней
органов пищеварения телят, вызываемых патогенными энтеробактериями. 57
3.1.1. Нозологический профиль инфекционной патологии телят 57
3.1.2. Клинико-морфологические исследования при болезнях органов пищеварения телят 69
3.1.3. Индикация и идентификация патогенных энтеробактерий, циркулирующих среди поголовья животных и объектов внешней среды животноводческих хозяйств 83
3.2. Коррекция иммунного статуса телят препаратом «Пинсильвин» 92
3.2.1. Иммунный статус и морфология локального иммунитета при болезнях органов пищеварения телят, вызываемых патогенными энтеробактериями 92
3.2.2. Изучение чувствительности эпизоотических штаммов энтеробактерий к антибактериальным препаратам 96
3.2.3. Результаты исследований эффективности препарата «Пинсильвин» на лабораторных моделях 97
3.2.4. Влияние препарата «Пинсильвин» на иммунный статус телят 108
Обсуждение результатов исследований 115
Выводы 127
Практические предложения 129
Список литературы 130
- Этиология болезней органов пищеварения телят
- Клинико-морфологические методы исследований
- Нозологический профиль инфекционной патологии телят
- Изучение чувствительности эпизоотических штаммов энтеробактерий к антибактериальным препаратам
Введение к работе
Актуальность темы. В структуре неонатальной патологии крупного рогатого скота по статистическим данным 60,0-70,0 % составляют болезни органов пищеварения, падеж животных достигает 1,5-2,0 млн. голов в год (Шахов А.Г. и соавт., 2011, 2015; Миронова А. А. и соавт., 2011; Оздемиров А. А. и соавт., 2013). Причина падежа и вынужденной выбраковки молодняка животных до месячного возраста составляют 85,0-95,0 %, возрастает этиологическая значимость возбудителей факторно-инфекционных болезней, в частности, доля патогенных энтеробактерий достигает 75,0-82,0 %, (Светоч Э.А., 1994, 2010; Тугаринов О. А., 1993; Сидоров М. А. и соавт. 1995; Каврук Л. С. и соавт., 1999; Пирожков М.К., 2002, 2011; Абдулмагомедов С. Ш. и соавт., 2009; Макаров В.В. и соавт., 2010, 2014; Скляров О.Д., Моторыгин А.В., 2011; Кондакова И.А. и соавт., 2011; Терехов В. И., Тищенко А. С, 2011; Кононенко А.Б., и соавт., 2012; Ленченко Е.М., 2014; Eickhoff T. C., 2009; M. D. Galvez A., 2010; Collins, 2001; Janice Y. C., 2014). При бессимптомной персистенции энтеробактерий в организме бактерионосителей может происходить контаминация пищевого сырья, что обусловливает социальную значимость профилактических мероприятий в начале «пищевой цепи» (Санитарные правила. 3.1.094-96; Ветеринарные правила 13.3.1318-96).
При развитии нарушений функций иммунной системы, являющегося одним из патогенетических механизмов патологического процесса, для повышения резистентности организма животных перспективным признано применение иммунобиологических препаратов (Федоров Ю.Н., 1996, 2015; Буянов А.А., 1993; Маннапова Р. Т., 1998, 2013; Малик Н. И. и соавт., 1999; Субботин В. В., 2000; Девришов Д. Р., 2012; Панфилов А. Б., 2002, 2012; Раицкая В. И. и соавт., 2011; Данилевская Н.В., 2006; Павлова И.Б. и соавт., 2007; Масьянов Ю. Н., 2009; Конюхов Г.В., 2010; Богомолова А.Н., 2014; Волкова М. В., Малинин М. Л., 2014).
Учитывая возрастание этиологической значимости
антибиотикорезистентных штаммов энтеробактерий в структуре инфекционной патологии целесообразным является проведение мониторинговых исследований, на основе оптимизации схемы бактериологической диагностики и апробация, изыскание и подбор эффективных антибактериальных препаратов, что и определило актуальность темы диссертационной работы.
Цель исследований: изучить этиологическую структуру болезней органов пищеварения, вызываемых патогенными энтеробактериями, и коррекцию иммунного статуса телят.
Задачи исследований: провести ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по болезням органов пищеварения телят в животноводческих хозяйствах Рязанской области;
индикация и идентификация микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae, циркулирующих в животноводческих хозяйствах при болезнях органов пищеварения телят;
изучить чувствительность эпизоотических штаммов энтеробактерий к антибактериальным препаратам;
определить местно-раздражающие действие, острую, подострую и хроническую токсичность препарата «Пинсильвин»;
изучить динамику гематологических, биохимических, иммунологических
и морфологических показателей при болезнях органов пищеварения и
коррекции иммунного статуса телят
Научная новизна. При изучении экстенсивных и интенсивных показателей напряженности эпизоотического процесса в животноводческих хозяйствах Рязанской области установлено, что в период 2010-2015 годы из общего числа заболеваний телят болезни органов пищеварения составляли 28,32-44,19 %, заболеваемость - 25,98-43,62 %, смертность - 0,91-4,35 %, летальность - 3,50-11,90 %, коэффициент очаговости - 10,92-16,0 животных на неблагополучный район, индекс эпизоотичности - 0,2-1,0. В нозологическом профиле инфекционных болезней телят эшерихиоз составляет 58,19 %, стрептококкоз 12,0 %, псевдомоноз 6,77 %, сальмонеллез 5,65 %, пастереллез 5,17 %, респираторно-синцитиальная инфекция 4,80 %, инфекционный ринотрахеит (4,16 %), стафилококкоз (2,40 %), ротавирусная инфекция (0,85 %). Динамика иммунологических показателей крови 1-10 суточных телят при применении препарата «Пинсильвин» характеризовалась увеличением общего количества Т-лимфоцитов - 51,00±0,67 %, Т-хелперов - 38,30±1,71 %, В-лимфоцитов - 18,82±0,49 %; повышением уровня иммуноглобулинов: IgG -11,93±0,75 г/л, IgM - 0,81±0,15 г/л, IgA - 0,55±0,03 г/л.
Практическая значимость работы. По результатам исследований разработаны «Рекомендации по профилактике и ликвидации эшерихиоза телят», утверждённые на заседании комиссии Госветинспекции Рязанской области (протокол № 11 от 02.09.2015 г.). Результаты исследований используются в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины и биотехнологии ФГБОУ ВО РГАТУ по дисциплинам «Эпизоотология и инфекционные болезни», «Ветеринарная микробиология и микология», на курсах повышения квалификации ветеринарных врачей и в животноводческих хозяйствах Рязанской области.
Апробация материалов диссертации. Результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры «Эпизоотология, микробиология и паразитология» ФГБОУ ВО РГАТУ, «Ветеринарная медицина» ФГБОУ ВПО МГУПП. Материалы диссертации доложены на Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы развития науки» (Уфа, 2014); 66-ой Международной научно-практической конференции «Аграрная наука как основа продовольственной безопасности региона» (Рязань, 2014, 2015), награждена дипломом в конкурсе «Молодой ученый года - 2014 года» имени академика И.П. Павлова.
Основные положения, выносимые на защиту:
нозологический профиль инфекционных болезней телят в Рязанской области;
экстенсивные и интенсивные показатели болезней органов пищеварения телят, вызываемых патогенными энтеробактериями;
результаты индикации и идентификации патогенных энтеробактерий, выделенных при болезнях органов пищеварения телят;
динамику изменений гематологических, биохимических, иммунологических и морфологических показателей при болезнях органов пищеварения и коррекции иммунного статуса телят с применением препарата «Пинсильвин»
Публикация результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано 5 научных работ, в т. ч. 4 - в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, библиографии, приложений. Работа изложена на 156 страницах компьютерного текста, содержит 25 таблиц, 20 рисунков. Библиографический список включает 271 источник, из них 73 иностранных автора.
Этиология болезней органов пищеварения телят
Массовые болезни органов пищеварения телят в настоящее время относят к факторным инфекциям, связанным с нарушением микробиоценоза в желудочно-кишечном тракте, с первичными и вторичными иммунодефицитами, снижением иммунитета, неблагоприятным воздействием факторов окружающей среды, нарушением условий содержания и кормления матерей и молодняка, не соблюдение принципа «все пусто - все занято», без контрольного применения антибиотиков (Кирьянов Е. А., Больных А. Т., 1986; Девришов Д. А., 2000; Бурлаков В. А. и соавт., 2002; Федоров Ю. Н., 2002; Шаньшин Н. В., 2003; Шахов А. Г., 2003; Исаев В. В. и соавт., 2005; Джупина С. И., 2006; Попов Ю. Г., Глущенко Е. Е., 2012).
На организм восприимчивого животного возрастает прессинг условно патогенной микрофлоры. При снижении естественной резистентности макроорганизма отношения между животным и условно-патогенными микроорганизмами перерастают из симбиотических в антагонистические, в результате возникает инфекционное заболевание. Восприимчивое животное получает дозу активизированных и вирулентных возбудителей инфекционных заболеваний (Григорьева Г. И. и соавт., 2005; Горбунова И. А., 2012; Borriello S. P., 1986).
Болезни телят в раннем постнатальном периоде, сопровождающиеся расстройством желудочно-кишечного тракта, доминируют среди других болезней, свойственных этому возрасту молодняка сельскохозяйственных животных (Тетерев И. И. и соавт., 1993; Девришов Д. А., 2000).
Согласно многочисленным научным исследованиям этиологическая структура критериев причинности болезней подвержена эволюции. Статистическая закономерность заболеваний органов пищеварения предполагает многообразный характер причинно-следственных ассоциаций, обусловленных меняющимися внешними экологическими условиями (Кашина А. С. и соавт., 2003, 2004; Сисягина Е. П., 2004; Арбузова А. А., 2010; Waldhalm D. G. et al, 1969; Brown L. N., Andrews J. J., 1973; Morin M. et al, 1974, 1976; Acres S. D. et al, 1975; Acres S. D., Radostits O. M., 1976; Acres S. D. et al, 1977). Болезни органов пищеварения у телят имеют сложную этиологическую структуру (Зароза В. Г., 1991; Великанов В. И. и соавт., 1997, 1999, 2000, 2001, 2005; Молев А. И. и соавт., 2000, 2001; Великанов В. И. и соавт., 2001; 2005; Арбузова А. А., 2006, 2010; Онищенко И. С. и соавт., 2009; Чхенкели В. А., Калинович А. Е., 2013).
Возбудителями заболеваний в большинстве случаев являются хорошо известные и легко идентифицированные агенты (Федоров Ю. Н. и соавт., 1983; Сисягин П.Н., 1990; Ким Р.Е. и соавт., 1996; Воронин Е.С., Шахов А. Г.; 1999; Шахов А.Г. и соавт., 1999, 2003, 2005; Джупина С. И., 2003; Сисягина Е.П., 2003; Мусаева М. Н., 2008; Олейник А., 2009; Ломако Ю.В. и соавт., 2013, 2014; Абдулмагомедов С. Ш. и соавт., 2014; Du Pont H. L., 1994; Watts J. L., Yancey R. J. Jr., 1994; Biziulevichius G. A., Arestov I.G., 1997).
Несмотря на достижения в лабораторной диагностике заболеваний молодняка животных среди ученых отсутствует единое мнение в современной концепции этиопатогенеза болезней (Кашин А. С. и соавт., 2004).
По Абдулмагомедову С. Ш. и соавт. (2014) диареи молодняка сельскохозяйственных животных представляют группу полиэтиологичных заболеваний, этиопатогенез которых определен факторами инфекционного и незаразного происхождения, протекающие с едиными клиническими признаками и патологоанатомическими изменениями. Особая роль в возникновении болезней органов пищеварения у молодняка животных принадлежит «стойловым» условно-патогенным микроорганизмам, к которым, наряду с некоторой другой микрофлорой, относятся патогенные бактерии семейства Enterobacteriaceae, имеющие повсеместное распространение и наносящие большой экономический ущерб хозяйствам. Весомая часть принадлежит условно-патогенным бактериям семейства Enterobacteriaceae: Escherichia coli, Klebsiella pneumonica, Proteus vulgaris, Morganella morgani и др., которые широко распространены в окружающей среде, являются резидентными представителями нормальной микрофлоры животных и за счет экологической пластичности легко адаптируются к различным условиям (Девришов Д. А., 2000; Бурлаков В. А. и соавт., 2002; Золотухин С. Н. и соавт., 2006; Волкова Е. А., 2009; Глушенкова Т. В., Чхенкели В. А., 2011; Моторыгин А. В. и соав., 2011; Раицкая В. И. и соавт., 2011).
Показано, что увеличение объема вакцинации животных против эшерихиоза и сальмонеллеза не вызывает снижения заболеваемости по данным болезням (Горбунов А. П. и соавт., 2003; Кашин А. С. и соавт., 2004).
Эшерихиоз занимает лидирующее положение по количеству случаев заболеваемости и смертности среди других инфекционных патологий у сельскохозяйственных животных (Кашин А. С. и соавт., 2003; Шахов А. Г., 2003; Сухарев Ю. С., 2011; Олiйник Л. В., 2004; Волкова М. В., Малинин М. Л., 2014).
Эшерихиоз у животных протекает с признаками диареи, интоксикации, обезвоживания организма, с признаками септического процесса и нервными явлениями, поражением сердечно-сосудистой системы (Абдулмагомедов С. Ш. и соавт., 2009; Иванов А. И., Баймурзин И. Б., 2010; Моторыгин А. В., 2011; Петрухин М. А. и соавт., 2012).
В этиологии эшерихиоза телят значительная роль принадлежит токсигенным и энтеропатогенным Escherichia coli (Зароза В. Г., 1991; Кашин А. С. и соавт., 2003; Шахов А. Г., 2003; Сухарев Ю. С., 2011; Иванов А. И., Баймурзин И. Б., 2010; Спиридонов Г. Н. и соавт., 2011; Волкова М. В., Малинин М. Л., 2014; Новикова О. Н. и соавт., 2015; Сетдеков Р. А., 2015; Терехов В. И., 2015; Smith H. W., Halls S., 1967; Tzipori S., 1981; Okerman L., 1987; Nataro J. P., Kaper J. B., 1998; Олiйник Л. В., 2004).
Клинико-морфологические методы исследований
Гистохимические методы исследований. Гистохимические исследования проводили методами, изложенными в методических указаниях: Жаров А. В., 1981; Селезнев С.Б., 2000; «Гистохимия иммунокомпетентных органов и цитохимический анализ крови», 2000. При патологоанатомическом исследовании определяли состояние шерстного покрова, кожи, видимых слизистых оболочек, естественных отверстий. Кроликов и телят фиксировали в спинном положении, внутренний осмотр начинали с вскрытия брюшной полости. Делали разрезы брюшной стенки по белой линии живота, отступая 2,0 см от грудной кости и вели по направлению к левому и правому подреберьям. Осматривали брюшную полость. После этого вскрывали грудную полость. С этой целью удаляли ребра на расстоянии 15,0 см от остистых отростков, отделяли грудину у места соединения ребер с реберными хрящами. Обследовали грудную полость, состояние реберной плевры. После исследования брюшной и грудной полости переходили к извлечению внутренних органов. Вначале извлекали сердце, захватывая в области верхушки пинцетом, отрезали, затем выделяли печень, селезенку, желудочно-кишечный тракт. Желудок и кишечник извлекали совместно, перерезали пищевод перед впадением в желудок, осматривали брыжейку с сосудами, отделяли кишечник. Пищевод вскрывали ножницами, делая общий разрез, затем вскрывали гортань и трахею. Легкие отделяли скальпелем от позвоночника, приподнимая доли органа. Заканчивали вскрытие извлечением почек, разрезали брюшину, сосуды, нервные стволы, выделяли почки.
Для приготовления гистологических срезов, исследуемые образцы, размером 2,0-3,0 см, фиксировали в 10,0 %-ном растворе формалина, промывали проточной водопроводной водой, обезвоживали в этиловом спирте взрастающей концентрации: 50-70-100 (в каждой концентрации спирта материал выдерживали 1 24 ч). Кусочки исследуемого материала помещали в специальные формы, заливали парафином, выдерживали 7 8 суток. Для выделения энтеропатогенных эшерихий от 68 телят с болезнями органов пищеварения, не подвергавшимися лечению, мы брали пробы feces из прямой кишки в стерильные пробирки с помощью ватных тампонов на палочках, а также 10 проб крови из ярёмной вены, собранную с соблюдений требований стерильности. Индикацию и идентификацию микроорганизмов, выделенных при болезнях органов пищеварения телят, проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями» (М., 1999); «Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных (2000). С целью выделения патогенных штаммов Escherichia coli проводили исследования патологического материала от больных телят, содержащихся в хозяйствах Рязанской области: ООО фирма «Клен-1», СПК «Вышгородский», ЗАО «Рассвет». Для исследования направлялись пробы feces больных телят (n=68), смывы со слизистых оболочек ротовой и носовой полостей (n=24).
Бактериологические исследования включали: посевы культур микроорганизмов на питательные среды, определение чистоты их роста, идентификацию штаммов, посевы на специальные среды для изучения биохимических свойств микроорганизмов, определение устойчивости их к антибактериальным препаратам, проведение биопробы на лабораторных животных.
Идентификацию выделенных культур микроорганизмов проводили в соответствии с классификационной системой «Bergy s manual 1984-1989», используя общепринятые методы (Герхардт Ф. и соавт., 1984; Сидоров М.А. и соавт., 1995; Скородумов Д.И. и соавт., 2005).
Для бактериологических исследований использовали питательные среды: мясопептонный бульон, мясопептонный агар, агар Эндо, «Rambach Agar», среда Радж-Ханса, «VRB Agar», «Chrom agar», «TBX agar», среды
Гисса. Для сравнительной оценки и подбора эффективных дифференциально диагностических сред, предназначенных для индикации и дифференциации видов энтеробактерий исследования проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями к контролю питательных сред по биологическим показателяи (1980) и «Рекомендациями по организации и проведению контролю качества питательных сред для ветеринарных лабораторий» (2011). При сравнительной оценке дифференциально диагностических сред изучали чувствительность и дифференциальные свойства испытуемых сред, учитывали скорость роста и сохранение стабильности биологических свойств культивируемого микроорганизма. Чувствительность среды определяли по наибольшему разведению, обеспечивающему формирование колоний. Показатель скорости роста определяли по минимальному времени инкубации посевов, за которое наблюдался отчетливый, видимый невооруженным глазом рост культур микроорганизмов на всех засеянных чашках Петри. Для этого готовили взвеси исследуемых микроорганизмов из суточной агаровой культуры по стандарту мутности (ГИСК им. Тарасевича), что соответствовало 1х109 MЛГ/МЛ (в первой пробирке) и делали серийные разведения, перенося по 0,5 мл взвеси в 4,5 мл 0,85 %-ного раствора хлорида натрия. Высевали на мембранные фильтры, помещенные на поверхность питательной среды по 0,1 мл из 7-й пробирки (100 клеток) и из 6-ой пробирки (1000 клеток). Культивировали при 28 С, результаты учитывали через 18, 24, 48 и 72 ч. Диагностическая среда признавалась эффективной, если среднее число выросших колоний на чашке Петри при высеве 100 бактериальных клеток составляло не менее 50. Считали, что среда обладает дифференцирующими свойствами при наличии роста типичных по морфологии колоний, а культуры микроорганизмов обладают стабильными биологическими свойствами.
Для выявления нарушения колонизационной резистентности кишечника проводили бактериологические исследования feces телят, учитывая количественный и качественный состав энтеробактерий. Количество энтеробактерий (КОЕ) в 1 г рассчитывали путем высева материала на поверхность питательных сред по 0,1 мл различных разведений исследуемого материала.
Нозологический профиль инфекционной патологии телят
Почки мягкой консистенции, желто-коричневого цвета, под капсулой точечно-полосчатые кровоизлияния, на разрезе граница между корковым и мозговым слоем нечеткая. При микроскопии наблюдали фокусы дистрофии эпителия проксимальных отделов канальцев, перипортальный отек, поражения клубочков, а также патологические изменения, характерные для расстройств кровообращения - расширение и полнокровие сосудов (рис. 18, 19).
Селезенка плотная, полнокровная, края закруглены; капсула напряжена, с точечными кровоизлияниями; в одних случаях увеличена незначительно, в других - превышала размеры в 1,5-2,0 раза, соскоб обильный. Пульпа темно красного цвета, фолликулы плохо различимы. При гистохимическом исследовании выявлено редуцирование лимфоидных фолликулов, что связано с истощением иммунной системы как результат постоянной антигенной стимуляции, сосуды с утолщенными склерозированными стенками, гиперплазия фолликулов белой пульпы с очагами некроза, в некоторых случаях - атрофия белой пульпы, диффузная или очаговая крупноклеточная гиперплазия с некробиотическими изменениями в очагах пролифирации (рис. 20).
Почки 7-суточных телят при болезнях органов пищеварения: а – контроль; б, в – опыт: дистрофии эпителия канальцев нефронов, 4 - клубочки преимущественно сморщены, очаги неравномерного полнокровия сосудов. Гематоксилин и эозин. Ок. 10, об. в телят при болезнях органов пищеварения: а – опыт: атрофия белой пульпы, склероз сосудов.
Селезенка 7-суточных контроль; б, в Гематоксилин и эозин. Ок. 10, об. 3.1.3. Индикация и идентификация патогенных энтеробактерий, циркулирующих среди поголовья животных и объектов внешней среды животноводческих хозяйств Выделение энтеробактерий из патологического материала, изучение морфологических, культуральных, ферментативных свойств, проводили согласно «Методические указания по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями» (М., 1999) (рис. 5.1). Исследуемый материал
Схема бактериологического исследования патологического материала на смешанную кишечную инфекцию Количественный и видовой состав энтеробактерий учитывали в 1,0 г исследуемого материала телят 1-,5-,10-сут. возраста голштинизированной чёрно-пёстрой породы.
Для изучения колонизационной резистентности кишечника к исследуемым образцам добавляли стерильного 0,85 %-ного раствора NaCl в объеме 10,0 см3, растирали в ступке, размешивали, для осаждения крупных частиц выдерживали 10-15 мин при комнатной температуре. Из полученной суспензии готовили серию десятичных разведений в пробирках, содержащих 9,0 мл 0,85 % NaCl, затем из последних разведений проводили посев 0,1 мл на поверхность дифференциально-диагностических сред, среды культивировали 18 - 24 ч. при температуре 37 С. Результаты параллельных посевов из одного и того же разведения суммировали и определяли среднее число колоний, выросших при посеве из определенного разведения на одной чашке Петри.
Для изучения колонизационной резистентности кишечника телят учитывали индекс колонизации – отношение количества микроорганизмов (КОЕ) в 1,0 г исследуемого материала клинически здоровых телят (контроль) к количеству микроорганизмов при болезнях органов пищеварения (опыт) (табл. 11).
Для первичной идентификации родов семейства учитывали отношение количества идентифицированных культур микроорганизмов от общего числа типичных для вида колоний (специфичность, %), выросших на средах: «Эндо», «Плоскирева», «Висмут сульфит агар» – «ВСА», Агар Мак Конки с сорбитом «Sorbit-Mac Conky agar» («Smac agar»); «Rambach Agar», «VRB Agar», «Радж Ханса», «Дезоксихолат-цитратный агар с лактозой и сахарозой» («Deoxycholate Citrate Lactose Sucrose agar» – «DCLS agar»); «Бриллиантовый зеленый агар» («Brilliant green agar» – «Brilliant agar»); «Триптоно-желчный-X- глюкуронидный агар» («Tryptone bile X-Glucoronidae medium agar» – «TBX agar»); «Хромокульт колиформ агар» («Chromocult Coliform agar» – «Chrom agar»). При видовой идентификации типичных для семейства Enterobacteriaceae изолированных колоний, исследовали морфологические и тинкториальные свойства микроорганизмов. При наличии грамотрицательных палочек оксидазаотрицательные, каталазаположительные культуры микроорганизмов пересевали в пробирки со скошенным мясо-пептонным агаром для изучения ферментативных свойств.
Выделенные изоляты рода Escherichia – образовывали индол, не образовывали сероводород, утилизировали ацетат натрия, не утилизировали цитрат, малонат натрия, не продуцировали уреазу, фенилаланиндезаминазу, ферментировали глюкозу, различались по способности ферментировать сахарозу и дульцит, из 69 изолятов сахарозу ферментировали 51 (73,9 %), дульцит – 56 (81,2 %) культур микроорганизмов.
Микроорганизмы рода Klebsiella – не образовывали индол, сероводород, утилизировали глюкозу, цитрат натрия, продуцировали ацетилметилкарбинол, ферментировали инозит, гидролизовали мочевину.
Микроорганизмы рода Proteus – образовывали сероводород, уреазу, редуцировали нитраты, гидролизовали желатин, ферментировали глюкозу, давали положительную реакцию с метиловым красным, дезаминировали фенилаланин, не декарбоксилировали лизин, различались по способности утилизировать цитрат натрия, из 12 изолятов цитрат натрия утилизировали 8 (66,7 %) культур микроорганизмов.
Микроорганизмы рода Enterobacter – не образовывали индол и сероводород, ферментировали глюкозу и лактозу, утилизировали малонат натрия.
Микроорганизмы рода Citrobacter - не образовывали индол, образовывали сероводород, утилизировали малонат натрия.
При идентификации культур микроорганизмов специфичность среды «Эндо» относительно невысокая от 21,4 до 79,4 %, за счет наличия достаточно часто встречающегося фермента (лактоза), что не позволяло дифференцировать колонии сходных видов энтеробактерий. Для дифференциации энтеробактерий специфичность «TBX agar» несколько выше - от 25,0 до 86,3 %, за счет выявления специфического фермента – -глюкуронидаза. За счет наличия хромогенных субстратов, расщепляющихся под воздействием двух специфических ферментов (-глюкуронидаза, -галактозидаза, специфичность среды «Chrom agar» от 66,7 до 94,1 % (табл. 12).
Изучение чувствительности эпизоотических штаммов энтеробактерий к антибактериальным препаратам
Создание и использование в качестве лекарственных средств препаратов, приготовленных из природного сырья, обладающие разносторонней биологической активностью и в то же время безвредные для макроорганизма является актуальным направлением в ветеринарной медицине (Барсуков А.А., 1988). В этом отношении препарат «Пинсильвин», изготовленный из почек сосны Обыкновенной (Gemmae Pini silvestris), представляют определенный интерес. При изучении чувствительности энтеробактерий к действию препарата зоны задержки роста (мм) составляли: S. enteritidis 11,33±0,39; S. dublin 8,33±0,39; E. coli 15,30±2,99; K. pneumonia 8,67±0,39; P. vulgaris 9,67±0,77; С. freundii 16,33±0,77.
При сочетанном действии антибактериальных препаратов и препарата «Пинсильвин» зона задержки роста бактерий семейства Enterobacteriac варьировала: Salmonella enteritidis от 25,67±0,87 до 40,0±1,16; Salmonella Dublin от 16,33±0,39 до 32,67±1,36; Escherichia coli от 17,57 ±2,53 до 32,43±2,67; Klebsiella pneumonia от 9,33±0,39 до 29,0±1,16; Proteus vulgaris от 10,67±0,19 до 41,67±0,97; Сitrobacter freundii от 18,33±2,71 до 40,67±0,39 Разработка нового антибактериального лекарственного препарата предполагает всестороннее исследование фармако-токсикологических свойств, изучение которых проводили с использованием лабораторных моделей путем определения параметров острой, подострой (субхронической), хронической токсичности, общего влияния на организм, а также местно- раздражающего действия. По степени токсичности препарат «Пинсильвин» относится к 4 классу опасности (по ГОСТ 12.1.007-76) – вещества малоопасные. При макроскопическом исследовании слизистых оболочек желудка и двенадцатиперстной кишки патологических изменений не обнаружено, что свидетельствует об отсутствии раздражающего и ульцерогенного действия. При проведении ветеринарно-санитарной оценки установлено, что мясо кроликов опытной группы по своим физико-химическим, органолептическим, микробиологическим показателям является доброкачественным, не отличается от мяса кроликов контрольной группы и соответствуют требованиям нормативных документов, предъявляемых к мясу кроликов. Весовые коэффициенты внутренних органов у опытных животных не отличались от контрольных, это свидетельствует о том, что препарат «Пинсильвин» вызывает увеличение массы тела животных без нарушения развития внутренних органов.
Одним из важнейших показателей, указывающих на здоровье животных, является состав крови, находящийся в тесной взаимосвязи с организмом (Каримов Ф. А., 1978; Казадаев В. А. и соавт., 2012).
У телят при изменении общей температуры тела, пульса, дыхания, отсутствия аппетита, угнетенном состоянии, нарушения акта дефекации, изменении колонизационной резистентности кишечника, динамика изменений показателей крови характеризовалась увеличением общего числа лейкоцитов. Лейкоцитоз отмечают при инфекционных болезнях и воспалительных процессах, особенно в первый период развития заболевания - в период активного участия организма в борьбе с болезнетворным агентом (Кудрявцев А. А., 1974).
Повышенное содержание моноцитов Ефимов А. А. и соавт. (1986), Кондакова И. А. (1998) отмечают у больных телят, у которых при проявлении клинических признаков имеет место диспепсия. Моноциты способны к фагоцитозу корпускулярных чужеродных частиц, детрина и измененных собственных клеток. Участвуют в осуществлении клеточного и гуморального иммунитета (Кондрахин И. П., 2004). Эритроциты, помимо дыхательной функции принимают активное участие в регуляции кислотно-щелочного равновесия организма, адсорбции токсинов и антител, а также в ряде ферментативных процессов. В наших исследованиях у больных наблюдали повышенное содержание эритроцитов. Эритроцитоз наблюдается вследствие активизации эритропоэза (абсолютный эритроцитоз) или сгущение крови после потери жидкости (относительный эритроцитоз) (Кудрявцев А. А. и соавт., 1974; Кондакова И. А., 1998).
При первичном исследовании у телят установлен повышенный уровень гемоглобина, гематокрита (объемного соотношения форменных элементов и плазмы), которое отмечается при дегидратации, сгущении крови (Кондрахин И. П., 2004).
Одним из важных диагностических и прогностических показателей является тест на С-реактивный белок, который появляется в начале заболевания, а при выздоровлении снижается. По данным ряда авторов, С- реактивный белок обнаруживают при острых формах заболеваний инфекционной и неинфекционной этиологии, а при хронических, вяло протекающих болезнях, с выраженной воспалительной реакцией С- реактивный белок чаще отсутствует (Виноградов Н. И. и соавт., 1962; Хомерики Г. Л., 1966; Заболотный Л. С., 1968; Кондакова И. А., 1998). В работе Кондаковой И. А. (1998) в сыворотке крови больных телят С- реактивный белок не обнаружен, по данным Тетерева И. И. (1970) С-РБ присутствовал. По данным наших исследований, у больных телят отмечалось повышение уровня С-реактивного белка. Снижение уровня общего белка в сыворотке крови объясняется длительным недокормом, заболеваниями желудочно-кишечного тракта (Кондакова И. А., 1998).