Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Краткие сведения о возбудителе листериоза 8
1.2. Общая характеристика и идентификация листерий 9
1.3. Краткие сведения о листериозе животных и человека 13
1.4. Выявление листерий в пищевых продуктах 14
1.5 Отечественные и зарубежные питательные среды для выявления листерий 19
1.6. Технология производства питательных сред 23
1.7. Методы обнаружения возбудителя пищевого листериоза 26
1.8. Заключение по аналитическому разделу 28
2. Организация эксперимента. объекты и методы исследований 31
2.1 Организация и схема экспериментальных исследований 31
2.2. Объекты и методы исследований 33
3. Результаты и обсуждение эксгориментальных исследовании 37
3.1. Исследования по обоснованию компонентного состава комплекса питательных сред для диагностики Listeria monocytogenes в пищевых продуктах 37
3.2. Изучение эффективности разработанных питательных сред 48
3.3 Обоснование и разработка технологии и нормативной документации для производства комплекса питательных сред 53
3.3.1. Испытания комплекса разработанных питательных сред 53
2. Разработка технологического регламента производства питательных сред и нормативных документов 62
3. Исследование эффективности селективных питательных сред в процессе их длительного хранения 70
Разработка методологии микробиологических исследований при контроле мясных продуктов на наличие Listeria monocytogenes... 76
Мониторинг мяса и мясных продуктов на наличие листерии с использованием созданных питательных сред 77
Обсуждение полученных результатов 89
Выводы 94
Список использованной литературы
- Общая характеристика и идентификация листерий
- Выявление листерий в пищевых продуктах
- Изучение эффективности разработанных питательных сред
- Разработка технологического регламента производства питательных сред и нормативных документов
Введение к работе
Актуальность работы. Одной из основных задач отечественной мясной промышленности на современном этапе развития является обеспечение безопасности для потребителя выпускаемых мясных продуктов.
Известно, что в мясном сырье и продукции из него изготовленной, особенно при нарушении технологических режимов и санитарно-гигиенических условий производства, можно выявить опасные для- человека микроорганизмы - листерии.
В! связи с этим, в зоне Европейского экономического сотрудничества, а также других развитых странах (США, Канада, Япония), строго регламентированы требования по контролю патогенных листерии в мясе и мясных продуктах, потребление которых может вызвать заболевание людей. Исследование пищевых продуктов на наличие возбудителя листериоза является обязательным.
Об этой болезни животных известно давно. Однако в последние десятилетия она широко проявила себя как пищевая инфекция человека. Доказано, что вспышки листериоза у людей с летальностью до 35% связаны с употреблением в пишу различных продуктов питания (мясо, мясные продукты, молоко, мягкие сыры, яйца, рыба), контаминированньгх листериями.
Ранее известные в СССР (начало 70-х годов) специальные питательные среды предназначались в основном для выделения возбудителя листериоза от больных животных. До начала настоящей работы в России не было технологии производства современных эффективных питательных сред для выявления листерии в пищевых продуктах.
Вопросам изучения проблемы листериоза посвящены научные работы отечественных и зарубежных ученых: Бакулова И.А., Бутко М.П., Васильева Д.А., Ермолаевой С.А., Карликановой Н.Р., Костенко Ю.Г., Котлярова В.М., Кривоносовой О.В., Малахова Ю.А., Сахарова П.П., Сливко П.П., Тартаковского И.С., Янковского К.С., Casolari С, Curiale М S., Donelly C.W.,
Fabio A., Farber J.M., Gray M.L., Lewus С, Messi P., Seeliger H.P., Schlech W.F., и др.
Проблема пищевого листериоза приобретает также существенное социально-экономическое значение, по причине ущерба от изъятия контаминированной продукции, ограничения экспорта и импорта, остановки производства.
Принимая во внимание указанное выше, необходимо было обосновать и создать в Российской Федерации технологию современных питательных сред для выявления листерий.
В России до последнего времени практически не было достоверных сведений о выделении листерий из пищевых, в частности из мясных продуктов. Одной из причин этого было отсутствие эффективных отечественных питательных сред. Используемые в зарубежной практике аналоги весьма дорогостоящи и не могут широко использоваться в нашей стране.
В тоже время следует подчеркнуть, что в нашей стране, несмотря на актуальность и значимость проблемы листериоза, не проводились широкие мониторинговые исследования мясных продуктов на наличие листерий.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является создание технологии производства комплекса отечественных питательных сред, разработка нормативной методологической базы контрольных исследований и мониторинг мяса и мясопродуктов на наличие возбудителя листериоза.
Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих основных задач:
1. Обосновать и разработать комплекс отечественных питательных
сред для диагностики листерий в пищевых продуктах.
2. Разработать технологию производства питательных сред и
методологическую основу контроля мясных продуктов на наличие листерий.
3. Выполнить мониторинговые исследования мяса и мясопродуктов на наличие листерий с использованием созданных питательных сред и методологии контроля.
Научная новизна. Обоснованы технология производства и состав комплекта питательных сред, определена их эффективность и возможность использования при контроле безопасности мяса и мясопродуктов.
Впервые в России обоснована современная методология/ контроля мяса и мясных продуктов на наличие патогенных листерий.
Определена частота выявления^ листерий при мониторинговых исследованиях мяса и мясных продуктов в некоторых регионах России.
Практическая^ значимость. Разработаны питательные среды предобогащения, обогащения, для выделения и культивирования листерий (ТУ 9385-670-00419779-2001 «Питательный бульон для выделения и культивирования листерий» - ПБЛ и ТУ 9385-669-00419779-2001 «Питательный агар для выделения и культивирования листерий» - ПАЛ) с Наставлениями к их применению. Утверждены технологические регламенты производства Питательного бульона для выделения и культивирования листерий (ПБЛ) и Питательного агара для выделения^ и культивирования листерий (ПАЛ). Получен патент на изобретение №2223313 «Дифференциально-диагностическая среда для выявления листерий», приоритет от 26.12.2001г.
Результаты исследований вошли как составная часть ГОСТ Р 51921-2002 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes»,
Получены мониторинговые данные о частоте выявления возбудителя листериоза в мясе и мясопродуктах в некоторых регионах России.
Апробация результатов исследований. Материалы по теме диссертационной работе доложены на Научно практических конференциях: «Нейроинфекции: бешенство, губкообразная энцефалопатия крс, крейтцфельдта-якоба и др. прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески,
болезнь Тешена» (г. Покров 2001 г.); "Современные технологии в диагностике особо опасных инфекционных болезней" (г. Саратов, 2003 г.), на семинаре работников мясной промышленности «Ветеринарно-санитарный контроль в мясной отрасли» (г. Москва, 2003 г); «XV интернациональный симпозиум по проблеме листериоза» (Упсала, Швеция, 2004 г).
Публикации. По результатам исследований опубликовано 9 работ в журналах «Мясная индустрия», «Все о мясе», в сборниках научных трудов ВНИИМП им. В.М. Горбатова, в материалах отечественных конференций и зарубежного симпозиума.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, основной части, выводов, списка литературы и приложения. Материалы диссертации изложены на 114 страницах машинописного текста, содержат 21 таблицу и 6 рисунков, дополнены приложениями. Литературные источники включают 183 работы отечественных и зарубежных авторов.
Общая характеристика и идентификация листерий
Согласно определителю Берджи (по 7-е издание включительно ) род Listeria был помещен в семейство коринобактерий вместе с лактобациллами, родами Brochothrix и Erysipelothrix. В 9-е издании определителя Берджи относит род Listeria отнесен к 19-й группе микроорганизмов с неясным систематическим положением семейства Lactobacillacea (ч.16. грамположительные аспорогенные палочковидные бактерии) [163].
Микроорганизмы рода Listeria представляют собой грамположительные палочки с закругленными концами, иногда кокки, одиночные или в коротких цепочках, реже образуют длинные нити. В мазках из 18-24-часовых колоний обнаруживается» типичное палисадное расположение клеток с небольшим количеством V-образных форм. Листерий каталазоположительны, оксидазоотрицательны, образуют цитохромы. Оптимальная температура роста 30-37С, хотя листерия как психрофильный микроорганизм может расти при 20-25С и при +40С. Листерий не кислотоустойчивы, не образуют споры и капсулы, факультативные анаэробы, хемоорганотрофы [4].
Весьма информативен для идентификации Listeria spp. тест на подвижность клеток при 22-25С и неподвижность при 37С [25, 139, 178]. При 22С для подвижной культуры листерий характерен специфический рост в форме зонтика, при 37С жгутики, как правило, не образуются.
На МПБ наблюдается рост в виде мути, при встряхивании -образование «муаровых» волн. Колонии листерий на питательном агаре очень мелкие (0,5-1 мм в диаметре), прозрачные, как правило, круглой формы с нежной текстурой. Культуры листерий желатин не разжижают, внешний вид молока не изменяют, лакмусовое молоко обесцвечивают, но не свертывают. На этапе идентификации используют совокупность методов, позволяющих решать две задачи - окончательно подтвердить принадлежность выделенной культуры к L.spp., и установить принадлежность выделенной культуры L.spp. к патогенному для человека виду L.monocytogenes, используя тесты для дифференциации от непатогенных форм этого микроорганизма. К первой группе методов можно отнести окраску по Граму, выявление каталазной активности и определение подвижности культуры при 22С и 37С. За рубежом для изучения предполагаемых колоний Listeria spp. широко используют метод освещения по Генри [99, 166, 178]. В основе метода лежит способность колоний Listeria spp., выросших на прозрачном агаре к характерной голубовато-серой опалесценцшшри освещении дна чашки Петри снизу под углом 45С.
Для определения принадлежности выделенных культур рода Listeria к виду L.monocytogenes используют ряд тестов, включающих в себя ферментацию углеводов - маннита, ксилозы, рамнозы, маннозы; определение способности к (3-гемолизу, постановку КАМП-теста, определение лецитиназной активности на средах с активированным углем и без него. Также используют метод восстановления нитратов до нитритов, однако он малоэффективен. В качестве дополнительных методов при идентификации L.monocytogenes используют серологические, молекулярно-генетические методы; метод с листериозным бактериофагом, биопробу на мышах.
Важным методом идентификации листерий является определение ферментативных свойств в отношении углеводов - маннозы, рамнозы, маннита, ксилозы [107,141, 155, 178]. Данные тесты позволяют окончательно дифференцировать 3 вида листерий, обладающих гемолитическими свойствами. L. monocytogenes ферментирует рамнозу и не ферментирует ксилозу и маннит. Несмотря на исключительно важное значение теста ферментации углеводов для идентификации листерий, практически все тесты на углеводы, за исключением эскулина, не дают 100% достоверности при идентификации этого вида микроорганизма. Учитывая вышесказанное, для дальнейшей идентификации необходимо определение (3-гемолитических свойств выделенной культуры. Культуры L.monocytogenes и L.seeligeri образуют узкие зоны гемолиза, у L.ivanovi зона гемолиза значительно шире и более четкая. Культуры других видов листерий не образуют зоны гемолиза. Ряд авторов отмечают, что эритроциты барана и морской свинки обеспечивают лучшие результаты, чем эти же элементы крови лошади [66].
Для окончательной идентификации патогенных листерий необходимо использовать и другие методы. В частности определение лецитиназной активности, КАМП-тест и др. КАМП-тест (CAMP) позволяет более четко дифференцировать гемолитическую культуру Listeria monocytogenes и L.ivanovi [71, 162, 173]. Для постановки теста используют 3-гемолититческие штаммы двух других видов микроорганизмов-Staphylococcus aureus и Rhodococcus equi. Listeria monocytogenes и Listeria seeligery дают положительную КАМП-реакцию (расширение зоны гемолиза) с культурой Staphylococcus aureus и отрицательную (отсутствие изменения зоны гемолиза) с культурой Rhodococcus equi.
Выявление листерий в пищевых продуктах
Во многих странах листериоз считают профессиональным заболеванием фермеров, ветеринарных и медицинских врачей, работников пищевой промышленности [43, 68, 62].
Начиная с 1924 г. листериоз традиционно рассматривался, прежде всего, как ветеринарная проблема [2, 11, 156, 183]. У животных, прежде всего, L.monocytogenes вызывает аборты и менингоэнцефалиты. Значительная роль в распространении листериоза принадлежит грызунам. За период 1994-1998 гг. в Москве обследовано 925 грызунов, в основном домовых мышей и серых крыс, отловленных на плодоовощных базах. Выделено 7 культур L.monocytogenes [42]. В природных очагах болезни грызунам и клещам принадлежит существенная роль в качестве носителей и переносчиков возбудителя [19, 22, 23, 172, 183].
В настоящее время проблема листериоза актуальна для животноводства 82 стран, включая Россию.
Первые сообщения о листериозе человека связаны с эпидемией детского паралича в Австралии в 1915г. [79]. Наибольшему риску заболевания подвергаются лица с различными иммунодефицитами (беременные, новорожденные, лица пожилого и старческого возраста, ВИЧ-инфицированные, онкологические больные, пациенты с сахарным диабетом, почечной или сердечной недостаточностью, хронической алкогольной интоксикацией). В США листериоз у беременных диагностируется приблизительно в 27 % случаев от общего числа заболевших этой инфекцией и около 60 %- у лиц в возрасте 10-40 лет [116].
Хотя по числу выявляемых случаев листериоз уступает другим пищевым инфекциям, таким, например, как сальмонеллез и дизентерия, однако летальность при листериозе достигает по данным разных авторов от 20 [89] до 62 % [6]. Основными формами листериоза являются: железистая, нервная, септическая. Отдельно выделяют листериоз беременных и новорожденных. В зависимости от течения болезни различают острый, подострый и хронический листериоз [27, 43]. Наиболее часто встречается железистая форма, которая протекает в двух вариантах: ангиозно-железистом и глазо-железистом [27, 48]. Септическая форма встречается у новорожденных и лиц с выраженными иммунодефицитами [45,27].
В России в целом, и в частности, в Москве официальная регистрация листериоза начата с 1992 г. За период с 1992 -1995 гг. в России заболело листериозом 204 человека. Погибло за этот период 9 человек[40 ]. Ежегодно отмечается рост заболеваемости: если в 1996 году в Москве было зарегистрировано всего 12 случаев (10 из них у детей), то в 1999 году-23 случая (12 у детей). Следует учесть, что регистрируемая заболеваемость значительно меньше истинной [27].
Алиментарный путь передачи листериозной инфекции был впервые достоверно подтвержден только во время эпидемии в приморских провинциях Канады в марте-сентябре 1981 г. Эпидемия была связана с употреблением партии салата из рубленой капусты, изготовленной на одном из предприятий промышленным способом [149, 87].
Крупнейшей и наиболее известной является вспышка листериоза в Лос-Анджелесе (США), в 1985 г., связанная с употреблением в пищу сычужного мексиканского сыра, контаминированного L.monocytogenes, серотип 4Ь. Всего было выявлено 142 больных листериозом; из них 48 человек умерли [153].
Анализ возрастной структуры инфекционной патологии, связанной с дистериозом, в США за 1994-1998 гг. показал, что более 50 % спорадических случаев выявляют у детей в возрасте до одного года и около 30 % - у лиц старше 60i лет [72, 87, 89, 116, 132, 161]. В" Германии ежегодно регистрируется не более 100 случаев листериоза новорожденных [152]. В Великобритании ежегодно выявляют около 300 случаев листериоза - как среди новорожденных, так и в результате алиментарного пути заражения [130]. В Испании в период с 1993-1998 гг. зарегистрирован 131 случай выявления L.monocytogenes. В России ежегодно выявляют не более 100 спорадических случаев листериоза [88].
Изучение эффективности разработанных питательных сред
Для исследования эффективности разработанных жидких питательных сред (ПБЛ I и ПБЛ II) и плотных (ПАЛ) изучали следующие показатели: чувствительность, скорость роста, эффективность, дифференциацию и стабильность основных биологических свойств тест-культуры листерий. При исследовании показателя чувствительности плотной питательной среды ПАЛ для тест-культуры L. monocytogenes установлено, что максимальным разведением, при котором обеспечивается формирование визуально-видимых колоний является 10" КОЕ/мл. Показатели чувствительности плотной питательной среды ПАЛ для тест-культур микроорганизмов отражены в табл. 7. Не установлено формирование колоний тест-микроорганизмов S.choleraesuis и Е.соИ даже при их посеве в количестве 105 КОЕ/мл. Рост тест-культуры S.aureus был обнаружен на ПАЛ при посеве концентрации микроорганизмов і 102. Также были получены показатели скорости роста иссследуемых штаммов микроорганизмов. Так, появление видимых колоний листерий и стафилококков наблюдалось через 12 ч при испытании концентрации 105, 104и 103 и через 17 ч при концентрации 10". Показатель ингибиции для тест-штаммов S.choleraesuis и Е.соИ более 10 и достигает 105 КОЕ/мл.
Результаты исследования показателя эффективности жидкой питательной среды ПБЛ I по изменению показателя оптической плотности (Е) приведены в табл. 8. Было показано, что значение оптической плотности (Е) при максимальном разведении L.monocytogenes 105 и времени инкубирования в ПБЛ I 48 ч составило 0.132, в то время как для культуры S.aureus — 0.099. Из этого следует, что рост и развитие листерий в данных средах более интенсивный по сравнению со стафилококками. Значения оптической плотности для наименьшего разведения культур (105) S.choleraesuis и Е.соИ колебались от 0.060 до 0.065, что говорит об отсутствии роста этих микроорганизмов. В дальнейшем с каждым последующим разведением оптическая плотность исследуемых жидких питательных сред уменьшалась. Если рассматривать показатель Е в зависимости от времени термостатирования, то оптическая плотность повышается с увеличением времени и наибольшее значение наблюдается к 48 ч культивирования. Так, при уменьшении концентраций тест-культуры L. monocytogenes до 10 показатель оптической плотности в ПБЛ I через 48 ч инкубирования составил 0.113 в то время как при уменьшении количества S. aureus до этой же концентрации он был значительно ниже - 0.084.
В табл.9 представлены результаты показателей эффективности по показателю оптической плотности для жидкой питательной среды ПБЛ П. Из представленных результатов следует, что значение оптической плотности (Е) максимального разведения микробной взвеси тест-культуры L. monocytogenes 105 и времени инкубирования 48 ч составило 0.132, тогдагкак для культуры S. aureus это число равнялось 0.091. Значения оптической плотности при наибольшей концентрации тест-культур (105) S.choleraesuis и E.coli через 48 ч инкубирования остались на прежнем уровне и колебались в пределах 0.055 - 0.062. Это указывает на отсутствие роста данных микроорганизмов, т.е. разработанные среды являются неблагоприятными для их роста.
В дальнейшем с каждым последующим разведением оптическая плотность исследуемого ПБЛ II уменьшалась: при изменении концентраций листерий до 10" этот показатель в ПБЛ I через 48 ч инкубирования равнялся 0.113, в то время как при уменьшении количества стафилококков до этой же концентрации составил 0.072. Следует отметить, что при испытании любых концентраций тест-культур S.choleraesuis и E.coli, с использованием разработанных жидких (ПБЛ I, ПБЛ II) питательных сред наблюдается отсутствие их роста.
Наиболее выраженным показателем дифференциации обладала плотная среда ПАЛ, выразившимся в способности L.monocytogenes образовывать черное окрашивание среды вследствие ферментации микроорганизмами эскулина до эскулетина и последующей его реакции с ионами железа Fe3+. S. aureus образовывал красно-коричневую зону, что является дифференцирующим признаком от листерий. Тест-культуры S. dublin и Е. coli не обладали способностью расти на этой среде.
При изучении стабильности биологических свойств тест-культуры L. monocytogenes на разработанных питательных средах ПБЛ I, ПБЛ II и ПАЛ не отмечено морфологических (форма и расположение клеток, подвижность, отсутствие спор и капсул) и культуральных изменений в характере роста тест-культуры. Характеристика колоний по величине, форме, цвету, консистенции, краю колоний и их структуре соответствовала описанию типичных культуральных свойств культуры L.monocytogenes.
Также не выявлено изменений биохимических свойств (ферментация углеводов, положительная реакция на каталазу, отсутствие реакции на индол и сероводород, не разжижение желатина и не свертывание молока) исследуемой тест-культуры.
Разработка технологического регламента производства питательных сред и нормативных документов
Получение селективной добавки (СД)
Входной контроль и подготовка сырья производства СД осуществляют в соответствии с ТУ и регламентов производства.
Для получения Д на аналитических весах поочередно взвешивают в следующей последовательности: полимиксина В сульфат, налидиксовая кислота, акрифлавин. Взвешенные компоненты засыпают поочередно в ступку и растирают до образования однородной массы.
Отбирают пробу в количестве не менее 0,3 г. Затем СД выгружают в чистую полиэтиленовую банку с завинчивающейся крышкой, наклеивают этикетку в соответствии с приложением и передают на склад промежуточного хранения на период паспортизации.
Получение готовой среды (ПБЛ или ПАЛ).
Отобранные пробы основы и СД передают в контрольную лабораторию для проведения физико-химического контроля питательной среды на соответствие требованиям ТУ 9385-669-00419779-2001 и ТУ 9385-670-00419779-2001.
После проведенного контроля при соответствии препарата требования ТУ по физико-химическим и биологическим показателям ЦЗЛ заполняет и передает в ОБТК «Заключение лаборатории о качестве препарата».
ОБТК контролирует препарат по всем показателям и на каждую серию, соответствующую требованиям ТУ и ЭПР (Эксперементально-производственного регламента), дает разрешение на фасовку, присваивает контрльный номер серии и оформляет паспорт. Контроль производства. 67На всех стадиях производства препарата производится жесткий контроль качества полуфабрикатов и конечного продукта в двух контрольных лабораториях: производственной -ЦЗЛ и лаборатории ОБТК.
Отходы производства, технологические и вентиляционные выбросы в атмосферу, и использование и обезвреживание.
В процессе производства питательных сред и селективных добавок, выбросов В атмосферу не происходит, так как весь технологический цикл получения продукта проводят в герметически закрытом смесителе (СМ-4). Пылевыделение при загрузке и разгрузке локализуется в районе местной вытяжной вентиляции; процесс взвешивания и фасовки проводят в вытяжном шкафу (Ф-7) с фильтром тонкой очистки воздуха (общеобменная приточная и вытяжная!вентиляция оснащена фильтрами типа «Нарра»).
Производство питательных сред является практически безопасным для здоровьяфаботающих при соблюдении мер техники безопасности.
Питательная среда не обладает канцерогенным действием, не вызывает повышенной чувствительности организма, не усиливает рост тканей, не происходит санитарно-опасных загрязнений окружающей среды, кумулятивные свойства отсутствуют. Основные физико-химические показатели жидкой питательной среды ПБЛ. Основа питательной среды - мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета. СД - неоднородный порошок белого и красного цвета.
Растворимость, прозрачность и цветность. Основа после суспендирования в воде, нагревания, кипячения в течение 1-2 мин полностью растворяется и после охлаждения имеет вид прозрачного раствора светло-коричневого цвета. рН 6,8-7,2. Массовая доля влаги, %. не более 7,0. Массовая доля аминного азота, мг в 100 мл раствора, в пределах. 270,0-310,0. Массовая доля натрия хлорида, в пределах, % - (16,0-20,0). Селективная добавка после суспендирования в 5 мл физиологического раствора полностью растворяется при перемешивании в течение 1 мин и имеет вид прозрачного раствора.
Показатели чувствительности и скорости роста. Среды ПБЛI и ПБЛ II обеспечивают визуально обнаруживаемый рост тест-штамма L.monocytogenes 766 не позднее 48 ч инкубации-при температуре 30С при досеве 2,25 мл микробной взвеси из разведения 10" (около 250 м.к.) в 225 мл каждой среды соответственно-в виде помутнения среды, при встряхивании которой наблюдаются муаровые волны.
Показатель ингибщии. Питательная среда полностью подавляет рост тест-штаммов Е. coli 3912/41 (055:К59), S. choleraesuis АТСС 13312 и Р. vulgaris НХ 19 222 при посеве по 2,25 мл микробной взвеси из разведения 10"3 в течение 48 ч при температуре 30С. При высеве на МПБ визуально наблюдается рост тест-штаммов в виде помутнения среды. Среды ПБЛ I и ПБЛ II должны оставаться прозрачными.
Основные физико-химические показатели плотной питательной среды ПАЛ. Основа питательной среды - мелкодисперсный гигроскопичный порошок светло-желтого цвета. СД - неоднородный порошок белого и красного цвета.
Растворимость, прозрачность и цветность. Основа после суспендирования в воде, нагревания, кипячения в течение 3 мин полностью растворяется и после охлаждения имеет вид прозрачного студня коричневого цвета. рН 7,0-7,4. Массовая доля влаги, %. Не более 7,0. Массовая доля аминного азота, мг в 100 мл раствора, в пределах. (160,0-200,0). Массовая доля натрия хлорида, в пределах, % (32,0-38,0). Прочность студня основы среды, г. (450-550). СД после суспендирования в 5 мл физиологического раствора полностью растворяется при перемешивании в течение 1 мин и имеет вид прозрачного раствора.
Показатели чувствительности и скорости роста. Среда ПАЛ обеспечивает на всех засеянных чашках Петри рост тест-штамма L.monocytogenes 166 не позднее 48 ч инкубации при температуре 30С при посеве по ОД мл микробной взвеси из разведения 10"7 (около 10 м.к.) в виде мелких, круглых, серо-желтых колоний диаметром 0,2-1,0 мм с образованием вокруг колоний черной зоны на фоне зелено-желтой среды.
Показатель ингибиции. Питательная среда полностью подавляет рост тест-штаммов S. choleraesuis АТСЄ 13312, Е. coli 3912/41 (055:К59), Р. vulgaris НХ 19 222 при посеве по 0,1 мл микробной взвеси каждого тест-штамма из разведения 10"" (1000000 м.к.).
