Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы
1.1 Общая характеристика иммунной системы млекопитающих 10
1.2 Иммунодефициты животных 20
1.3 Современные аспекты иммунокоррекции организма 24
1.4 Костный мозг – как источник получения препаратов для иммунокоррекции организма животных 34
1.5 Заключение по литературному обзору 41
2 Собственные исследования
2.1 Объект, материалы и методы исследования 44
2.2 Результаты исследований
2.2.1 Цитологический состав костного мозга сельскохозяйственных и диких животных разного возраста 49
2.2.2 Иммунобиологический состав костного мозга сельскохозяйственных и диких животных разного возраста 56
2.2.3 Способ выделения белков из клеток костного мозга сельскохозяйственных и диких животных 62
2.2.4 Технология получения препарата из клеток костного мозга сибирской косули (ПКМК) 2.2.4.1 Определение стерильности ПКМК 68
2.2.4.2 Определение безвредности и оптимальной дозы ПКМК
2.2.5 Показатели интенсивности эпизоотического процесса в г. Благовещенске Амурской области 75
2.2.6 Влияние ПКМК на показатели клеточного иммунитета собак.. 83
2.2.7 Влияние ПКМК на показатели гуморального иммунитета собак 89
2.2.8 Изменение фагоцитарной активности нейтрофилов при
применении ПКМК у собак 94
2.2.9 Экономическая эффективность применения биологически активных препаратов из клеток костного мозга 99
2.2.9.1 Эффективность применения препаратов из клеток костного мозга различных видов животных на лабораторных животных 100
2.2.9.2 Эффективность применения ПКМК в период специфической профилактики собак 102
2.2.9.3 Экономический ущерб, причиняемый инфекционными болезнями собак в г. Благовещенске 104
2.2.9.4 Эффективность специфической вакцинопрофилактики с использованием ПКМК 106
2.2.9.5 Экономическая эффективность применения ПКМК
3 Обсуждение полученных результатов 110
4 Выводы и предложения 127
5 Список сокращений 129
6 Список литературы
- Иммунодефициты животных
- Цитологический состав костного мозга сельскохозяйственных и диких животных разного возраста
- Показатели интенсивности эпизоотического процесса в г. Благовещенске Амурской области
- Экономический ущерб, причиняемый инфекционными болезнями собак в г. Благовещенске
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Иммунная система является индикатором физиологического состояния организма, она чутко реагирует на изменения условий окружающей среды (В.А. Мищенко с соавт., 2006). Нарушение технологии кормления и содержания, неудовлетворительная экологическая ситуация, воздействие других стрессоров на животных сопровождаются угнетением иммунной системы, снижением естественной резистентности организма и эффективности специфической профилактики различных болезней (А.Г. Шахов и др., 2006). В связи с этим оправдан значительный интерес ученых к разработке и изучению различных средств, способных положительно влиять на функционирование иммунной системы (Г.М. Топурия с соавт., 2011). Одним из вариантов решения столь сложной проблемы является введение в схемы профилактических и противоэпизоотических обработок препаратов, обладающих выраженным иммуностимулирующим эффектом, активизирующих защитные силы организма (А.Г. Хмылов, с соавт., 2006). Большие перспективы имеют иммуномодуляторы эндогенного происхождения, а именно костно-мозговые препараты белковой природы, обладающие стимулирующим действием клеток костного мозга на антителобразование в активную фазу иммунного ответа (В.В. Зарицкая и др., 2008). Несмотря на значительное количество данных препаратов, многие вопросы, касающиеся лечения и профилактики иммунодефицитных состояний, остаются нерешенными. Высокая востребованность в препаратах иммунокоррекции дают основание считать актуальным исследования по разработке и изучению иммунокорректирующих препаратов.
Степень разработанности проблемы. В настоящее время учеными разрабатываются и изучаются различные средства и методы, положительно влияющие на иммунную систему организма животных (Н.М. Колычев, 2003; А.А. Аминова, 2006; М.Ю. Волков, 2006; С.Н. Магер, 2014). Они нашли успешное применение в схеме профилактических и противоэпизоотических мероприятий (Е.В. Крапивина, 2001; Г.М. Топурия 2003; Ю.Н. Федоров, 2013), с целью повышения общей резистентности и иммунного ответа на различные антигены (С.П. Фисенко и др., 2006; А.Г. Хмылов, с соавт., 2006). Изучены наиболее перспективные иммуномодуляторы эндогенного происхождения многих сельскохозяйственных, домашних и некоторых диких животных (Р.В. Петров, 2000; В.В. Зарицкая, 2006; И.П. Савченкова, 2011).
По данным литературы установлено, что препараты костно-мозгового происхождения превосходят другие иммуномодуляторы, однако способы разработки, методы изучения и применения иммуномодуляторов из костно-мозговых клеток диких животных изучены недостаточно. Таким образом, актуальность, теоретическая и практическая значимость обусловили выбор темы, определили цель, задачи и структуру работы.
Цель исследований: Изучить особенности влияния препаратов костно-мозгового происхождения на иммунореактивность животных.
Задачи исследований. Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:
-
Изучить в сравнении клеточный состав костного мозга трубчатых костей сельскохозяйственных и диких животных и выбрать модель для исследования.
-
Разработать способ получения клеточного косно-мозгового препарата белковой природы сельскохозяйственных и диких животных, определить его безвредность на лабораторных животных.
-
Изучить основные показатели интенсивности эпизоотического процесса по инфекционным заболеваниям собак в г. Благовещенске.
-
Изучить влияние препарата белковой природы из клеток костного мозга сибирской косули на иммунореактивность собак в период специфической профилактики и определить его экономическую эффективность.
-
Разработать рекомендации по применению белковых препаратов из клеток костного мозга и внедрить в сочетании с препаратами для специфической профилактики.
Научная новизна. Впервые в условиях Амурской области изучен цитологический состав костного мозга сибирской косули в сравнении с сельскохозяйственными животными. Разработан способ выделения белков из клеток костного мозга сельскохозяйственных и диких животных. Разработана технология изготовления биологически активного препарата белковой природы из клеток костного мозга, определены доза и способ его введения, доказана перспектива использования клеток костного мозга в разработке иммунокорректоров. Подтверждено, что белки клеток костного мозга могут быть в основе иммуномодулирующего препарата. Применение белкового препарата из клеток костного мозга сибирской косули (ПКМК) показало положительные изменения показателей клеточного и гуморального иммунитета животных. Введение в схему вакцинопрофилактики ПКМК уменьшало показатели интенсивности эпизоотического процесса и повысило эффективность специфической иммунопрофилактики против инфекционных болезней собак. Доказана эффективность применения костно-мозговых препаратов, которая показывает более высокие результаты применения ПКМК в сравнении с существующими аналогами из костного мозга диких животных и установлена экономическая эффективность его применения.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований представляют теоретическую и практическую ценность, так как усовершенствованный метод окраски биопрепаратов позволяет достоверно изучать клеточный состав костного мозга диких животных. Для получения стимуляторов антигенных популяций целесообразно брать
клеточные популяции сибирской косули или коров, содержащие наибольшее количество
иммунокомпетентных клеток. Разработанный препарат позволяет повысить
иммунореактивность организма животных. Эндогенные белки клеток костного мозга являются медиаторами и биостимуляторами клеточного и гуморального иммунитета.
Предложен производству способ выделения белков из клеток костного мозга (патент RU 2553 334, от 18 мая 2015г.).
Подготовлены рекомендации по применению белкового препарата из клеток костного мозга (рассмотрены, одобрены к внедрению и рекомендованы к изданию НТС Дальневосточного ГАУ, протокол №4 от 10 декабря 2015года).
Материалы исследований используются при чтении курса лекций по иммунологии и биотехнологии ФГБОУ ВО Дальневосточный ГАУ.
Методология и методы исследования. Методология исследований основана на анализе и синтезе информации по проблеме иммунодефицитов животных и их коррекции при помощи биологически активных препаратов, представленной в отечественных, зарубежных источниках литературы и полученной нами экспериментальным путем. Объектом для исследования послужил костный мозг трубчатых костей здоровых сельскохозяйственных и диких животных, лабораторные животные и собаки. Материалом для исследований послужили клетки костного мозга сибирской косули, которые использованы для изготовления биологически активного препарата. В работе использованы клинические, эпизоотологические, иммунобиологические и биохимические методы исследования.
Основные положения, вынесенные на защиту.
-
Клеточный состав костного мозга сельскохозяйственных и диких животных в сравнении.
-
Разработанный и оптимизированный метод получения препарата из клеток костного мозга для повышения иммунореактивности животных, его безвредность.
-
Влияние препарата белковой природы из клеток костного мозга на показатели естественной резистентности и иммунной реактивности организма собак в период вакцинации и его экономическая эффективность.
-
Основные показатели интенсивности эпизоотического процесса по инфекционным болезням собак в г. Благовещенске до и после внедрения ПКМК в схему специфической вакцинопрофилактики.
Степень достоверности и апробация результатов. Основные положения диссертации и результаты эксперимента доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции посвященной 60-летию ФГОУ ВПО Ижевская ГСХА, доктора с.-х. наук, профессора А.И. Любимова (г. Ижевск, ФГОУ ВПО Ижевская ГСХА, 2010); XII региональной
научно-практической конференции «Молодежь XXI века: шаг в будущее» (г. Благовещенск, НОУ ВПО МАП, 2011г.); международной научно-практической конференции (г. Саратов, ФГБОУ ВПО Саратовский ГАУ, 2013г.), научно-практической конференции «Проблемы зоотехнии, ветеринарии и биологии» (г. Благовещенск, ФГБОУ ВПО Дальневосточный ГАУ, 2013г., 2015г., 2016г.); международной научно-практической конференции «Проблемы развития современной науки и пути их решения» (г. Екатеринбург, 2015г.).
Публикации. Основные результаты научных исследований отражены в 11 печатных работах, в том числе в 3-х изданиях, рекомендованных ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 165 страницах компьютерного набора текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора использованной литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, заключения, списка литературы, списка иллюстративного материала и приложений. Работа включает 31 таблицу, 26 рисунков, 10 приложений. Список литературы включает 163 источника, из них 20 иностранных авторов.
Иммунодефициты животных
Нейтрофилы ведут свое происхождение из миелоидной клетки, получившейся при делении полипотентной стволовой клетки-предшественника. От миелоидной клетки также происходят все гранулоциты, эритроциты и тромбоциты. Это обстоятельство обуславливает особенности строения мембраны - обладание большей подвижностью, чем у лимфоцитов. Благодаря этому нейтрофилы, выйдя из красного костного мозга в кровь, могут легко проникать через стенку сосуда в ткань (G. Abbas, 2009; В.А. Лозовой в соавт., 1981; М.Д. Уиллард и др., 2004; Г.М. Крюковская и др., 2012).
Нейтрофил на стадии его формирования представляет собой клетку с ядром в форме колбаски. В его цитоплазме находится большое количество мелких гранул, содержащих различные ферменты и химические соединения. Первые необходимы для переваривания поглощенных чужеродных агентов. Вторые - для "сигнализации" другим клеткам иммунной системы и усиления воспаления. После выхода из красного костного мозга, ядро приобретает сегментарную конфигурацию (Ch.A. Janeway, 1994). Кроме того, на мембране находиться большое количество рецепторов, необходимых для "связи" с другими клетками. При обычных состояниях нейтрофилы выходят в кровь очень небольшим количестве. Специфические сигналы, включая интерлейкин-1 или компоненты белков системы комплемента, мобилизуют выход нейтрофилов из костного мозга в не активированном состоянии. Это происходит в очень большом количестве. Затем при встрече с антигеном клетки становятся активированными. При этом мембрана приобретает способность к большой подвижности (значит способной осуществлять фагоцитоз), a гранулы цитоплазмы с "сигнальными" веществами перемещаются ближе к внутренней поверхности мембраны (J. Levinson, 2008). Они становятся готовы в любую минуту выпустить эти вещества. Такой процесс может происходить как в крови, так и в тканях, куда способны проникнуть эти клетки за счет своей способности влиять на проницаемость сосудистой стенки (Г.Н. Драник, 2003).
Эозинофилы схожи по строению с нейтрофилами. Они также содержат многочисленные включения цитоплазмы, способны к движению в сторону раздражения (в данном случае к месту выделения специальных сигнальных молекул). Однако между ними существуют и значительные различия. Во-первых, эозинофилы отличаются большей продолжительностью жизни и способности к рециркуляции, то есть несколько раз бывать в одном и том же месте организма. При большинстве инфекций эти клетки не проявляют своих основных функций. Однако при паразитарных заболеваниях играют центральную роль в защите организма. Кроме того, повышение содержания данных клеток в крови наблюдается при гиперчувствительности организма. Так же для эозинофилов характерно содержание некоторых химических веществ, способствующих замедлению воспалительной реакции (В.Дж. Риган, 2000).
Базофилы являются наименьшей по численности группой гранулоцитов - всего около 0-2% от их общего числа. Эти клетки отличаются набором химически активных веществ своих цитоплазматических гранул. По большей части эти вещества способствуют поддержанию условий для воспаления. В частности, они способствуют увеличению проницаемости сосудистой стенки капилляров, а значит, косвенно приводят к развитию отека ткани. (М.Р. Сапин, 1996; Н.В. Прозоркина, 2013).
Моноциты не содержат специальных цитоплазменных включений, но имеют хорошо развитую сеть лизосом - пищеварительных вакуолей. В каждой такой лизосоме содержится несколько видов ферментов. Это необходимо для тщательного переваривания. Причем эти ферменты способны расщеплять все виды биологического субстрата (А.Б. Полетаев, 2007). Моноциты, выйдя из красного костного мозга, циркулируют в крови несколько часов - от 5-10 часов до суток. При этом продолжительность их жизни не более 4-6 дней. Моноциты очень быстро покидают кровеносное русло и мигрируют в различные ткани. Здесь происходит их превращение в макрофаги. Причем для каждого вида тканей существует свой вид макрофага (Р.В. Петров, 1981). Например, в печени моноциты превращаются в Купферовские клетки печени, которые осуществляют захват чужеродных частиц из печеночных протоков воротной вены. В легких моноциты превращаются в альвеолярные макрофаги. Здесь кроме фагоцитирования частиц, они входят в состав аэрогематического барьер. Попав в соединительную ткань, моноциты становятся свободными гистиоцитами (А.Я. Кульберг, 1985). Таким образом, выполняя не только иммунную функцию, но и участвуя в синтезе основного вещества соединительной ткани. В лимфоузлах моноциты превращаются и становятся макрофагами лимфатических узлов. Если иммунокомпетентные клетки оседают на стенки полостей тела, они становятся макрофагами этих полостей. В брюшной полости это перитонеальный макрофаг, меду листками плевры -плевральный. В случае попадания моноцитов в кости, они становятся основными клетками, которые осуществляют резорбцию костной ткани -остеокласты. Часть моноцитов остается в красном костном мозге, где они становятся макрофагами. Причем, они могут быть как свободными, так и фиксированными. Здесь их основная задача заключается в фагоцитировании не нужных клеток. В том, что моноциты могут превращаться в такое разнообразие макрофагов, играют большую роль ростковые факторы, выделяемые клетками тканей (Г.И. Назаренко, 2000; А. Райт с соавт., 2000; М.А. Медведева, 2009).
Цитологический состав костного мозга сельскохозяйственных и диких животных разного возраста
Исследование проводилось на базе кафедры «Ветеринарно-санитарная экспертиза, эпизоотология и микробиология» факультета ветеринарной медицины и зоотехнии Дальневосточного государственного аграрного университета (ФВМЗ, Дальневосточный ГАУ); ветеринарных клиник «ВЕТДОКТОР», «Центр здоровья животных», «Амурвет», Городской станции по борьбе с болезнями животных (ГСББЖ) г. Благовещенска Амурской области, ветеринарной клиники г. Белогорска Амурской области и ветеринарной клиники г. Хабаровска.
Объектом для исследования послужил костный мозг трубчатых костей, взятый от здоровых животных разных возрастных категорий, предварительно подвергнутый ветеринарно-санитарной экспертизе в ветеринарной лаборатории ГБУ АО «Благовещенская ГСББЖ».
Приготовление препарата из костного мозга трубчатых костей сельскохозяйственных и диких животных сопровождалось исследованием цитологического состава костного мозга, освоением и модернизацией технологии выделения препарата белковой природы из клеток костного мозга, изучением свойств приготовленного препарата, изучением его стерильности и безвредности на организм лабораторных и изучение влияния на показатели клеточного и гуморального иммунитета домашних животных в период специфической профилактики.
Материалом для исследований послужили клетки костного мозга с.-х. и диких животных (крупный рогатый скот 6, мелкий рогатый скот 6, лось 6, сибирская косуля 9 голов), взятые от здоровых животных разных возрастных категорий. Материал от животных распределили на группы по возрастному критерию. Возраст диких жвачных животных (сибирской косули, лося) определяли по методу оценки экстерьера животного и по состоянию зубов (А.В. Сенчик в соавт., 2004; В.И. Машкин, 2013). Возраст сельскохозяйственных животных определяли общепринятыми методами (Д.В. Степанов, 2012).
Для изучения цитологического состава, окрашивание мазков костного мозга сельскохозяйственных и диких животных проводили проводили методами Райт-Гимза, Gimsa-Kwik-Diff и модернизированным методом Паппенгейма. Каждый мазок исследовали по методу Аринкина Н.А. (Ю.Ю. Елисеев, 2007).
Биохимический состав костного мозга трубчатых костей определяли на биохимическом анализаторе АКБа - 01 - "БИОМ".
Способ выделения белков из костного мозга, предусматривал применение следующих методов: извлечение клеток костного мозга, их суспендирование, фильтрация, центрифугирование, гомогенизация, высаливание с помощью сульфата аммония, дополнительное осаждение 1% раствором трихлоруксусной кислоты, диализ, высушивание.
Для дальнейших исследований препарат фасовали в стерильные стеклянные ёмкости, калибровали по белку, закрывали и подвергали тиндализации при температуре 40-42С трижды по 20 минут, исследовали на стерильность путем посева на питательные среды. Препарат сохраняли до использования в холодильнике.
В качестве модели исследований опытным путем были определены клетки костного мозга сибирской косули. Изучение влияния препарата из клеток костного мозга сибирской косули (ПКМК) на организм проводилось на здоровых животных, подобранные по методу аналогов. Животные содержались в виварии ФВМЗ Дальневосточного ГАУ.
Безвредность препарата изучали на 81 беспородной белой мыши, самцы в одном возрасте (4-6 месяцев) и массой 17,9±0,4 г, которых распределили на группы: контрольные (27) и опытные (54), с учетом вводимых доз препарата. Сохранность животных, гематологические и биохимические показатели (15 параметров) в опытных и контрольных группах, после введения препарата, учитывались на 7, 14 и 21 дни. В опытных группах препарат вводили подкожно в разных дозах 0,01 мл, 0,02 мл и 0,03 мл раствора препарата на одно животное. В контрольной группе мышам вводился стерильный физиологический раствор в тех же дозах
При изучении эпизоотического процесса был проведен анализ показателей интенсивности – удельный вес инфекционных болезней собак, встречающихся в г. Благовещенске, а также их заболеваемость, летальность и смертность, согласно общепринятой методике (Джупина С.И., 1991).
Влияние ПКМК на показатели клеточного и гуморального иммунитета, в условиях эксперимента, изучали на 16 собаках, в возрасте от 2 до 6 месяцев, в период дегельминтизации (Каниквантел+) и вакцинации (Нобивак DHPPi). Животных распределили на группы в зависимости от дозы вводимого препарата, который вводили подкожно в дозах 0,05; 0,1 и 0,15 мл на 1 кг массы животного на 1, 14 и 42 дни с вакциной в соответствии с наставлением по применению. На 7, 21, 35, 49 дни оценивали влияние препарата на показатели клеточного и гуморального иммунитета этих животных. Контролем послужила группа собак в период вакцинации и ревакцинации (Нобивак DHPPi) без применения препарата из клеток костного мозга сибирской косули (таблица 2).
Кровь у мышей всех групп брали методом декапитации, которых предварительно выдержали в термостате при 40оС в течении 5-7 минут. У собак исследования проводили венозной крови. В качестве стабилизатора использовали гепарин (в соотношении 50 ЕД/мл).
В крови мышей и собак, получавших препарат из костного мозга сибирской косули, определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере Горяева, лейкограмму методом микроскопии сухих фиксированных и окрашенных мазков по методу Паппенгейма, биохимические показатели сыворотки крови лабораторных животных и собак определяли на биохимическом анализаторе АКБа - 01 - "БИОМ".
Фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали по методу Нишевой Е.С., Галустян А.Н. (2003). Поглотительную способность клеток оценивали по двум показателям: вычисляли фагоцитарный индекс (ФИ) и фагоцитарное число (ФЧ). Для оценки нативных препаратов крови использовали фазово-контрастную микроскопию. При подсчете 100 нейтрофилов определяли количество поглощенных частиц. Оценка фагоцитоза проводилась в соответсвии с фазами реакции – через 30 минут и 90 минут. Для исследования последней фазы фагоцитоза – переваривания – определяли индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ).
Показатели интенсивности эпизоотического процесса в г. Благовещенске Амурской области
Стерильность препарата испытывали путем посева 0,2 мл каждого образца в две пробирки, содержащие по 10 мл тиогликолевой среды. Посевы выдерживали в термостате при 37оС 5 суток. По истечении этого срока из одной пробирки с тиогликолевой средой делали высевы по 0,5 мл на скошенный агар с 0,5% глюкозы; в пробирку с бульоном, содержащим 0,5 глюкозы; в пробирку со средой Сабуро, а также по 1 мл в две пробирки с тиогликолевой средой.
Посевы на среду Сабуро и одну из двух пробирок с тиогликолевой средой выдерживали 5 суток при температуре 20-22оС. Посевы на остальные среды, в том числе и во вторую пробирку первичного посева на тиогликолевую среду, выдерживали 5 суток при 37оС.
Результаты посевов учитывали на 10 сутки после первичного посева образцов на тиогликолевую среду.
В результате проведения проверки на стерильность разные представители специфических, в том числе сапрофитной флоры и плесеней, а так же посторонних бактерий выявлено не было. Препарат сохраняли до использования в холодильнике при температуре минус 4оС не более суток. 2.2.4.2 Определение безвредности и оптимальной дозы ПКМК
Препарат из клеток костного мозга сибирской косули после однократного подкожного введения в дозе 0,01 мл не вызывал у опытных мышей изменений в поведении и общем состоянии. В следующие 21 день наблюдения животные оставались живыми, адекватно реагировали на раздражители, охотно принимали корм и воду.
При введении препарата в дозе 0,02 мл в течении всего периода наблюдения животные также оставались живыми, общее состояние было удовлетворительным, отказа от корма и воды не наблюдалось.
После введения белым мышам препарата в дозе 0,03 мл у четверых животных, в течении двух-трех часов, наблюдали беспокойство, взъерошенность шерсти, у двух мышей наблюдали покраснение и припухлость в месте введения препарата, три мыши старались уединиться, осторожно передвигались по клетке. У остальных животных изменений в поведении и общем состоянии не наблюдали. Животные на протяжении всего опыта оставались живыми.
На 7, 14, 21 день опыта проведен анализ показателей клеточной защиты организма лабораторных животных. Анализируя таблицу 12 можно утверждать, что изменение морфологических показателей зависит от дозы вводимого белкового препарата.
Важно отметить, что при введении препарата из клеток костного мозга сибирской косули эритроциты и лейкоциты находятся в пределах физиологической нормы. В количественном составе эритроцитов существенных изменений по всем группам не выявлено, их количество увеличивается всего на 2-3%, при этом различия статистически не достоверны. Лейкоциты 1-й опытной группы практически не отличаются от показателей контрольной группы, их увеличение составило около 5%, показатели 3-й опытной группы изменились в сторону увеличения до 25%, тогда как увеличение показателей 2-й опытной группы составило до 36%, различия которых статистически достоверны.
Если количество лейкоцитов в крови мышей рассматривать в зависимости от дня введения ПКМК, то можно отметить, что максимальный эффект наблюдается на 14 день, а к 21 дню данная тенденция сохранена (рис. 12).
Влияние ПКМК в различных дозах на содержание лейкоцитов в крови белых мышей, 109/л Рассматривая показатели лейкограммы (таблица 13), отмечено, что при введении препарата из клеток костного мозга сибирской косули в дозе 0,01 мл на мышь практически все показатели остались без изменений, наблюдается только увеличение на 5,88% количества эозинофилов к 14 дню исследования. Остальные показатели варьировали в сторону увеличения или уменьшения всего на 1-2%, либо оставались на неизменном уровне.
Экономический ущерб, причиняемый инфекционными болезнями собак в г. Благовещенске
По данным авторов Радчука Н.А. (1991), Колычева Н.М. (2003), Азаева М.Ш. (2015) костный мозг – основной орган гемопоэза, в нем находится самоподдерживающаяся популяция стволовых клеток, из которых в дальнейшем образуются Т- и В-лимфоциты. У млекопитающих в костном мозге созревают В-линии лимфоцитов, несущие поверхностные иммуноглобулины. Костный мозг локализован во внутренней полости трубчатых костей и представляет собой тканевое объединение ретикулярной стромы, плотно упакованных гемопоэтических и лимфоидных клеток, а также разветвленной сети капилляров. Костный мозг является одновременно органом кроветворения и органом иммунной системы. Кроветворение поддерживается в течении всей жизни в костном мозге плоских костей – грудине, ребрах, крыльях подвздошной кости, костях черепа и в позвонках. Строма костного мозга поддерживает пролиферацию и дифференцировку эритроидного (лейкоциты) и мегакариоцитарного (тромбоциты) ростков кроветворения.
По результатам наших исследований установлено, что клетки эритроидного ряда имеют большое круглое ядро, занимающее большую часть клеток и окрашиваются в светлый красно-фиолетовый цвет, цитоплазма более светлая. Клетки предшественники гранулоцитов имеют вытянутое ядро и голубую цитоплазму. Клетки моноцитарного ряда имеют небольшое количество голубой цитоплазмы, ядро большое, бледно окрашенное. Клетки лимфоидного ряда с круглым или овальным ядром и незначительным количеством светло-голубой цитоплазмы.
У молодых особей преобладает кроветворный костный мозг, у средневозрастных особей соотношение жирового и кроветворного костного мозга выравнивается, а у старых особей преобладает жировая ткань, при этом дифференциация и подсчет клеток затрудняется.
По мнению Девришова Д.А. (2000), Воронина Е.С. (2002) иммунный ответ характеризуется накоплением в организме не только белков, специфически реагирующих с антигенами, но и иммунокомпетентных клеток. Клетки иммунной системы, на которые возложены ключевые функции по осуществлению приобретённого иммунитета, относятся к лимфоцитам, которые являются подтипом лейкоцитов. Большая часть лимфоцитов отвечает за специфический приобретённый иммунитет, так как могут распознавать возбудителей инфекции внутри или вне клеток, в тканях или в крови.
Дифференцировка лимфоцитов, называемая иммунопоэзом, происходит последовательно в центральных и периферических органах. В центральных органах иммунной системы осуществляется первичная, антигеннезависимая дифференцировка так называемых нулевых лимфоцитов с превращением их в Т-лимфоциты (в тимусе) и В-лимфоциты (в костном мозге млекопитающих) (Р.М. Хаитов, 2001).
Полученные нами результаты показали, что большее количество нейтрофильных элементов содержалось в костном мозге крупного рогатого скота – 47,8±0,69%, у коз меньше на 2,9 процентных пункта, а у сибирской косули на 4,9 процентных пункта (Р 0,01).У сибирской косули обнаружилось большее содержание в костном мозге молодых форм клеток, чем у домашней козы, у которой отмечается больше зрелых клеток, но меньше чем у коров. У сибирской косули промиелоцитов, миелоцитов и метамиелоцитов больше чем у коз на 0,2, 0,7 и 0,5 процентных пункта соответственно, но меньше чем у коров на 0,3, 1,6 и 1,7 процентных пункта соответственно. Содержание базофилов в большем количестве наблюдается у домашней козы и составляет 0,6±0,17%, у сибирской косули данный показатель меньше на 0,27 процентных пункта
Наибольшее содержание клеток эритроцитарного ростка отмечается у коз (46,8±0,47%) и у сибирской косули (46,6±0,98%). Количество эритробластов у сибирской косули составляют 0,7%, у домашней козы и коров данный показатель меньше на 0,3 процентных пункта.
Содержание моноцитов у сибирской косули меньше чем коров на 1 процентный пункт, но больше на 0,6 процентных пункта по сравнению с показателем домашней козы. Количество мегакариоцитов у всех животных наблюдаются в малом количестве, менее 0,4% и данные статистически ненадежны.
Количество ретикулярных клеток сибирской косули больше чем у коров и коз на 0,8 и 0,1 процентных пункта соответственно. Количество плазматических клеток преобладает у коров (0,8 ±0,11%), это больше чем у сибирской косули и коз на 0,3 и 0,4 процентных пункта соответственно. Лимфоциты у сибирской косули в составе костного мозга составляют 7,3 ±0,38%, у коз лимфоцитов меньше на 21,92%, а у коров больше на 60,33%, что может быть связано с видовыми особенностями организма животных.
В ответ на антигенную стимуляцию организм животных способен вырабатывать антитела, которые являются специфичными на каждый из бесчисленных антигенов. Антитела, или иммуноглобулины, - это группа структурно родственных белков с характерными физико-химическими и биологическими клетками и секретируются в кровь или тканевые жидкости. Основная часть иммуноглобулинов относится к гамма-глобулиновой фракции сыворотки (Даричева Н.Н., 2011).
Известно, что антитела связаны с глобулиновой фракцией сывороточных белков, в альбуминах их нет. Нормальные глобулины по электрофоретической подвижности делят на три фракции , , , но именно с иммунными -глобулинами и связаны антитела (В.Г. Скопичев, 2009). Альфа-, бета- и гамма- глобулины, в свою очередь, в порядке убывающей электрофоретической подвижности подразделяются на две и более фракции 1, 2, 1, 2, 1, 2. Иммуноглобулины различаются по структуре, антигенному составу и по выполняемым функциям (М.В. Земсков 1977).