Содержание к диссертации
Введение
1 Микробиоценоз кишечника животных в присутствии грибов рода Candida
1.1 Общая характеристика грибов рода Candida
1.2 Биологоэпидемиологическая роль Candida spp
1.3 Агроэкосистема – микробиоценоз -продуктивные животные: при чинно-следственная связь
1.4 Биологическое значение ассоциативных взаимоотношений микроорганизмов
2 Собственные исследования
2.1 Материалы и методы исследований
2.1.1 Материалы исследований
2.1.2 Методы исследований
Результаты собственных исследований
3.1 Определение хронической интоксикации организма по показателю спонтанной альтерации эритроцитов
3.2 Структура микоценоза
3.3 Биологические свойства выделенных грибов рода Candida
3.4 Результаты изучения паразитоценоза
3.5 Сравнительный анализ изменения микробиоценоза кишечника свине при различной степени хронической интоксикации организма
3.6 Изменение иммунного статуса свиней на фоне грибковой инвазии Обсуждение результатов исследований
Выводы.
Практические предложения
Список литературы
- Биологоэпидемиологическая роль Candida spp
- Агроэкосистема – микробиоценоз -продуктивные животные: при чинно-следственная связь
- Материалы исследований
- Результаты изучения паразитоценоза
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Современное отечественное свиноводство – динамично развивающаяся отрасль животноводства России, позволяющая в сравнительно короткие сроки удовлетворить потребность широких слоев населения в доступном, биологическим полноценном животном белке (Сафиуллин Р.Т., 1984; Ямщиков В.Н., 2003; Васильев Е.Н., 2004; Диденко П.П., Зуев Д.В., 2006).
Одними из актуальных вопросов в области ветеринарной
микробиологии, эпизоотологии, микологии с микотоксикологией и
иммунологии являются кишечные микозы свиней, которые имеют
достаточно широкое распространение в регионах с развитым
свиноводством и наносят ощутимый экономический ущерб (Сафиуллин Р.Т., 1984; Буров В.В., 2001; Кизин Е.К., 2003; Федотов С.Г., 2004; Крылов В.И., 2004; Глазунов Н.В., 2006, Ильина Н.А. 2012).
Кишечные микозы свиней часто встречаются в виде сочетанных микробных поражений, что ведет к падежу и вынужденному убою заболевших животных, снижению продуктивности и качеству продукции, выбраковке пораженных органов, сырья и снижения племенной ценности (Сафиуллин Р.Т., 1984; Олехнович Н.И., 1990, Габдулин В.А., 2000; Ильина Н.А., 2014).
Микрофлора тела сельскохозяйственных животных – это набор
различного рода микроорганизмов, обуславливающий состояние всего
организма в целом. Часто обычная микрофлора - источник тех патогенных
или условно-патогенных микроорганизмов, обуславливающих эндогенное
инфицирование. Присутствие патогенных и условно-патогенных
микроорганизмов в составе микрофлоры приводит к изменению е количественного и качественного состава, что способно изменить приспособительно-адаптационные механизмы всего организма животного. Таким образом, именно обычная микрофлора приобретает большое значение в возникновении или развитии болезни, способствуя либо препятствуя ее проявлению.
В настоящее время с нарастающим неблагополучием экологической ситуации в России наблюдаются патологические изменения микрофлоры пищеварительного тракта сельскохозяйственных животных, что ставит перед микробиологами и ветеринарными специалистами новые сложные задачи по охране здоровья животных.
В связи с вышеизложенным представляется важной комплексная оценка показателей состояния микробиоценоза кишечника свиней под влиянием грибов рода Candida spp.
Степень разработанности темы исследования.
Контаминация кишечника патогенными грибами – одна из наиболее
распространнных причин нарушения микрофлоры кишечника животных.
Появление в кишечнике плесневых грибов, а также грибов рода Candida
spp, изменение его количественного и качественного состава
свидетельствует о наличии дисбиоза, а, следовательно, дисфункции многих
систем органов. В связи с этим последние годы большое внимание
уделялось изучению взаимоотношений грибов рода Candida с другими
микроорганизмами. Так, например, согласно исследованиям В.Г.
Арзуманян. М.А. Мокроновой, Т.И. Самуиловой, В.Б. Гервазиевой при
атопическом дерматите дрожжеподобные грибы выявлялись на кожных
покровах чаще, чем у здоровых лиц. Вместе, с этим на коже часто
обнаруживались стафилококки, что дало авторам, основание
предположить, что продукты метаболизма дрожжеподобных грибов могут представлять своеобразный катализатор для роста стафилококков.
Было обнаружено, что E.faecalis и Е.соli могут оказывать антагонистическое действие на дрожжеподобные грибы, угнетая мицелиальную трансформацию C.albicans при воздействии на гриб внеклеточных метаболитов этих бактерий (Kaczmarski, 1999).
Изучалось также влияние грибов на течение кишечных инфекций. Микотическая сенсибилизация организма создавала фон, на котором тяжелее протекал брюшной тиф и другие кишечные инфекции (Pybiis, 1998). Кроме того, C.albicans в экспериментах in vivo снижали чувствительность бактерий-ассоциантов к антибиотикам (Бухарин О.В. и др., 2002; Bailey, 1995).
Вместе с тем обнаруживается недостаточное количество работ, посвященных оценке степени хронической интоксикации организма при инвазии Candida spp, изучению иммунного статуса животного.
Целью диссертационной работы являлось разновекторное изучение особенностей микробиоценоза кишечника свиней при инвазии Candida spp.
Для реализации поставленной цели исследований были
сформулированы следующие задачи:
-
Определить степень хронической интоксикации организма свиней при инвазии грибов рода Candida.
-
Оценить структуру микоценоза кишечника свиней в свиноводческих хозяйствах Ульяновской области в зависимости от степени хронической интоксикации.
-
Провести сравнительный анализ биологических свойств выделенных грибов рода Candida.
4. Исследовать структуру кишечного паразитоценоза животных.
5. Выявить зависимость состояния облигатной и транзиторной
микрофлоры кишечника свиней от степени хронической интоксикации
животных и частоты встречаемости Candida spp.
6. Изучить показатели клеточного и гуморального иммунитета при
инвазии Candida spp. в зависимости от степени хронической интоксикации
организма свиней.
Научная новизна исследований. Показано, что наличие в структуре микробиоценоза кишечника свиней грибов рода Candida, повышает
степень хронической интоксикации организма животных. Впервые установлено, что с ростом степени хронической интоксикации организма видовое разнообразие паразитоценоза кишечника свиней свиноводческих хозяйств Ульяновской области значительно расширяется.
Проведена комплексная оценка биологических свойств выделенных видов, а также комплексный сравнительный анализ состояния микробиоценоза кишечника свиней при инвазии Candida spp. в зависимости от тяжести хронической интоксикации. Установлен видовой спектр простейших, который включает инфузории (Balantidium coli), саркодовые (Blastocystis sp., E. hartmanni, E. coli, E. nana, Iodamoeba butschlii), жгутиковые (Lamblia intestinalis) и кокцидии (Cryptosporidium parvum). Показано, что экстенсивность инвазии свиней простейшими составляет 81,7 %, из них балантидиями – 18,78 %. Гельминты, представленные 1 видом трематод (Opisthorchis felineus), 1 видом цестод (Hymtnolepis nana) и 1 видом нематод (Ascaris lumbricoides), выявлены у 12,18 % обследованных свиней.
Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные
результаты расширяют теоретические представления о системе
мониторинга микробиоценоза кишечника, включающие комплексную оценку мико-, протоценоза и микрофлоры кишечника свиней.
Полученные результаты по изучению влияния хронической интоксикации организма на иммунно-биологические характеристики микробиоценоза кишечника, позволяют оптимизировать современные методы профилактики микотических поражений у продуктивных животных;
Разработаны научно-обоснованные практические рекомендации, направленные на повышение жизнеспособности и продуктивности сельскохозяйственных животных, которые могут быть использованы специалистами АПК в производственной деятельности.
Методология и методы исследования.
При проведении исследований и изложении материала были
использованы как общенаучные (теоретико-методологический анализ
литературы, системный подход, анализ, сравнение, измерение,
эксперимент), так и частно-научные (микробиологические,
микроскопические, биохимические, микологические,
микотоксикологические, гематологические, иммунологические).
Использование перечисленных методов и статистический анализ экспериментальных данных обеспечили объективность и достоверность полученных результатов.
Научные положения, выносимые на защиту:
1. Степень хронической интоксикации организма свиней зависит от
частоты встречаемости и уровня контаминации кишечника грибами рода
Candida.
2. Проявление хронической интоксикации организма различной степени
отражается на количественных и качественных характеристиках
паразитофауны кишечника свиней в свиноводческих хозяйствах
Ульяновской области.
-
Существует причинно-следственная связь проявления хронической интоксикации организма животных и состава кишечного микробиоценоза.
-
Инвазия Candida spp. сопровождается значительными изменениями количественных показателей основных эндосимбионтов толстого кишечника животных и увеличением количества представителей транзиторной микрофлоры.
5. Хроническая интоксикация различной степени тяжести на фоне
грибковой инвазии сопровождается снижением показателей клеточного и
гуморального иммунитета.
Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность
полученных результатов обусловлена значительным объемом
экспериментального материала, полученного с использованием
высокоинформативных методов исследования в лабораторных условиях с подтверждением данных математической статистикой.
Основные результаты и практические рекомендации
диссертационных исследований доложены на расширенном заседании
кафедры биологии и химии ФГБОУ ВПО «УлГПУ им. И.Н. Ульянова»
(Ульяновск, 2012, 2013, 2014, 2015, 2016), на 4-й Всероссийской
конференции с международным участием «Медико-физиологические
проблемы экологии человека (Ульяновск, 2011), на 3 съезде микологов
России (Москва, 2012), Международной научно-практической
конференции с элементами научной школы для молодых ученых «48-е Евсевьевские чтения» (Саранск, 2012), Международной научно-практической конференции «Наука и образование в 21 веке» (Тамбов, 2013), Международной очной конференция XXX Любищевские чтения «Современные проблемы эволюции и экологии» (Ульяновск, 2015).
Основные научные результаты по теме диссертации опубликованы в одиннадцати печатных работах, из них четыре – в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образовании и науки РФ.
Объем и структура работы. Работа изложена на 98 страницах компьютерной верстки, содержит 19 таблиц и 13 рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложения. Библиографический список включает 154 источника, в том числе 37 на иностранных языках.
Биологоэпидемиологическая роль Candida spp
Животные представляет собой экологическую нишу для разнообразных микроорганизмов, заселяющих его биотопы. Микробиоценозы различные биотопов животных представляют собой сложные системы, которые отличаются не только чрезвычайной многокомпонентностью, но и разнообразным содержанием входящих в него представителей микрофлоры (Бухарин О.В, 2013). Естественно, что при заселении биотопов макроорганизма между микробами складываются определенные взаимоотношения, которые отражаются на качественной и количественной характеристике того или иного микробного пейзажа (Несвижский Ю.В., Воробьев А.А., Белоносов С.С., Лобанов В.Е., Иноземцева Л.О., Гаспарян С.А., 2002).
Анализ проявлений многочисленных микробных ассоциаций позволяет прояснить патогенез ряда инфекционных заболеваний различной этиологии, правильно оценить происхождение тех или иных аномалий в структуре микроорганизмов, приводящих к изменению их типичных, или проявление совершенно новых необычных, биологических свойств (Черкасов С.В., 2011).
В 1979 г. Р.Н.Реброва описала влияние дрожжеподобных грибов, на течение дифтерии и формировании дифтерийного бактерионосительства. C.albicans отягощали инфекционный процесс, вызванный С.diphtheriae, увеличивая вирулентность культур возбудителя, влияя на его антибиотикорезистентность. Отягощающая роль грибов рода Candida на дифтерийную инфекцию, объяснялась рядом факторов: усилением вирулентности возбудителя под влиянием грибов, микотической сенсибилизацией макроорганизма, воздействием на макроорганизм комплекса факторов, присущих отдельным возбудителям, а также, вновь приобретенных и новых свойств, возникших в ассоциации: нарушением целостности слизистых оболочек грибами и создания условий для внедрения и размножения дифтерийных бактерий (Колычев Н.Н., Госманов Р.Г., 2003). По данным Р.Н. Ребровой (1979) дрожжеподобные грибы могут включаться в ассоциации микробов, населяющие слизистые оболочки дыхательных путей. Присутствие грибов рода Candida способствовало отягощению течения ряда заболеваний: гипертрофической формы хронического фарингита, хронической пневмонии (в ассоциации с S.haemolyticus), бронхиальной астмы, бронхита, туберкулеза легких. При внутривенном заражении свиней патогенными стафилококками и грибами, заболевание протекало значительно тяжелее, чем моноинфекция. Бактериологические и гистологические исследования печени, почек, легких показали, что оба возбудителя ведут себя как синергисты. В условиях in vitro стафилококки угнетали рост гриба, в то время как гриб стимулировал их размножение (Сагlson, 1983).
Угнетение адгезии грибов рода Candida к акриловым зубным поверхностям наблюдалось при действии на грибковые культуры S.sanguis и P.gingivalis (Nair, 1996). Присутствие S.salivarius также подавляло адгезивную способность C.albicans in vivo и in vitro (deMiranda, 1992). Напротив, S.oralis, S.sanguinis, S.gordonii способствовали колонизации ротовой полости грибами рода Candida (Justin, Sallivan, 2000).
При язвенной болезни желудка бактерии Неliсоbacter pylori в достаточно высоком проценте выделяются в ассоциации с грибами рода Candida (чаще всего с С.krusei). Данные микроорганизмы могут сосуществовать без ущерба друг для друга, аргументами чего являются отсутствие антагонистической активности и угнетение фагоцитоза геликобактериями, благоприятствующее развитию грибов-ассоциантов.
Ряд работ посвящено влиянию лактобацилл на ростовые свойства грибов рода Candida. Установлено, что угнетение роста грибов происходит за счет продукции L.acidophilus пероксидазы, перекиси водорода и гипотиоцианата (Jаск, 1990; Fitzsimmons, 1994; Collins, 1999). При введении
опытным мышам L.acidophilus, L.reuteri, L.casei, L.animalis происходило снижение численности грибов в кишечнике, что существенно продлевало жизнь экспериментальным животным, зараженным C.albicans (Wagner, 1997; Makihira, Nicawa, Taraagami, 2002).
Конкурентные взаимоотношения нормальной микрофлоры и C.albicans подтверждаются более интенсивной колонизацией C.albicans желудочно-кишечного тракта безмикробных цыплят и мышей при нормальной функции тимуса у этих животных. У безмикробных крыс для воспроизведения почечных поражений требовалось в 5 раз меньше клеток возбудителя кандидоза по сравнению с нормальными животными (Вельский В.В., Шаталова Е.В., Прадиуман Кумар Сингх, 1994; Кубась В.Г., 1997).
Имеются многочисленные данные о ключевой роли грибов рода Candida в развитии дисбиотических нарушений кишечника, связанной со способностью данных микробов изменять биологические свойства бактериальной флоры, в частности усиливая персистентный потенциал некоторых условно-патогенных микроорганизмов (Бухарин О.В., 1999; Бухарин О.В. и др., 2002).
Исследованиями Н.И. Потатуркиной-Нестеровой (2003) установлено, что интраназальное заражение мышей К.pneumoniae после воздействия на макроорганизм метаболитов грибов Aspergillus flavus, вызывает у животных развитие инфекционного процесса с более выраженными патоморфологическими изменениями и более высокой летальностью в сравнении с контрольным заражением мышей одной только культурой клебсиелл.
Агроэкосистема – микробиоценоз -продуктивные животные: при чинно-следственная связь
Проведя статистический корреляционный анализ было выявлено наличие прямой зависимости степени хронической интоксикации организма свиней от уровня контаминации фекалий спорами грибов рода Candida.
Так, в группе животных со слабой выраженностью данного признака (25 свиней) количественное содержание кандид составляло lg 6,5+0,3 КОЕ/г Показатель линейной корреляционной зависимости г=0,51. У свиней со средней выраженностью хронической интоксикации (49 особей) данный показатель находился на уровне 6,9+0,6 КОЕ/г, г=0,63. И в группе животных с тяжелой степенью хронической интоксикации количество спор грибов Candida spp. равнялось lg 7,1+0,1 КОЕ/г, где г=0,69. 3.2. Структура микоценоза
В кишечнике животных постоянно вегетируют определенные виды микроорганизмов, составляющие нормальную микрофлору кишечника. Однако, в желудочно-кишечный тракт свиней, вместе с пищевыми продуктами, могут попадать и другие виды микробов, в частности, споры микроскопических грибов. Вопросам изучения видового и количественного состава микроскопических грибов кишечника посвящены лишь единичные работы, авторами которых было установлено, что грибы нередко высеиваются из испражнений свиней. При этом частота выделения грибов зависит от сезона года (Шевченко Т.Ф., 1985). Вероятно, в связи с этим данные различных авторов о частоте находок микроскопических грибов в кишечнике свиней довольно противоречивы. Поэтому микологическое изучение испражнений животных было проведено нами в один и тот же период года, а именно, в летний. В этот период года, во-первых, отмечена наибольшая частота обнаружения грибов в испражнениях, во-вторых, этот период года является наиболее неблагополучным по заболеваемости кишечными инфекциями.
Всего было изучено 98 проб испражнений, полученных от обследованных животных. Споры микроскопических грибов были обнаружены во всех пробах (100 %). Из испражнений готовили мазки для обнаружения в них спор грибов. Были изучены как окрашенные, так и неокрашенные препараты. В неокрашенных мазках споры микроскопических грибов обнаруживались редко. Очевидно, присутствие в испражнениях различных клеточных элементов и непереваренных остатков пищи затрудняло поиски спор в препаратах.
С целью просветления (мацерации) исследуемого материала, его смешивали в маленьких бюксах с карболовым фуксином Циля, кипятили в течение 20-30 секунд и на 30 минут оставляли при комнатной температуре. Затем из содержимого бюксов готовили мазки, фиксировали их, в течение 2-3 секунд обрабатывали 5 % серной кислотой, промывали водой и докрашивали метиленовой синькой 2 минуты. Споры грибов в окрашенных таким способом мазках имели вид круглых или овальных образований ярко-красного цвета (Шевченко Т.Ф., Галикеев Х.Л., 1980). Всего было выявлено 4 рода микроскопических грибов (табл. 4)
Мицелий грибов рода Aspergillus имел вид войлока, покрывающего всю поверхность питательной среды. На поверхности мицелия невооруженным глазом были видны точечные головки (спорангии) зеленого, сине-зеленого, серого или черного цвета. При микроскопическом исследовании спорангии имели шаровидную форму и были наполнены овальными или круглыми спорами, конидии в виде «лейки», мицелий септированный.
Грибы рода Сandida образовывали на 2 - 3 день после посева гладкие колонии кремового цвета, при микроскопии которых обнаруживались овальные почкующиеся клетки и псевдомицелий. Дальнейшую их идентификацию проводили на основании изучения биохимической активности.
Грибы рода Mucor образовывали несептированный мицелий, имеющий на концах спорангии с расположенными в них эндоспорами.
У грибов Penicillium мицелий септированный с терминальным разветвлением в виде «кисточки».
При микологическом изучении испражнений было установлено, что по родовому составу микопейзаж животных идентичен. Были выделены грибы рода Aspergillus, Penwillium, Mucor и Candida. Частота высеваемости плесневых грибов из испражнений свиней также была одинаковой по содержанию грибов родов Penicillium и Mucor, но имела значительные отличия по обсе-мененности грибами Aspergillus и Candida (табл. 5).
Количественное изучение обсемененности испражнений спорами микроскопических грибов свиней с различной степенью хронической интоксикации организма показало положительную динамику уровня контаминации грибами рода Aspergillus и Candida. Так, в группе животных с легкой выраженностью данного признака (25 особей) количество грибов не превышало lg 2,1±0,8 КОЕ/г и lg 4,3+0,5 КОЕ/г соответственно. В группе сравнения - lg 0,8±0,02 КОЕ/г и lg 2,4+0,3 КОЕ/г соответственно, р 0,05 (табл. 5).
Материалы исследований
Изучение видового состава паразитофауны кишечника свиней с тяжелой степенью хронической интоксикации организма выявило динамику видового разнообразия простейших по сравнению с предыдущей группой животных. Так, было идентифицировано 8 видов простейших, гельминтов обнаружено 4 вида.
Таким образом, в исследуемом материале обследованных, выявлены представители трех семейств кишечного протоценоза: саркодовые (40,9 %), инфузории (13,6 %) и жгутиковые (9,1 %).
В ходе исследования были получены данные, отражающие богатое видовое разнообразие паразитофауны кишечника обследованных животных. Выявлено одиннадцать видов кишечных паразитов, из них восемь видов – простейшие. Они были представлены саркодовыми: Blastocystis sp, Entamoeba hartmanni, Entamoeba coli, Endolimax nana, Iodamoeba butschlii, жгутиковыми: Lamblia intestinalis, инфузориями: Balantidium coli и кокци-диями: Cryptosporidium parvum. Из четырех видов гельминтов обнаружены: одного вида трематод: Opisthorchis felineus, одного вида цестод: Hymtnolepis nana, двух видов нематод: Enterobius vermicularis, Ascaris lumbricoides. Нами отмечена прямая зависимость роста встречаемости кишечных паразитов и динамики видового разнообразия от степени хронической интоксикации организма животных.
При оценке паразитоценоза кишечника обследованных в ряде случаев выявлены двухчленные ассоциации разных видов паразитов: балантидии – грибы рода кандида, бластоцисты – лямблии, балантидии – бластоцисты. Следовательно, чаще всего паразитоценоз был представлен сочетанием инфузорий и грибов (21,6 %), саркодовыми (18,7 %), жгутиковыми (11,2 %) и гельминтами (9,4 %), реже сочетанием гельминтов с гельминтами (0,42 %). Кроме того, встречались трехчленные ассоциации: лямблии – балантидии – грибы (7,4 %), протозойно-гельминто-грибковые (7,8 %).Обращает на себя внимание высокая встречаемость дрожжеподобных грибов. Достоверно возрастает зараженность грибами в сочетании с одним и двумя видами паразитов, чаще с балантидиями (р 0,0001; р=0,005).
В результате выполнения работы установлена высокая зараженность свиней кишечными паразитами. Увеличение роста зараженности находилось в прямой зависимости от степени хронической интоксикации организма свиней и уровня высеваемости грибов Candida spp. Полученные данные о видовом составе паразитофауны и ассоциациях паразитов кишечника у обследованных животных указывают на тот факт, что у животных с легкой степенью хронической интоксикации видовой состав беднее (6 видов), тогда как у животных с тяжелой степенью проявления данного признака выявлено 11 видов кишечных паразитов: 8 видов простейших (5 видов саркодовых, 1 вид жгутиковых, 1 вид инфузорий, 1 вид кокцидий) и 4 вида гельминтов (1 вид трематод, 1 вид цестод, 2 вида нематод), что согласуется с данными, полученными Е.А. Карпеевой в 2011 году. 3.5. Сравнительный анализ изменения микробиоценоза кишечника свиней при различной степени хронической интоксикации организма
Следующим этапом нашей работы явилось изучение микробиоценоза кишечника свиней с различной степенью хронической интоксикации. Нами было изучено изменение облигатной микрофлоры толстой кишки животных с легкой степенью хронической интоксикации (25 особей). Результаты исследования микробиоценоза толстой кишки данной группы животных показали, что в их испражнениях количество бесспоровых облигатных анаэробов - бифидобактерий оказалось сниженным (рис. 9). Escherichia VLactobacilla Bifidobacterium Lg KOE/г 10 Микробное число бифидобактерий составило lg 7,5+0,32 КОЕ/г, в контрольной группе животных средняя арифметическая величина высеваемости бифидобактерий составила lg 8,7+0,56 КОЕ/г (р 0,05). Содержание лактобактерий не превышало lg 5,6+0,44 КОЕ/г, в контрольной группе данный показатель равнялся lg 7,2+0,36 КОЕ/г. Кишечные палочки были обнаружены во всех пробах испражнений в количестве lg 5,9+3,1 КОЕ/г, в контрольной группе средняя арифметическая величина данного показателя составила lg 7,9+0,58 КОЕ/г (р 0,05).
Более глубокие сдвиги в структуре облигатной микрофлоры выявлены у свиней со средней степенью хронической интоксикации (49 особей). Так содержание бифидобактерий снизилось до lg 6,2+0,19 КОЕ/г, р 0,001 (рис. 10). Общее количество кишечных палочек составило lg 4,7+0,29 КОЕ/г. Отмечалось также снижение количества лактобактерии до lg 4,8+0,24 КОЕ/г. Lg КОЕ/г Bifidobacterium Escherichia Lactobacilla Контрольная группа Животные инвазированные Candida spp.
Максимальные изменения содержания микроорганизмов облигатной микрофлоры наблюдались нами в группе свиней с высокой степенью хронической интоксикации (22 особи). Обсемененность кишечника бифидобактериями резко снизилась и средняя арифметическая величина ее составила lg 1,8+0,33 КОЕ/г (р 0,001). Лактобактерии обнаруживались в количестве lg 2,7+0,34 КОЕ/г, что отражает более глубокие сдвиги в кишечной микрофлоре (р 0,001). Микробное число кишечных палочек оказалось также сниженным (lg 3,5+0,34 КОЕ/г, р 0,001).
Результаты изучения паразитоценоза
Исследования микробиоценоза толстой кишки свиней со средней степенью хронической интоксикации обнаружили увеличение высеваемости условно-патогенных микроорганизмов по сравнению с результатами предыдущей и контрольной групп.
Спороносные анаэробные палочки были обнаружены в количестве lg 6,1+0,6 КОЕ/г, протеи - lg 6,5+0,8 КОЕ/г, клебсиеллы - lg 6,1+0,7 КОЕ/г, энтерококки - lg 7,3+0,8 КОЕ/г и стафилококки - lg 5,9+0,3 КОЕ/г, р 0,05.
Максимальные увеличение условно-патогенных микроорганизмов отмечались нами в группе свиней с высокой степенью хронической интоксикации организма. Обсемененность Clostridium spp. lg 6,9+0,4 КОЕ/г, бактерии рода Proteus, Klebsiella, Enterococcus, и Staphylococcus были выявлены в количестве lg 7,3+0,1 КОЕ/г, lg 6,7+1,1 КОЕ/г, lg 7,9+0,9 КОЕ/г, lg 6,6+0,2 КОЕ/г, соответственно (р 0,05).
Данные изменения свидетельствуют о развитии выраженного дисбиоза, который способен сформировать перморбидный фон для развития тяжелых системных заболеваний различного генеза.
Результаты проведенных исследований демонстрируют зависимость степени хронической интоксикации организма свиней и глубины дисбиоти-ческих изменений от уровня контаминации грибов Candida spp..
Для рассмотрения иммунологического ответа организма свиней были изучены следующие показатели: частота перехода лимфоцитов в бластную форму (РБТЛ), уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), ци-тотоксический индекс (ЦИ). Изучение данных показателей проводили в группах животных с различной степенью хронической интоксикации организма. Результаты исследований бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) периферической крови в присутствии лимфоцитарного митогена у свиней, инфицированных грибами рода Candida spp., указывало на выраженные отклонения этого показателя по сравнению с контрольной группой. В группе животных с легкой степенью проявления хронической интоксикации (25 особей) уровень бластной трансформации снижался до 32,6±3,1. Более выраженное снижение отмечалось в группе животных со средней степенью хронической интоксикации (49 особей) до 27,4±1,5, и у свиней с тяжелой степенью проявления данного признака (22 особи) – до 25,3±1,3; Р 0,01).
Следовательно инвазия грибов рода Candida spp., определяющая степень хронической интоксикации организма свиней, снижает функциональную способность лимфоцитов периферической крови к трансформации в бласты под воздействием лимфоцитарного митогена.
Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) также выявило его изменение под действием грибов рода Candida spp. Это изменение заключалось в значительном повышении значений ЦИК. Так, у животных с легкой степенью хронической интоксикации концентрация ЦИК составляла 205,2±9,98 (138,0±12,6 в контроле), со средней степенью – 215,0±10,3 (Р 0,01), и в группе свиней с тяжелой степенью интоксикации – 287,2±19,2.
В общей характеристике эффекторных реакций клеточного иммунитета особое место занимают лимфоциты, обладающие повреждающим действием в культуре ткани. Установлено, что цитотоксический эффект проявлялся у большинства свиней, инфицированных грибами рода Candida spp.. Однако, показатели его, в зависимости от степени проявления хронической интоксикации организма значительно варьировали. Особенно выраженное угнетение цитотоксического эффекта отмечено у животных с тяжелой степенью хронической интоксикацией организма до 0,252±0,1 (в контроле 0,937±0,02, Р 0,01). В группе свиней со средней выраженностью хронической интоксикации активность лимфоцитов была выше 0,671±0,1; Р 0,01), но даже у свиней с легкой степенью хронической интоксикации цитотоксический эффект был гораздо ниже уровня контрольной группы.
Изучение аффинности Е-рецепторов Т-лимфоцитов у свиней, показало равномерное снижение всех фракций Е-РОК, однако статистически достоверным было снижение средне- и высокоаффинных Е-РОК (р 0,05). Количество Т-лимфоцитов с Е-рецептором средней аффинности в группе животных с легкой степенью хронической интоксикации организма было в 0,9 раза ниже, чем у контрольных животных (р 0,05). Количество Т-лимфоцитов с высокоаффинным Е-рецептором было 1,4 раза ниже, чем в контроле.
Количество Т-лимфоцитов с Е-рецептором средней аффинности в группе животных со средней степенью хронической интоксикации организма было в 1,2 раза ниже, чем у контрольных животных (р 0,05). Количество Т-лимфоцитов с высокоаффинным Е-рецептором было в 1,9 раза ниже, чем в контроле.
Количество Т-лимфоцитов с Е-рецептором средней аффинности в группе животных с тяжелой степенью хронической интоксикации организма было в 1,5 раза ниже, чем у контрольных животных (р 0,05). Количество Т-лимфоцитов с высокоаффинным Е-рецептором было в 2,5 раза ниже, чем в контроле. С целью изучения функционального состояния В-системы иммунитета определяли уровень иммуноглобулинов А, М, G.
Как видно из таблицы, уровень IgA даже в группе свиней с легкой степенью хронической интоксикацией организма значительно повышен по сравнению с контролем (181,3±2,3; 174,6±3,4 соответственно), у животных со средней степенью повышен до 231,4±2,2 (р 0,01), в группе особей с тяжелой формой проявления данного признака уровень IgA был самым высоким и составил 318,4±4,7. Уровень IgM также был выше контрольного во всех группах 186,2±2,9, 194,3±5,1, 205,6±4,2; 181,1±3,8 соответственно (р 0,01). Повышение уровня IgG не отмечалось ни в одной из групп животных.