Содержание к диссертации
Введение
Основная часть 10
1. Обзор литературы 10
1.1 Паразитоценозы желудочно-кишечного тракта собак 10
1.2 Характеристика парвовирусного энтерита собак, ассоциированного условно патогенными бактериями
1.2.1 Этиология смешанного парвовирусно-бактериального гастроэнтерита собак 17
1.2.2 Патогенез ассоциированного вирусно-бактериального гастроэнтерита собак 22
1.2.3 Клинико-эпизоотологические и патологоанатомические особенности парвовироза собак, ассоциированного условно патогенными бактериями 26
1.2.4 Лечение парвовирусного энтерита собак, осложненного условно патогенными бактериями 33
2. Собственные исследования 39
2.1. Выбор направлений исследований 39
2.2. Условия и место проведения исследований 41
2.3. Материалы и методы 42
2.4. Эпизоотология парвовироза у соба 49
2.5. Микробоценозы у собак, больных парвовирозом 62
2.6. Клинико-патогенетические особенности течения парвовирусного энтерита собак, осложненного ассоциациями условно патогенных бактерий 74
2.7. Лечение собак, больных парвовирусным энтеритом, осложненным ассоциациями условно-патогенных бактерий
2.7.1. Лечение собак, больных парвовирусным энтеритом, осложненным ассоциациями условно патогенных бактерий с легкой степенью течения болезни 100
2.7.2. Лечение собак, больных парвовирусным энтеритом, осложненным ассоциациями условно патогенных бактерий со средней степенью течения болезни 107
2.7.3. Лечение собак, больных парвовирусным энтеритом, осложненным ассоциациями условно патогенных бактерий с тяжелой степенью течения болезни 116
Заключение (Обсуждение результатов исследований) 125
Выводы 140
Практические предложения 143
Список использованной литературы 1
- Характеристика парвовирусного энтерита собак, ассоциированного условно патогенными бактериями
- Клинико-эпизоотологические и патологоанатомические особенности парвовироза собак, ассоциированного условно патогенными бактериями
- Микробоценозы у собак, больных парвовирозом
- Лечение собак, больных парвовирусным энтеритом, осложненным ассоциациями условно патогенных бактерий со средней степенью течения болезни
Введение к работе
Актуальность темы и степень ее разработанности. По данным многих исследователей, парвовирусный энтерит собак, несмотря на широкое применение эффективных вакцин, остается самой опасной вирусной инфекцией плотоядных и приводит к значительному экономическому убытку, который состоит из прямых потерь (вследствие высокой смертности, особенно ценных животных), снижением служебных и племенных качеств у больных и переболевших особей, расходов на проведение диагностических, лечебных и профилактических мероприятий(Ермаков А.М.,2006; Макарова Н.Н.,2000).
Исследования последних десятилетий существенно расширили представления об эпизоотологии и специфической профилактике парвовирусного энтерита как моноинфекции. Однако современный принцип изучения болезней животных заключается на принципах паразитоценозов, эволюционно-экологических аспектов (Апатенко В. М. и др., 2003) и полиморбидности (Макаров., 2012; Березина Е. С., 2002; Джупина С. И., 2001), в частности неизученными остаются микробиоценозы собак при парвовирусном энтерите.
При разработке темы исследования были использованы труды известных учёных, занимающихся вопросами этиологии, патогенеза и эпизоотологии и специфической профилактики парвовирусного энтерита собак: Афанасьев П.Е., , Ба-лобанова В.И., Кудряшов А.А., Борзенко Т.В., Галкина Т.С., Даниловский М.В., Дубков Ю.А., Пушкарева Л.П., Элисбарошвили Э.И., Ермаков А.М., , Ковалев Н.А., Макаров В.В., Медова Е. В., Авилов В. М., Пивоваренко Е. А. и др.
Большой вклад в изучение парвовирусного энтерита внесли Новак Д.Д., А.А. Сулимов, Н.А. Власов, Бажибина Е. Б., Грязнева Т.Н, Уласов В.И., Зубарева И.М.
Малоизученными остаются такие важные вопросы, как особенности эпизоотического процесса, патогенеза и лечения собак, больных парвовирусным энтеритом, осложнённом ассоциациями условно патогенных бактерий, что является актуальным направлением научных исследований.
Цель работы: изучить распространение, этиологию, эпизоотологические особенности, патогенез, симптоматику парвовирусного энтерита у собак, осложненного ассоциациями условно патогенных бактерий, и их лечение.
Для достижения цели перед нами были поставлены следующие задачи исследований:
провести изучение литературных источников по теме диссертации;
провести анализ эпизоотической ситуации по заболеваниям собак инфекционной природы в г. Луганске;
изучить бактериальный спектр возбудителей в паразитоценозах собак при парвовирусном энтерите и определить этиологическое значение условно патогенных бактерий в указанной патологии;
исследовать патогенез парвовирусного энтерита собак, осложненного ассоциациями условно патогенных бактерий;
- установить корреляцию между клинико-лабораторными показателями и
степенью тяжести болезни;
на основании полученных данных разработать алгоритм комплексной этио-тропной и патогенетической терапии с использованием антибиотикотерапии, иммуностимуляторов, инфузионной терапии, блокатора протеолитических ферментов, производного естественного гормона соматостатина, пробиотикотерапии;
разработать рекомендации по диагностике осложненного ассоциациями условно патогенных бактерий парвовирусного энтерита собак и их лечению.
Научная новизна. Впервые изучены паразитоценозы желудочно-кишечного тракта у больных парвовирусным энтеритом собак и его эпизоотологические особенности. Установили, что наиболее распространенными патогенами являются Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus epidermidis, Enterobacter aerogenes, Proteus vulgaris и Citrobacter freundii,
Впервые изучена эффективность левофлоксацина в отношении ассоциаций условно патогенных бактерий, осложняющих парвовирусный энтерит собак. Изучена динамика изменений видового состава и количественного соотношения микрофлоры желудочно-кишечного тракта у собак, больных парвовирусным энтеритом.
Впервые изучена локализация условно патогенных бактерий в организме собак с данной патологией. У животных развивается гепатопатия, нефропатия, имму-нодефицитное состояние и холецисто-панкреатит.
Впервые установлена высокая эффективность окрестатина в отношении устранения желудочно-кишечного кровотечения у собак, больных парвовирусным энтеритом, осложненным ассоциациями условно патогенных бактерий.
Впервые установлено наличие корреляционных связей между клинико-лабораторными показателями и степенью тяжести парвовирусного энтерита собак, осложненного ассоциациями условно патогенных бактерий.
Теоритическая и практическая значимость. Теоритически обоснованы и практически доказаны новые принципы диагностики и контроля эффективности лечения собак, больных парвовирусным энтеритом собак, осложненным ассоциациями условно патогенных бактерий, с использованием иммунологических, биохимических и гематологических методов исследования, с учетом степени тяжести болезни.
Проведено обоснование контроля эффективности лечебных мероприятий на основе применения комплекса клинико-лабораторных исследований.
Применение иммуномодулирующего препарата полиоксидония в комплексной терапии собак, больных парвовирусным энтеритом, осложненным условно патогенными бактериями, обеспечивает положительное влияние как на иммунологические, гематологические показатели, так и на сохранность животных.
По материалам исследований разработаны методические рекомендации «Рекомендации по диагностике и лечению парвовирусного энтерита собак, осложненного ассоциациями условно патогенных бактерий». Материалы диссертационной работы вошли в монографию «Паразитоценозы животных».
Теоретические положения и практические рекомендации, полученные в ходе выполнения диссертационной работы, внедрены в учебный процесс факультета ветеринарной медицины Луганского национального аграрного университета и клиническую практику лечебниц ветеринарной медицины гг. Луганск, Антрацит и Ро-веньки.
Методология и методы исследований. Работа выполнялась с 2011 по 2015 гг. на кафедре «Заразных болезней, патанатомии и судебной ветеринарии» Луганского НАУ. Исследования относительно изучения бактериальных паразитоценозов у собак при парвовирусном энтерите проводили на базе государственных и частных клиник ветеринарной медицины г. Луганска. При эпизоотологическом обсле-
довании изучали данные ветеринарной отчетности и распространение инфекционных болезней собак, в частности парвовирусного энтерита, г. Луганска в 2011–2015 гг. Кроме этого, анализировали зоогигиенические параметры содержания, кормления, эксплуатации животных.
Клинический осмотр подопытных животных осуществляли согласно общепринятых методик непосредственно в клиниках ветеринарной медицины. Бактериологические, микологические и паразитологические исследования, а также изучение биологических свойств изолированных культур микроорганизмов проводили в лаборатории факторных инфекций кафедры заразных болезней, патанатомии и судебной ветеринарии Луганского национального агарного университета.
Биохимические и гематологические исследования проводили в частной ветеринарной клинике ветеринарной медицины ООО «Маугли» г. Луганска, а иммунологические исследования на базе иммунологической лаборатории Луганской областной детской больницы
Личный вклад соискателя состоит в непосредственном участии на всех этапах проведения экспериментов. Соискатель с участием научного руководителя обосновала научное направление, определила программу исследований, самостоятельно провела анализ литературных источников, провела лабораторные опыты, выполнила статистическую обработку материалов, анализ полученных результатов и их интерпретацию, выводы и практические предложения.
Основные положения, выносимые на защиту:
эпизоотология парвовироза в г. Луганске;
локализация условно патогенных бактерий во внутренних органах собак, больных парвовирусным энтеритом, осложненным ассоциациями условно патогенных бактерий;
новые принципы диагностики и контроля эффективности лечения парво-вироза собак, осложнённого ассоциациями условно патогенных бактерий, с использованием иммунологических, биохимических и гематологических методов исследования, с учётом степени тяжести течения болезни.
Степень достоверности и апробация результатов исследований. В работе использованы современные методики сбора и статистической обработки исходного материала с применением t-тест Стьюдента для независимых выборок. При срав-
нении двух групп, цифровые показатели которых не соответствовали нормальному распределению признаков, использовали непараметрический U-критерий Манна-Уитни. При сравнении нескольких групп с ненормальным распределением исследуемых признаков использовали непараметрический критерий Крускала-Уоллиса. При сравнении нескольких групп с нормальным распределением исследуемых признаков использовали однофакторный дисперсионный анализ. Зависимость между двумя переменными проводили методами корреляционного анализа по Пирсону при нормальном типе распределении, по Спирмену – при ненормальном распределении.
Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на:
научных конференциях Луганского национального аграрного университета (2011-2015 гг.);
19-ой международной конференции: «Современные концепции научных исследований» (Россия, г. Москва, 30-31.10.2015г.);
16-ой международной научно-практической конференции «Научные перспективы 21 века. Достижения и перспективы нового столетия» (Россия, г. Новосибирск, 16-17.10.2015);
на заседаниях методических комиссий факультета ветеринарной медицины ЛНАУ (2011-2015гг.), заседаниях и отчетных сессиях ученого совета факультета ветеринарной медицины ЛНАУ (2011-2015гг.).
Внедрение. Результаты исследований в 2015-2016 годах, под авторским надзором с положительным эффектом, внедрены в условиях ветеринарной клиники «ФЛП Борбюгов К.С.» (г. Луганск), частного предприятия лечебницы – аптеки ветеринарной медицины «ФЛП Горожеев В.А.» (г. Антрацит Луганской области) и используются в учебном процессе при изучении болезней мелких животных студентами факультета ветеринарной медицины Луганского НАУ.
Пути реализации. Результаты исследований могут быть использованы при проведении экспертной оценки эпизоотической ситуации и научном обосновании, разработке и корректировке комплексных систем противоэпизоотических мероприятий при парвовирозах собак специалистами как Луганской области, так и других регионов, а также в учебно-педагогическом процессе при подготовке специалистов ветеринарной профессии.
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликованно 14 научных работ, в т.ч. 3 статьи – в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки России для публикации материалов докторских и кандидитских диссертаций (журналы «Ветеринарная патология» и «Ветеринария Кубани», 2 методические рекомендации и учебное пособие (в соавторстве).
Структура и объем диссертации. Работа оформлена в соответствии с ГОСТ Р 7.0.11 – 2011 и состоит из введения, основной части (обзора литературы, собственных исследований), заключения (обсуждения результатов), списка использованной литературы.
Характеристика парвовирусного энтерита собак, ассоциированного условно патогенными бактериями
Как сообщает ряд авторов [3, 104, 271], создание больших групп домашних животных привело к нарушению эволюционно «апробированных» экосистем и пропорций численности паразитов.
Когда животных содержат в группах, количественный состав которых приближен к эволюционно-сложенным условиям существования (частные заводчики, мелкие питомники и приюты для бездомных собак), много паразитов и, в частности, микрофлора организма животных часто выступает в форме симбиоза, который препятствует возникновению инфекционных и инвазионных заболеваний [57, 112].
Таким образом, питомники собак нужно рассматривать как биогеоценозы, которые искусственно созданы человеком. В них существуют особые взаимосвязи между животными, простейшими, разнообразной микрофлорой, которые в корне отличаются от подобных в естественных условиях. Паразитарные формы занимают особое место в составе биогеоценозов, где объединены различные систематические группы живых организмов [45, 89, 412].
Среди поголовья клинически здоровых собак постоянно циркулируют патогенные, сапрофитные, пробиотические, микроорганизмы, которые имеют сложные взаимоотношения, формируют так называемый микробиоценоз. Так, по данным А.А. Плиски [145], в кишечнике клинически здоровых собак большую часть всех изолированных микроорганизмов составили представители семейства Bifidobacterium, Lactobacterium, Enterobacteriacea и Micrococcaceae, при доминировании непатогенных E.coli и коагулазонегативных S.gallinarum, S.epidermid is, S.capitis и S.xylosu s.
В кишечнике клинически здоровых собак в небольших титрах определяют ассоциации условно патогенных и, даже, патогенных бактерий, в частности Staphylococcu s epid ermidis, S erratia marcescen s, Clostridium p erfringens, Clostridium septicum, грибов рода Candida, семейства Klebsiella, Enterobacter, Hafnia и Proteus [40]. Их наличие не влияет негативно на состояние здоровья собаки. По результатам исследований П.А. Руденко [174, 175], микробиоценозы кожи у клинически здоровых собак, в основном представлены сапрофитной микрофлорой: бактериями рода Micrococcus, S.saprophiticu s, S.ep idermid is, E.coli, B.subtilis, коринеформными бактериями, негемолитичными стрептококками. В единичных случаях, от клинически здоровых собак изолировали условно патогенную микрофлору: S.aureus, S.intermedius, гемолитические ешерихии, протеи, клебсиелы. Исследователем, также с поверхности кожи клинически здоровых собак изолированны грибы рода Alternaria, Mucor, Penicillum, Cladosporium, Candida, Trichoderma и Malasezia всегда в ассоциациях с бактериальной флорой.
Инфекционная патология собак представлена широким спектром инфекций бактериальной и вирусной природы, а так же микозами. Бактериальные инфекции собак представлены стафилококкозом [54, 56, 83], стрептококкозом [84, 106], псевдомонозом [112], лептоспирозом [123], колибактериозом [125], бордетелезом [53,155], а так же инфекциями, вызванными условно патогенными бактериями [112, 178].
По данным А.А. Плиски [145] кишечные инфекции у собак представлены преимущественно эшерихиозами, которые вызваны кишечными палочками 14 серотипов. Этой исследовательницей чаще от больных собак изолированно E.colli серотипов О8, О18 и О15, реже – О139, О126, О4, О141, О101, О131, О33, О111, О55, О2 и О117. Кишечные инфекции у собак протекали как моноинфекции, так и в виде ассоциаций. В составе ассоциаций выявили E.coli в сочетании с P.vulgaria, C.freundii и E.agglomerans.
По результатам исследований П.А. Руденко [175], установлено, что с поверхности кожи собак, больных дерматитом, выявляли устойчивый микробиоценоз, который состоял преимущественно из таких патогенных микроорганизмов: S.aureus, S.intermedius, E.coli, P.vulgaris, Klebsiella spp., Pseudomonas spp.
По данным В.Н Сюрина, Р.В. Белоусовой, Н.В. Фомина [204], вирозы собак представлены парвовирусной, реовирусной, коронавирусной, аденовирусной, герпесвирусной инфекциями, чумой, бешенством, болезнью Ауески, и папилломатозом.
По результатам исследований зарубежных ученых [246, 331], установлено, что у собак поражения желудочно-кишечного тракта вызывают клостридии в ассоциации с парвовирусом. При инфицированных ранах у собак формируются устойчивые микробиоценозы, которые состоят из патогенных стафилококков, стрептококков, и условно патогенных протеусов, псевдомонасов и эшерихий.[40].
У собак микоплазмы вызывают ряд заболеваний респираторного и мочеполового трактов [327]. Среди микоплазм в инфекционной патологии собак наибольшее значение имеют A.laidlawii, M.arginini, M. Bovigenitalium, M.cfnis, M.cynos, M.edwardii, M.feliminutum, M.felis, M.gateae, M. Maculosuv, M.molare, M.mucosicanis, M.opalescens, M.spumans, Mycoplasma sp. (HRC689), Mycoplasma sp. (VJC358) и Ureaplasma spp.
По данным ряда исследователей [232, 238, 253], у собак достаточно часто регистрируется ассоциированное течение чумы с парвовирозом, чумы с аденовирусным гепатитом и инфекционного гепатита с микоплазмозом. Впрочем, у собак аденовирусная инфекция может осложняться хламидиозом, а хламидийная инфекция, в свою очередь – микоплазмозом [129].
По результатам ряда авторов [2, 162, 259] установлено асоциированное течение у собак парвовирусного энтерита с аденовирозом, аденовироза с чумой и парвовироза с аденовирозом и чумой плотоядных. Установлено также ассоциированное течение у собак парвовирусного энтерита с аденовирусом и парагриппом [237]. В некоторых случаях у щенков происходит ассоциированное течение чумы плотоядных, парвовирусного энтерита, аденовироза и бордетеллеза, которое характеризуется высокой летальностью [129]. Тяжелым течением также характеризуется ассоциация парвовироза и жиардиоза у собак [269].
Клинико-эпизоотологические и патологоанатомические особенности парвовироза собак, ассоциированного условно патогенными бактериями
От павших вследствие парвовирусного энтерита собак отбирали кусочки внутренних органов (селезенка, сердце, легкие, печень, почки, мезентеральные и медиастинальные лимфоузлы), а от клинически больных собак – фекалии, которые подвергали бактериологическому и микологическому исследованию путем высевов в питательные среды (МПА, МПБ, глюкозо-сывороточный бульон и агар Сабуро). Парвовирусный энтерит подтвержден с помощью иммунохроматографических экспресс-тестов VetExpert Rapid CVP Ag (BioNote Inc., Корея).
После инкубации пробирок с посевами в термостате при 37–38 С в течение 24–72 часов из колоний различного типа делали пересев на чашки Петри с МПА, Эндо, кровяным МПА. Пробирки, в которых рост микроорганизмов отсутствовал, выдерживали в термостате при указанной температуре в течение 10 дней.
Критерием этиологической роли условно-патогенных бактерий при парвовирусном энтерите у собак были титры КОЕ/мл (колониеобразующих единиц). Этиологически значимыми патогенами считались те, для которых титры составляли 5 lg КОЕ/мл и больше. В наших исследованиях титры для условно-патогенных бактерий, выделенных в монокультуре, составляли 7-8 lg КОЕ/мл. При смешанной инфекции титры изолированных бактерий составляли 5-7 lg КОЕ/мл. Бактерии, изолированные в титрах менее 5 lg КОЕ/мл (4 lg и ниже) расценивались как контаминационные.
Всего из клиник ветеринарной медицины г. Луганска нами для бактериологических исследований были отобраны кусочки внутренних органов от 31 собаки, погибшей вследствие парвовирусного энтерита, и 36 проб фекалий больных животных. Эймериоз, цистоизоспороз, а также кишечные гельминтозы исключали при помощи исследования фекалий по методу Дарлинга [132] при слабом увеличении микроскопа (56).
После изучения культурально-морфологических свойств отдельные типичные колонии высевали на МПА, МПБ и МППА в пробирках и инкубировали при температуре 37–38 С в течение 24 часов. Подвижность бактерий определяли по характеру роста на МППА. Полученные таким образом изоляты проверяли на чистоту бактериоскопически и подвергали дальнейшей идентификации.
Морфологию бактерий определяли в мазках, окрашенных по Грамму, Михину и Бури-Гинсу. Дальнейшую идентификацию проводили соответственно «Определителю бактерий Берджи» [126].
Все изолированные культуры высевали на среды Гисса с сахарозой, мальтозой, лактозой, манозой, манитом и дульцитом, кроме этого определяли каталазную активность [127]. Для этого бактериальную массу, снятую петлей с агаровой поверхности, суспендировали в капле 3 % перекиси водорода на предметном стекле .
У грамнегативных палочкоподобных бактерий при помощи систем индикаторных бумажных (г. Н. Новгород) дополнительно определяли ферментацию таких углеводов, как инозит и сорбит; наличие ферментов орнитиндекарбоксилазы, лизиндекарбоксилазы, фенилаланиндезаминазы и -галактозидазы; продукцию сероводорода, индола и ацетилметилкарбинола; утилизацию цитрата и малоната натрия. Для устранения подвижности у культур рода Proteus перед проведением исследований в бактериологические чашки с МПА добавляли 96 этанол, выдерживали 3–5 минут, а потом удаляли. Для идентификации бактерий рода Pseudomonas исследуемые культуры пересевали на среду Кинга, в пробирки с МПБ и выращивали в термостате при 42 С.
Определение серогрупп Е. coli проводили при помощи набора агглютинирующих О-коли-сывороток согласно наставлению по их использованию.
Грамположительные кокки проверяли на коагулазную и гемолитическую активность, а также проводили тест на способность расти при температуре 10 и 45 С, рН 9,6, в присутствии 6,5 % NaCl и 40,0 % желчи. Для дифференциации рода Staphylococcus от рода Micrococcus использовали тест на окисление-ферментацию глюкозы (среда Хью-Лейфсона).
Патогенные особенности выделенных изолятов бактерий изучали путем биологической пробы на белых мышах. Для этого каждым изолятом заражали трех белых мышей массою 14–16 г внутрибрюшинно в дозе 0,5 см3 суточной бульонной культуры. Культуры считали патогенными в случае гибели одной, или больше мышей в течение пяти суток после заражения. На заключительном этапе бактериологического исследования обращали внимание на совокупность и соотношение разных видов бактерий.
Для бактериологического исследования на дисбактериоз кишечника в стерильные пробирки со стерильным изотоническим раствором хлорида натрия в объеме 9,0 см3 от клинически здоровых и больных парвовирусным собак отбирали 1,0 г фекалий. Из первой пробирки, которая считалась за разведение 10-1, готовили дальнейшие десятикратные разведения до 10-10. Потом из каждой пробирки проводили высев 0,1 см3 полученной смеси в чашки Петри на поверхность плотных питательных сред (Эндо, МПА, Сабуро, Блаурока, МРС, Кинга, Ресселя, висмут сульфит агар, желточно-солевой агар).
Количество микроорганизмов в 1,0 см3 исходного материала (С) рассчитывали по формуле (2.1) и выражали в логарифмах с основанием 10: C = (N/V)xK, (2.1)
Чувствительность культур условно патогенных бактерий, изолированных от больных, парвовирусным энтеритом собак определяли в соответствии со стандартами Национального комитета по клиническим и лабораторным стандартам США (NCCLS). При тестировании использовали двойные серийные разведения на МПА с добавлением дрожжевого аутолизата крови химически чистых субстанций антибиотиков: бензилпенициллина, ампициллина, цефазолина, цефтриаксона, гентамицина, амикацина, левомицетина, левофлоксацина и энрофлоксацина. Дрожжевой аутолизат крови готовили по методике А. А. Руденко.
Готовили двукратные разведения из основных растворов препаратов (2 мг/см3), после чего к 1 части каждого разведения добавляли 9 частей питательного агара, расплавленного и охлажденного до 45 С. Смесь хорошо перемешивали в пробирке и выливали в чашку Петри. Агаровую поверхность чашек, каждая из которых содержала определенную концентрацию антибиотика, делили на 20 секторов. На агаровую поверхность каждого сектора петлею засевали суточной бульонной культурой исследуемой бактериальной культуры. Инокулированные чашки инкубировали в атмосферных условиях при температуре 37,0 С. Минимальную ингибирующую концентрацию антимикробного средства (MIC) определяли по задержке роста бактерий в сравнении с контролем на чашке, которая содержала наименьшее количество данного препарата. Для сравнения эффективности антибактериальных средств проводили расчет MIC50 и MIC90 при помощи пробит-анализа [146, 165]. Результаты определения чувствительности условно патогенных бактерий к антимикробным препаратам оценивали по рекомендациям NCCLS (2002) [362].
Микробоценозы у собак, больных парвовирозом
Исследованием чувствительности 17-ти эпизоотических культур M.morganii, изолированных от больных парвовирозом собак, установлено, что наибольшей. активностью обладали левофлоксацин, энрофлоксацин и амикацин. Так, М1С50, М1С90 и диапазон минимальных подавляющих рост M.morganii концентраций левофлоксацина составлял 0,1; 0,8 и 3,12 -12,5 мкг/см3, енрофлоксацину - 0,7; 4,4 и 3,12-12,5 мкг/см3, амикацина - 2,1; 10,5 и 3,12-25,0 мкг/см3 соответственно.
Исследованием чувствительности 12-ти эпизоотических культур E.aerogenes, изолированных от больных парвовирозом собак, установлено, что наибольшей активностью обладали левомицетин, левофлоксацин и амикацин. Так, М1С50, М1С90 и диапазон минимальных подавляющих рост E.aerogenes концентраций левомицетина составлял 0,2; 3,3 и 6,25 -25,0 мкг/см3, левофлоксацина - 0,3; 1,6 и 1,56-12,5 мкг/см3, амикацина - 0,6; 7,9 и 3,12-25,0 мкг/см3соответственно.
Исследованием чувствительности 7-ми эпизоотических культур Е. cloacae, изолированных от больных парвовирозом собак, установлено, что наибольшей активностью обладали левофлоксацин, амикацин и гентамицин. Так, М/С50, М1Сдо и диапазон минимальных подавляющих рост Е. cloacae концентраций левофлоксацина составлял 0,3; 2,4 и 1,56-12,5 мкг/см3, амикацина - 0,9; 3,7 и 3,12-12,5 мкг/см3, гентамицин - 1,3; 9,7 и 6,25-50,0 мкг/см3 соответственно.
Исследованием чувствительности 7-ми эпизоотических культур К.pneumoniae, изолированных от больных парвовирозом собак, установлено, что наибольшей активностью обладали левофлоксацин, гентамицин и энрофлоксацин. Так, М/С50, М1С90 и диапазон минимальных подавляющих рост K.pneumoniae концентраций левофлоксацина составлял 1,3; 9,6 и 6,25-25,0 мкг/см3, гентамицин - 1,6; 17,6 и 6,25-50,0 мкг/см3, энрофлоксацина - 2,5; 10,3 и 3,12-25,0 мкг/см3, соответственно. Исследованием чувствительности 9-ти эпизоотических культур С. freundii, изолированных от больных парвовирозом собак, установлено, что наибольшей активностью обладали левофлоксацин, энрофлоксацин и цефазолин. Так, М/С50, М1Сдо и диапазон минимальных подавляющих рост С. Freundii концентраций левофлоксацина составлял 0,1; 0,7 и 1,56-3,12 мкг/см3, энрофлоксацина - 0,3; 2,9 и 1,56-3,12 мкг/см3, цефазолина - 0,8; 17,6 и 3,12-25,0 мкг/см3 соответственно.
Исследованием чувствительности 7-ми эпизоотических культур С. koseri, изолированных от больных парвовирозом собак, установлено, что наибольшей активностью обладали гентамицин, энрофлоксацин и левофлоксацин. Так, М1С50, М1С90 и диапазон минимальных подавляющих рост С. koseri концентраций гентамицина составлял 2,4; 32,4 и 3,12-25,0 мкг/см3, энрофлоксацина - 2,4; 32,4 и 3,12-25,0 мкг/см3, левофлоксацина - 4,7; 10,7 и 3,12-25,0 мкг/см3 соответственно.
Исследованием чувствительности 15-ти эпизоотических культур P.aeruginosa, изолированных от больных парвовирозом собак, установлено, что наибольшей активностью обладали левофлоксацин, гентамицин и амикацин. Так, М1С50, М1Сдо и диапазон минимальных подавляющих рост P.aeruginosa концентраций левофлоксацина составлял 0,2; 3,7 и 3,12-25,0 мкг/см3, гентамицин -1,1; 9,6 и 12,5-50,0 мкг/см3, амикацина - 2,7; 11,3 и 3,12-25,0 мкг/см3 соответственно.
При исследовании чувствительности 3-х эпизоотических культур Acalcoaceticus, изолированных от больных парвовирозом собак, не удалось рассчитать такие показатели, как MICS0, М1С90 из-за небольшого количества наблюдений. Диапазон минимальных подавляющих рост A.calcoaceticus концентраций бензилпенициллина составлял 25,0-100,0; ампициллина, цефазолина, гентамицин и энрофлоксацина - 12,5-50,0; цефтриаксона и левомицетина - 6,25-25,0; амикацина и левофлоксацина - 1,56-6,25 мкг/см3 соответственно.
В заключение следует отметить, что парвовироз у собак в 100,0 % случаев осложняется ассоциациями условно патогенных бактерий, которые значительно осложняют течение основного заболевания. Наиболее широким спектром антибактериального действия на ассоциации условно патогенных бактерий, осложняющих течение парвовироза у собак, оказался левофлоксацин. Полученные результаты исследований необходимо учитывать при диагностике и лечении больных животных, а также при разработке эффективных мер борьбы с парвовирозом собак.
Лечение собак, больных парвовирусным энтеритом, осложненным ассоциациями условно патогенных бактерий со средней степенью течения болезни
В ходе многолетних эпизоотологических экспериментов, мониторинговых и скрининговых исследований определили степень изученности затронутой проблемы, проанализировав и зареферировав 413 источников отечественной и специальной литературы, касающихся патологии домашних животных и организации противоэпизоотических мероприятий.
Подтвердили, что в современном мире домашние плотоядные являются постоянными и приоритетными компаньонами человека, как в бытовом, так и производственном уровнях общиния, выполняя функцию существенных помошников в охотоводстве, охране границ, имущества, в розыскной сфере деятельности.
По официальной статистике в каждой пятой семье в стране содержат собак, а широкое увлечение собаководством пораждает плотность популяции, появление безхозных животных, а совместный выгул собак способствует трансмиссии возбудителей инфекций, при их возникновении.
Наши суждения в ътом плане согласуются с сообщениями других исследователей [А.М. Ермаков, 2006; И.М. Зубарева [и др.], 1997; и др].
Сложилось мнение, а это подтверждено и нашими исследованиями, о том, что в патологии домашних собак доминируют ряд инфекционных болезней и в частности парвовирусный энтерит, как высококонтагиозное вирусное заболевание с выраженной монифестацией.
Проведенными исследованиями подтвердили, что на урбанизированных территориях (г. Луганск) за последние 5 – 6 лет заболеваемость сочленов популяции собак инфекционными болезнями значительно возрасла. За этот период диагностированно 1 779 инцидентов заболевания собак инфекционными болезнями вирусной этиологии (59,9 % от общего числа их суммарной инфекционной патологии). Это подтверждено и анализом материалов отчетности ветслужбы региона за анализируемый период. Установили, что в нозологическом профиле заразной патологии собак в регионе парвовирусный энтерит является доминирующий нозоформой (31,1 – 53,5 % суммарной заразной их патологии), с высоким уровнем инцидентности (11,2 ± 1,3 заболевших в расчете на 1 000 голов). Установленный нами показатель неблагополучия при этой инфекции имеет региональные особенности, но согласуется с сообщениями других исследователей. Подтвердили высокий уровень смертности собак от этой инфекции в регионе (m = 3,5 ± 0,25 в расчете на 1 000 голов) и летальности (m = 32,0 ± 2,52 %). Результаты исследований согласуются с сообщениями других исследователей и подтверждают еще недостаточный лечебно-реабилитационный эффект оказываемой ветеринарной помощи.
Изучая региональные эпизоотологические особенности этой патологии в популяции собак в регионе, установили годовую неравномерность эпизоотического проявления парвовирусного энтерита собак в городе, с выраженными ее сезоннымиэпизоотическими надбавками: в мае ежегодно до 21,1% от годового показателя инцидентов этой патологии в регионе; в ноябре – 18,4 %; в апреле – 13,5 %; при равномерном участии в эпизоотическом процессе особей обоего пола, но с выраженной возрастной доминантой. Болезнь чаще регистрируется среди 1,5 – 6 месячных щенков (66,4 %). Результаты исследований согласуются с сообщениями других исследователей, изучающих эту патологию собак в других регионах и странах, хотя в регионе результаты получены нами впервые.
Установили, что эпизоотическое проявление этой инфекции зависит не только от первичных, но и вторичных движущих сил ее эпизоотического процесса. Так, возрастные различия эпизоотического проявления этой инфекции обусловлены различием иммунологического статуса у собак различных возрастных групп; так, монифестное ее проявление нам не удалось зарегистрировать у щенков до 45-ти дневного возраста за весь период мониторинговых исследований. Мы это объясняем наличием у них коллострального иммунитета к возбудителю этой инфекции. Наши данные подтверждаются скрининговыми исследованиями косвенными методами.
Установленные в ходе эпизоотологических экспериментов показатели неоднородности вовлечения в эпизоотическое проявление этой инфекции собак различных пород можно объяснить только низким уровнем резистентности организма собак «культурных» пород под воздействием селекционирующих факторов. Собаки шести пород оказались менее устойчивыми к возбудителю этой инфекции.
В эпизоотологических экспериментах установили, что манифестация болезненного процесса у собак при этой инфекции в регионе отмечается в молниеносной(2,3 %), сверхострой (10,8 %), острой (39,7 %), подострой (26,2 %) и абортивной формах, с высокой вариабельностью заболеваемости, смертности и летальности. Не зарегистрированно хронической формы этой патологии собак в регионе. Наши данные получены впервые.
На большом фактическом материале при проведении мониторинговых и скрининговых исследований подтвердили наростание ассоциативных форм заразной патологии вирусной-бактериальной этиологии. По фону заболевания и гибели собак по причине парвовирусного энтерита из специментов отбольных и павших собак выделенно 14 видов микроорганизмов, участвующих в развитии инфекционного процесса и болезненного состояния. Наши данные подтверждает сложившееся в медицине и ветеринарии мнение о полиэтиологичности (полипатогенности), ассоциативности конкретных нозоформ инфекционной патологии животных.
Результаты наших исследований подтверждают, что в 100 % случаев парвовирусная инфекция в популяции собак в регионе оказалась ассоциированной в различном сочетании со стафилококками, стрептококками, эшерихиями, псевдомонадами, энтерококками, клебсиелами, протеем, цитробактером, морганеллами. Результаты исследований в регионе получены впервые.
Установили, что в своем большинстве ассоциации микроорганизмов (94,2%) были двукомпанентными и только в 5,8 % - трехкомпонентными. Наиболее частым представителем ассоциативных групп являлись стафилококки и эшерихии.