Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современные подходы к лечению отравлений спиртами (обзор литературы) 19
1.1 Токсикологическая характеристика этилового спирта 19
1.2 Лечение острых тяжелых отравлений спиртами 25
1.3 Фармакологиче екая характеристика пептидных препаратов 30
1.3.1 Классификация пептидов 31
1.3.2 Пептидные препараты как нейропротекторы 33
1.3.3 Использование пептидных препаратов в лечении различных заболеваний 38
1.3.4 Возможности применения пептидных препаратов при
отравлении спиртами 42
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 45
2.1 Дизайн и объём экспериментальных исследований 45
2.2 Выбор и содержание лабораторных животных 48
2.3 Характеристика используемых токсикантов 49
2.4 Характеристика используемых фармакологических препаратов 50
2.5 Методы исследований 52
2.5.1 Оценка общего состояния крыс 52
2.5.2 Оценка неврологического статуса 53
2.5.3 Методы оценки состояния памяти и обучения 54
2.5.4 Методы оценки координации движений, двигательной
активности, физической выносливости 56
2.5.5 Методы оценки скорости принятия решения, способности к пространственной ориентации и исследовательской активности
2.5.6 Методы исследования биохимических показателей сыворотки крови 58
2.5.7 Определение концентрации восстановленного глутатиона в головном мозге и печени крыс 58
2.5.8 Определение концентрации малонового диальдегида в головном мозге и печени крыс 60
2.5.9 Методы морфологических исследований головного мозга и печени крыс 61
2.6 Методы статистической обработки результатов исследования 62
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 63
3.1 Влияние фармакологических препаратов пептидной и непептидной природы на течение и исход интоксикации этанолом в дозах, вызывающих тяжёлую степень отравления 63
3.1.1 Влияние фармакологических препаратов пептидной и непептидной природы на выживаемость, неврологический статус, температуру тела и частоту дыхательных движений крыс при
острой тяжелой интоксикации этанолом в дозе 1 ЛД5о 63
3.1.2 Влияние фармакологических препаратов пептидной природы на выживаемость, неврологический статус, температуру тела и частоту дыхательных движений крыс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом в дозе 1,5 ЛД5о 69
3.1.3 Влияние фармакологических препаратов пептидной природы на выживаемость и неврологический статус крыс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом в дозе 1,75 ЛД5о 78
3.1.4 Влияние фармакологических препаратов пептидной природы на среднюю продолжительность жизни и неврологический статус крыс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом в дозе 2 ЛД5о 81
3.1.5 Расчёт индекса защиты 82
3.2 Влияние моликсана, семакса и комбинации моликсана с емаксом на обучение, память, координацию движений, двигательную и поисковую активность, скорость принятия решения, способность к пространственной ориентации, состояние исследовательской активности крыс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом в дозе 1,5 ЛД5о 88
3.2.1 Обучение и память 88
3.2.2 Координация движений, двигательная активность и физическая выносливость 92
3.2.3 Скорость принятия решения, способность к пространственной ориентации, состояние исследовательской активности 95
3.3 Влияние комбинации моликсана с семаксом на биохимические показатели сыворотки крови, тканей головного мозга и печени крыс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом в дозе 1,5 ЛД5о 98
3.3.1 Показатели углеводного, белкового, липидного обмена, маркеров цитолиза в сыворотке крови 98
3.3.2 Содержание восстановленного глутатиона в тканях печени и головного мозга 105
3.3.3 Содержание малонового диальдегида в тканях печени и головного мозга 108
3.4 Влияние комбинации моликсана с семаксом на морфологическую структуру печени и головного мозга крыс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом в дозе 1,5 ЛД5о ПО
3.4.1 Морфологическая структура печени ПО
3.4.2 Морфологическая структура головного мозга 115
3.5 Влияние комбинации моликсана с семаксом на течение и исход острой крайне тяжёлой интоксикации метанолом, изопропанолом, н-бутанолом, этиленгликолем в дозе 1,5 ЛД5о 119
ГЛАВА 4. Роль пептидов как фармакологических средств нейро- и гепатопротекции при острых тяжёлых отравлениях этанолом (обсуждение полученных результатов) 124
Выводы 148
Практические рекомендации 151
Список сокращений 152
Список литературы 154
- Классификация пептидов
- Характеристика используемых фармакологических препаратов
- Влияние фармакологических препаратов пептидной и непептидной природы на выживаемость, неврологический статус, температуру тела и частоту дыхательных движений крыс при
- Показатели углеводного, белкового, липидного обмена, маркеров цитолиза в сыворотке крови
Введение к работе
Актуальность исследования. Отравления этанолом и его суррогатами часто встречаются как на территории Российской Федерации, так и в зарубежных странах [Лужников Е.А. и др., 2008; Zaridze D. et al, 2009]. В последнее десятилетие в России ежегодно регистрируется от 20 до 45 тыс. смертельных случаев от отравления алкоголем, часто связанных с групповыми и массовыми интоксикациями [Курсов СВ. и др., 2012]. Отравления этанолом и его суррогатами получили широкое распространение и на территории зарубежных стран: только за короткий период в 2011-2012 гг. жертвами массовых алкогольных отравлений стали 470 человек, из них с летальным исходом в Чехии - 27 человек, в Словакии - 17 человек, в Эквадоре - 21 человек [Гасанов И.И. и др., 2013]. В США от отравления алкоголем ежегодно умирает более 2200 человек [McCarrthy М., 2015; Каппу D. et al, 2015].
Основным действием спиртов на организм человека является нейротоксическое и гепатотоксическое действие. Поэтому фармакологическая коррекция этих нарушений может осуществляться препаратами, обладающими нейро- и гепатотропным эффектами.
В современной терапии неотложных состояний, связанных с употреблением алкоголя, широко используются средства с нейрометаболической активностью - ГАМК-ергические, серотонинергические, дофаминергические, холинергические модуляторы и модификаторы метаболизма спиртов [Бонитенко Е.Ю. и др., 2009; Шилов В.В. и др., 2012; Johnson В.А. 2004]. В лечении алкогольных интоксикаций также применяют ноотропы и антигипоксанты, которые оказывают нейропротекторное, а именно церебропротекторное действие, а также стимулируют неспецифическую резистентность организма [Бонитенко Ю.Ю., 2005; Ливанов ГА. и др., 2012; Vaglenova J. et al., 2001]. Однако препараты этих групп не могут в полной мере решить проблемы эффективного восстановления функций центральной нервной системы (ЦНС), нарушенных вследствие алкогольной интоксикации [Александров М.В., 2002; Walker В.М., 2010; Garcia-Moreno L. et al, 2012; Irwin С, 2013]. В связи с этим, поиск новых групп препаратов и расширение спектра их применения в области лечения острых тяжелых отравлений этанолом остается актуальной проблемой современной токсикологии и фармакологии.
Степень разработанности темы диссертационного исследования. Имеющиеся в настоящее время лекарственные средства, в том числе антидоты, не решают в полной мере проблемы оказания помощи при острых крайне тяжелых отравлениях этанолом [Маркизова Н.Ф. и др., 2004; Бонитенко Е.Ю., 2013]. Необходимость улучшения фармакологического обеспечения таких пострадавших по-прежнему не утратила своей актуальности, так как несвоевременное проведение лечебных мероприятий приводит к развитию ранних осложнений, отдаленных последствий и неблагоприятных исходов отравлений [Лужников Е.А. и др., 2014; Bae K.Y., 2012].
В основе существующего в настоящее время арсенала фармакологических
средств для терапии острых алкогольных интоксикаций основное место
занимают препараты, действующие на ведущие звенья патогенеза острых
отравлений спиртами [Шилов В.В. и др., 2001; Машанов А.В. и др., 2008;
Попова Е.А. и др., 2014]. Ряд отечественных и зарубежных исследователей
отмечают перспективность использования для этих целей препаратов пептидной
природы, обладающих нейропротекторным эффектом, снижающих
выраженность и продолжительность нейротоксических нарушений,
появлявшихся после острого периода алкогольной интоксикации,
характеризующихся высокой активностью при использовании малых доз
препаратов, отсутствием выраженных побочных явлений при применении
терапевтических доз, феноменов привыкания и отмены при относительно
длительном курсе лечения [Рохлина М.Л. и др., 2002; Шабанов П.Д., 2008;
Sewald N. et al, 2002; Petrov A., 2007]. В частности, B.A. Башариным (2011) было
установлено, что семакс, введенный интраназально за 3 ч до начала
интоксикации этанолом в дозе 0,8 ЛД5о, снижает летальность, ускоряет
восстановление неврологических и вегетативных показателей лабораторных
животных. Показано также, что орексин А и орексин Б снижают
продолжительность потери рефлексов в коматозном состоянии, вызванном
острым алкогольным отравлением, путем увеличения кортикальной активности
через активацию гистаминергической, норадренергической и
серотонинергической систем [Ла X. et al., 2012]. Установлено также, что пероральное введение пептида морского коллагена до и после острой интоксикации этанолом у самок крыс улучшало координацию движений животных и способствовало ускорению биотрансформации этанола [Liang J. et al, 2014]. В работах Д.С. Лисицкого с соавт. (2014) обоснована возможность использования пептидного препарата ноопепта, обладающего ноотропной и нейромодулирующей активностью, в качестве средства фармакологической коррекции нейротоксических поражений как последствий острого отравления этанолом.
В последние годы разработано значительное число новых пептидных препаратов, продемонстрировавших в эксперименте выраженную нейро- и гепатопротекторную активность, таких как кортаген, пинеалон, селанк, глутоксим, моликсан и др. [Шабанов П.Д. и др., 2009; Vilenskii D.A. et al, 2007]. Однако оценка их эффективности в качестве средств профилактики и терапии острых тяжелых отравлений спиртами до настоящего времени не осуществлена, что и послужило основанием для проведения настоящей работы.
Цель исследования: Экспериментальное обоснование применения пептидных препаратов при острых тяжелых отравлениях этиловым спиртом.
Задачи исследования:
1. Оценить влияние фармакологических препаратов пептидной и непептидной природы на течение и исход острой интоксикации этанолом в дозах, вызывающих тяжелую степень отравления у крыс, выбрать наиболее эффективные препараты и схемы их введения.
2. Изучить влияние моликсана, семакса и комбинации моликсана с
семаксом на поведенческие реакции, обучение, память крыс при острой крайне
тяжелой интоксикации этанолом.
-
Установить эффекты комбинации моликсана с семаксом в отношении биохимических показателей сыворотки крови, системы глутатиона и перекисного окисления липидов в тканях печени и головного мозга крыс при острой интоксикации, вызванной введением этанола в дозе 1,5 ЛД5о-
-
Выявить особенности морфологической структуры печени и головного мозга у крыс с острой крайне тяжелой интоксикацией этанолом в условиях лечебно-профилактического применения моликсана и семакса.
5. Оценить влияние комбинации моликсана с семаксом при лечебно-
профилактической схеме введения на течение и исход острой тяжёлой
интоксикации крыс, вызванной введением метанола, изопропанола, н-бутанола и
этиленгликоля в дозе 1,5 ЛД5о.
Научная новизна исследования. Проведена оценка эффективности пептидных препаратов селанка, семакса, бестима, глутоксима, моликсана, комбинации моликсана с семаксом в качестве средств фармакологической коррекции нейротоксических и гепатотоксических поражений как последствий острого отравления этанолом.
Установлено, что в условиях острой тяжелой интоксикации этанолом наибольшей эффективностью по показателям выживаемости, неврологического статуса, поддержанию температуры и частоты дыхательных движений у отравленных крыс среди изученных пептидных препаратов обладают моликсан, семакс и комбинация моликсана с семаксом при лечебно-профилактической схеме их применения. Расчетные значения индекса защиты моликсана составили 1,94, семакса - 1,94, а комбинации моликсана с семаксом - 2,0.
Показано, что острое пероральное воздействие этанола в дозе 1,5 ЛД5о вызывает нарушение функций ЦНС, которое проявляется нарушением памяти, обучения, поведения и двигательных функций отравленных крыс и регистрируется не менее 14 сут. Применение комбинации моликсана с семаксом позволяет улучшить показатели общей двигательной активности, пространственной ориентации и исследовательской активности, способствует восстановлению моторики (координации движений), нормализации процессов памяти и обучения.
Выявлено, что использование комбинации моликсана с семаксом позволяет нормализовать динамику биохимических показателей белкового, углеводного и жирового обменов, маркеров цитолиза в периферической крови отравленных этанолом крыс. Показано, что содержание восстановленного глутатиона в тканях печени и головного мозга у животных, подвергнутых воздействию 1,5 ЛД5о этанола, при лечебно-профилактическом применении этих пептидных препаратов было более высоким, а уровень малонового диальдегида более низким, чем у животных группы сравнения (отравленных этанолом, но не получавших фармакологических средств).
Продемонстрировано защитное действие комбинации моликсана с семаксом на морфологическую структуру печени и головного мозга крыс, подвергшихся острому тяжелому отравлению этанолом.
Установлено, что при остром крайне тяжелом отравлении метанолом, н-бутанолом и этиленгликолем изученные пептидные препараты не оказывали влияния на выживаемость крыс. В тоже время при отравлении изопропанолом в дозе 1,5 ЛД5о применение моликсана и семакса позволяло увеличить выживаемость отравленных животных.
Сформулированы и научно обоснованы возможные механизмы нейро- и гепатопротекторного действия комбинации моликсана с семаксом, связанные со способностью пептидных препаратов оказывать позитивное влияние на морфологическую структуру печени и головного мозга, на систему глутатиона и перекисного окисления липидов. Фармакологические эффекты изученных пептидных препаратов реализуются в повышении выживаемости отравленных крыс, уменьшении выраженности неврологических проявлений и снижении степени тяжести интоксикации, ускорении восстановления функций ЦНС после перенесенного острого тяжелого отравления этанолом.
Теоретическая и практическая значимость. В результате проведенного исследования научно обоснована целесообразность применения комбинации моликсана с семаксом в качестве средств лечения острых тяжелых отравлений этанолом. Показано, что применение моликсана (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг) с семаксом (интраназально в дозе 3 мг/кг) за 1 ч до и сразу после перорального введения этанола способствует увеличению выживаемости и средней продолжительности жизни отравленных животных, снижению выраженности нарушений функций ЦНС, системы глутатиона и перекисного окисления липидов, а также морфологической структуры тканей печени и головного мозга.
Практическая значимость работы заключается в экспериментальном обосновании возможности использования моликсана и семакса в качестве перспективных средств лечения острых крайне тяжелых отравлений этанолом. Проведена апробация различных схем применения пептидных препаратов для защиты организма от острого воздействия высоких доз этанола.
Полученные данные об эффективности применения пептидных препаратов при отравлении этанолом и возможных механизмах реализации нейро- и гепатопротекторного эффекта моликсана с семаксом позволяют рекомендовать дальнейшее экспериментальное изучение этих фармакологических средств при различных угрожающих жизни состояниях.
Методология и методы исследования. Экспериментальное исследование проводилось на базе кафедры военной токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинской академии имени СМ. Кирова.
Работа выполнена на 1256 белых беспородных крысах массой 180-220 г разводки питомника лабораторных животных «Рапполово» (пос. Рапполово Ленинградской обл.). На проведение исследования получено разрешение
локального независимого Этического комитета при Военно-медицинской академии им. СМ. Кирова (протокол № 161 от 21.04.2015 г.). В исследовании применялись:
- спирты: этанол в дозах 0,75 ЛД50, 1,0 ЛД50, 1,5 ЛД50, 1,75 ЛД50 и 2 ЛД50,
метанол, н-бутанол, изопропанол и этиленгликоль в дозе 1,5ЛД5о;
- фармакологические препараты: семакс, моликсан, гептрал, инозин,
глутоксим, селанк, бестим;
- четыре схемы применения препаратов: профилактическая - однократно
за 1 ч до введения этанола; лечебно-профилактическая - за 1 ч до и сразу после
введения этанола; раннее лечение - сразу после введения этанола, а затем один
раз в день в течение 2-х последующих сут; отсроченное лечение - через 30 мин
после введения этанола, а затем один раз в день в течение 2-х последующих сут.
Изучение эффективности пептидных препартов, применяемых при остром крайне тяжелом отравлении спиртами, проходило в несколько этапов. Эффективность применения фармакологических препаратов при остром крайне тяжелом отравлении этанолом оценивали по показателям 3-х сут выживаемости, средней продолжительности жизни (СПЖ), состоянию неврологического статуса, частоты дыхательных движений и температуры тела отравленных этанолом животных. На следующем этапе исследовали влияние моликсана и семакса при лечебно-профилактической схеме введения на поведенческие реакции, обучение и память крыс после воздействия этанола в дозе 1,5 ЛД5о, после чего оценивали эффективность их применения на основные биохимические показатели сыворотки крови, маркеры перекисного окисления липидов, системы глутатиона в тканях головного мозга и печени крыс после воздействия этанола в дозе 1,5 ЛД5о- Впоследствии исследовали влияние комбинации моликсана с семаксом на патоморфологические показатели тканей головного мозга и печени крыс после воздействия этанола в дозе 1,5 ЛД5о- На последнем этапе изучали влияние моликсана с семаксом при лечебно-профилактической схеме введения на выживаемость крыс после воздействия метанола, изопропанола, н-бутанола и этиленгликоля в дозах 1,5 ЛД5о-
Моделирование острого тяжелого алкогольного отравления проводили с использованием этанола, изопропанола, н-бутанола, метанола, этиленгликоля. В качестве токсикометрического параметра спирта определяли его среднесмертельную дозу, поскольку она представляет собой наиболее точную количественную характеристику токсичности вещества с минимальным значением 95% доверительного интервала и несомненным оцениваемым эффектом (гибель животного) [Куценко С. А., 2004]. ЛД5о вычисляли предварительно табличным экспресс-методом по В.Б. Прозоровскому (1994).
Для моделирования острой тяжелой алкогольной интоксикации использовали 40% этанол, который вводили внутрижелудочно при помощи зонда в дозе ЛД50 (8 г/кг), 1,5 ЛД50 (12 г/кг), 1,75 ЛД50 (14 г/кг) и в дозе 2 ЛД50 (16 г/кг). В связи с большим объемом вводимого раствора указанную дозу делили поровну на два введения через 15 мин [Курсов СВ., 2012]. Другие спирты также
вводили внутрижелудочно при помощи зонда в дозе 1,5 ЛД5о: метанол - 8,25 г/кг, изопропанол - 7,65 г/кг, бутанол-1 - 3 г/кг, этиленгликоль - 16,9 г/кг.
Фармакологическая коррекция проводилась с использованием препаратов: бестим (интраназально в дозе 3 мг/кг), гептрал (внутрибрюшинно в дозе 35 мг/кг), глутоксим (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг), инозин (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг), моликсан (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг), селанк 0,15% (интраназально в дозе 3 мг/кг), семакс 1% (интраназально в дозе 3 мг/кг).
У животных после воздействия токсиканта оценивали: выживаемость, среднюю продолжительность жизни, частоту дыхательных движений (ЧДД) и температуру тела. Выживаемость оценивали при 3-х суточном наблюдении и выражали ее в процентах (%) по отношению к общему числу животных в группе. Частоту дыхательных движений оценивали визуально по количеству дыханий за 1 мин. Для определения температуры тела использовали электронный инфракрасный медицинский термометр фирмы AND (модель DT - 635). Датчик термометра помещали в наружное слуховое отверстие на 2-3 с и снимали показатели с дисплея через 1, 2 и 3 ч после введения токсиканта.
Экспертную оценку неврологического статуса проводили путём определения степени угнетения функционирования ЦНС: 1) физиологическая норма, 2) оглушение, 3) сопор, 4) кома 1 (поверхностная), 5) кома 2 (глубокая), 6) кома 3 (терминальная) по методике. В целом подобная градация соответствует состояниям, выделяемым в клинике у человека [Бонитенко Е.Ю. и др., 2010].
Состояние процессов памяти и обучения исследовали с помощью методов условной реакции активного и пассивного избегания (УРАИ и УРПИ) [Крутиков Р.И., 1981; Буреш Я.И. и др., 1991]. Методику «вращающейся стержень» использовали для оценки равновесия и степени нарушения координации движений [Миронов А.Н., 2012; ХабриевР.У., 2013]. Двигательную активность изучали с помощью методики «открытое поле» [Буреш Я.И. и др., 1991]. Физическую выносливость оценивали с помощью методики «вертикальный стержень» [Meyer О.A. et al., 1979]. Скорость принятия решения, способность к пространственной ориентации и исследовательскую активность исследовали с помощью метода «крестообразный лабиринт» [Буреш Я.И. и др., 1991].
Оценку концентрации мочевины, общего белка, креатинина, глюкозы,
холестерина, а также активности щелочной фосфатазы,
аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и лактатдегидрогеназы в сыворотке крови крыс проводили на биохимическом анализаторе «BS-120» (Mindray, Китай) с помощью набора кассет реактивов «Ольвекс» (Россия).
Концентрацию восстановленного глутатиона в гомогенатах исследуемых тканей определяли с использованием 5,5-дитио-бис(-2-нитробензойной) кислоты (ДТНБ) по методике G.L. Ellman (1959) в модификации, заключавшейся в осаждении белка 20% раствором сульфосалициловой кислоты. Концентрацию малонового диальдегида (МДА) определяли по методу М. Uchiyama (1978).
Через 1 ч, 3 ч, 1 сут и 3 сут наблюдения выжившие животные были подвергнуты эвтаназии с помощью медицинского эфира и вскрытию. Было
проведено макроскопическое описание головного мозга и печени животных. Кроме того, проводили гистологическое исследование тканей, для чего после вскрытия головной мозг и печень крыс извлекали и фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, проводили через спирты и заливали в парафин по стандартной методике приготовления гистологических препаратов [Меркулов Г.А., 1969]. Производили ленточные срезы головного мозга и печени. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Изготовленные препараты изучали в светооптическом микроскопе Leica (Германия) при 200-, 400- и 600-кратном увеличении.
Полученные в ходе экспериментальных исследований данные были обработаны в программах «Excel for Windows», «Statistica 6,0» с расчетом среднего значения, ошибки средней и среднего квадратического отклонения. С целью выбора метода анализа взаимосвязи показателей (параметрические или непараметрические методы), исходные количественные характеристики были проверены на соответствие нормальному распределению с использованием тестов Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилка и графических методов (гистограмм). Оценку различий средних значений данных при распределениях, близких к нормальным, проводили параметрическим методом с использованием t-критерия Стьюдента. Оценку различий данных, полученных при анализе выборок малого объема, проводили непараметрическим методом с использованием U-критерия Манна-Уитни. Вероятность р<0,05 и выше считали достаточной для вывода о статистической значимости различий полученных данных. Средняя величина относительных показателей и ее ошибка определялись с помощью таблиц процентов и их ошибок по B.C. Генесу (1967). Достоверность различий средних значений показателей выживаемости погибших животных оценивали с использованием точного метода Фишера.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
-
Применение пептидных препаратов моликсан и семакс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом у крыс увеличивает выживаемость, снижает степень тяжести угнетения центральной нервной системы животных, способствует поддержанию ими температуры тела и частоты дыхания.
-
Фармакотерапия острых крайне тяжелых отравлений этанолом путем лечебно-профилактического применения комбинации моликсана с семаксом уменьшает выраженность биохимических и морфологических изменений печени и головного мозга, сокращает сроки восстановления животных после перенесенной интоксикации.
Степень достоверности и апробация результатов. Степень достоверности определяется достаточным количеством экспериментальных животных, использованных в исследовании, рандомизацией и формированием групп сравнения и контроля, адекватными, токсикологическими и фармакологическими моделями и методами исследования, длительными сроками наблюдения и корректными методами статистической обработки.
Результаты проведённых исследований были доложены и обсуждены на: III и IV Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с
международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего»
(Санкт-Петербург, 2013, 2014); IV съезде токсикологов России (Москва, 2013);
Международной научно-практической конференции по военной медицине
(Санкт-Петербург, 2013); Всероссийской научной конференции с
международным участием «Фармакологическая нейропротекция», посвященной
90-летию Отдела нейрофармакологии им. СВ. Аничкова Института
экспериментальной медицины СЗО РАМН (Санкт-Петербург, 2013);
Всероссийской научной конференции с международным участием «Инновации в
здоровье нации» (Санкт-Петербург, 2013); Всероссийской конференции с
международным участием, посвященной 90-летию со дня рождения академика
АМН СССР А.В. Вальдмана «Инновации в фармакологии: от теории к практике»
(Санкт-Петербург, 2014); IV съезде военных врачей медико-профилактического
профиля «Обеспечение санитарно-эпидемиологического благополучия
военнослужащих и населения в современных условиях»
(Санкт-Петербург, 2014).
Реализация результатов исследования. Полученные теоретические и практические результаты реализованы в учебном процессе кафедры военной токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинской академии имени СМ. Кирова.
В процессе выполнения работы оформлено и принято к использованию в Военно-медицинской академии 3 рационализаторских предложения (№ 13705/7 от 01.11.2013, №13706/7 от 01.11.2013, №13707/7 от 01.11.2013).
Связь темы диссертации с плановой тематикой научно-исследовательской работы учреждения. Исследование выполнялось в соответствии с плановой тематикой научно-исследовательских работ Военно-медицинской академии: тема НИР № VMA.02.04.02.1315/0056, шифр «Контръярус».
Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 19 научных работ, из них 5 статей в рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для опубликования основных научных результатов диссертаций на соискание ученых степеней доктора и кандидата наук.
Личный вклад автора. Автором проведён сбор и анализ научной литературы по теме диссертационного исследования, сформулированы цель и задачи исследований, определены объекты и объём работы, проведён поиск методов и их обоснование для решения поставленных задач. Проведён основной эксперимент по моделированию острого отравления этанолом, а также фармакологической коррекции этого состояния у животных (белых крыс). Выполнено формирование базы данных и осуществлена обработка полученных результатов, проведено их обобщение и обсуждение, выполнено оформление диссертации, подготовлены публикации по теме диссертации. Доля участия автора в получении и накоплении результатов - 100 %, в статистической обработке - 100 %.
Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 179 страницах машинописного текста, включает 29 таблиц, 7 рисунков. Состоит из введения, четырёх глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследования), выводов, практических рекомендаций и библиографического списка литературы, включающего 220 источников (142 - на русском языке и 78 - на иностранных языках).
Классификация пептидов
Проведена оценка эффективности пептидных препаратов селанка, семакса, бестима, глутоксима, моликсана, комбинации моликсана с семаксом в качестве средств фармакологической коррекции нейротоксических и гепато-токсических поражений как последствий острого отравления этанолом.
Установлено, что в условиях острой тяжелой интоксикации этанолом наибольшей эффективностью по показателям выживаемости, неврологического статуса, поддержанию температуры и частоты дыхательных движений у отравленных крыс среди изученных пептидных препаратов обладают мо-ликсан, семакс и комбинация моликсана с семаксом при лечебно-профилактической схеме их применения. Расчетные значения индекса защиты моликсана составили 1,94, семакса - 1,94, а комбинации моликсана с семаксом - 2,0.
Показано, что острое пероральное воздействие этанола в дозе 1,5 ЛД5о вызывает нарушение функций ЦНС, которое проявляется нарушением памяти, обучения, поведения и двигательных функций отравленных крыс и регистрируется не менее 14 сут. Применение комбинации моликсана с семаксом позволяет улучшить показатели общей двигательной активности, пространственной ориентации и исследовательской активности, способствует восстановлению моторики (координации движений), нормализации процессов памяти и обучения.
Выявлено, что использование комбинации моликсана с семаксом позволяет нормализовать динамику биохимических показателей белкового, углеводного и жирового обменов, маркеров цитолиза в периферической крови, отравленных этанолом крыс. Показано, что содержание восстановленного глутатиона в тканях печени и головного мозга у животных, подвергнутых воздействию 1,5 ЛД5о этанола, при лечебно-профилактическом применении этих пептидных препаратов было более высоким, а уровень малонового ди-альдегида более низким, чем у животных группы сравнения (отравленных этанолом, но не получавших фармакологических средств).
Продемонстрировано защитное действие комбинации моликсана с семаксом на морфологическую структуру печени и головного мозга крыс, подвергшихся острому тяжелому отравлению этанолом.
Установлено, что при остром крайне тяжелом отравлении метанолом, н-бутанолом и этиленгликолем изученные пептидные препараты не оказывали влияния на выживаемость крыс. В тоже время при отравлении изопропа-нолом в дозе 1,5 ЛД5о применение моликсана и семакса позволяло увеличить выживаемость отравленных животных.
Сформулированы и научно обоснованы возможные механизмы нейро-и гепатопротекторного действия комбинации моликсана с семаксом, связанные со способностью пептидных препаратов оказывать позитивное влияние на морфологическую структуру печени и головного мозга, на систему глутатиона и перекисного окисления липидов. Фармакологические эффекты изученных пептидных препаратов реализуются в повышении выживаемости отравленных крыс, уменьшении выраженности неврологических проявлений и снижении степени тяжести интоксикации, ускорении восстановления функций ЦНС после перенесенного острого тяжелого отравления этанолом. Теоретическая и практическая значимость
В результате проведенного исследования научно обоснована целесообразность применения комбинации моликсана с семаксом в качестве средств лечения острых тяжелых отравлений этанолом. Показано, что применение моликсана (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг) с семаксом (интраназально в дозе 3 мг/кг) за 1 ч до и сразу после перорального введения этанола способствует увеличению выживаемости и средней продолжительности жизни отравленных животных, снижению выраженности нарушений функций ЦНС, системы глутатиона и перекисного окисления липидов, а также морфологической структуры тканей печени и головного мозга.
Практическая значимость работы заключается в экспериментальном обосновании возможности использования моликсана и семакса в качестве перспективных средств лечения острых крайне тяжелых отравлений этанолом. Проведена апробация различных схем применения пептидных препаратов для защиты организма от острого воздействия высоких доз этанола.
Полученные данные об эффективности применения пептидных препаратов при отравлении этанолом и возможных механизмах реализации нейро-и гепатопротекторного эффекта моликсана с семаксом позволяют рекомендовать дальнейшее экспериментальное изучение этих фармакологических средств при различных угрожающих жизни состояниях.
Методология и методы исследования Экспериментальное исследование проводилось на базе кафедры военной токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова. Работа выполнена на 1256 белых беспородных крысах массой тела 180-220 г разводки питомника лабораторных животных «Рапполово» (пос. Pan 13 полово Ленинградской обл.). На проведение исследование получено разрешение локального независимого Этического комитета при Военно-медицинской академии им. С. М. Кирова (протокол № 161 от 21.04.2015 г.). В исследовании применялись: - спирты: этанол в дозах 0,75 ЛД50, 1 ЛД50, 1,5 ЛД50, 1,75 ЛД50 и 2 ЛД50, метанол, н-бутанол, изопропанол и этиленгликоль в дозе 1,5ЛД5о; - фармакологические препараты: семакс, моликсан, гептрал, инозин, глутоксим, селанк, бестим; - четыре схемы применения препаратов: профилактическая - однократно за 1 ч до введения этанола; лечебно-профилактическая - за 1 ч до и сразу после введения этанола; раннее лечение - сразу после введения этанола, а затем один раз в день в течение 2-х последующих сут; отсроченное лечение - через 30 мин после введения этанола, а затем один раз в день в течение 2-х последующих сут.
Изучение эффективности пептидных препартов, применяемых при остром крайне тяжелом отравлении спиртами проходило в несколько этапов.
Эффективность применения фармакологических препаратов при остром крайне тяжелом отравлении этанолом оценивали по показателям 3-х сут выживаемости, средней продолжительности жизни (СПЖ), состоянию неврологического статуса, частоты дыхательных движений и температуры тела отравленных этанолом животных.
На следующем этапе исследовали влияние фармакологических препартов пептидной природы при лечебно-профилактической схеме введения на поведенческие реакции, обучение и память крыс после воздействия этанола в дозе 1,5 ЛД5о, после чего изучали влияние применения пептидных препаратов на основные биохимические показатели сыворотки крови и маркеры пе-рекисного окисления липидов, системы глутатиона в тканях головного мозга и печени крыс после воздействия этанола в дозе 1,5 ЛД5о. Впоследствии исследовали влияние комбинации моликсана с семаксом на патоморфологические показатели тканей головного мозга и печени крыс после воздействия этанола в дозе 1,5 ЛД5о На последнем этапе исследования изучали влияние комбинации моликсана с семаксом при лечебно-профилактической схеме введения на выживаемость крыс после воздействия метанола, изопропанола, н-бутанола и эти-ленгликоля в дозах 1,5 ЛД5о.
Полученные в ходе экспериментальных исследований данные были обработаны в программах «Excel for Windows», «Statistica 6,0» с расчетом среднего значения, ошибки средней и среднего квадратического отклонения. С целью выбора метода анализа взаимосвязи показателей (параметрические или непараметрические методы), исходные количественные характеристики были проверены на соответствие нормальному распределению с использованием тестов Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилка и графических методов (гистограмм). Оценку различий средних значений данных при распределениях, близких к нормальным, проводили параметрическим методом с использованием t-критерия Стьюдента. Оценку различий данных, полученных при анализе выборок малого объема, проводили непараметрическим методом с использованием U-критерия Манна-Уитни [103]. Вероятность р 0,05 и выше считали достаточной для вывода о статистической значимости различий полученных данных. Средняя величина относительных показателей и ее ошибка определялись с помощью таблиц процентов и их ошибок по В. С. Ге-несу [26]. Достоверность различий средних значений показателей выживаемости погибших животных оценивали с использованием точного метода Фишера.
Характеристика используемых фармакологических препаратов
Полученные в ходе экспериментальных исследований данные подвергали стандартной статистической обработке в программах «Excel for Windows», «Statistica 6,0» с расчетом среднего значения и ошибки среднего. Выборка для каждой экспериментальной группы животных составила не менее 6 особей. Данные во всех таблицах представлены в виде X + тх.
С целью выбора метода анализа взаимосвязи показателей (параметрические или непараметрические методы) исходные количественные характеристики были проверены на соответствие нормальному распределению с использованием теста Колмогорова-Смирнова [103].
Оценку различий средних значений данных при распределениях, близких к нормальным, проводили параметрическим методом с использованием t-критерия Стьюдента [27]. Оценку различий данных, полученных при анализе выборок малого объема, проводили непараметрическим методом с использованием U-критерия Манна-Уитни [103]. Средняя величина относительных показателей и ее ошибка определялись с помощью таблиц процентов и их ошибок по В. С. Генесу [26]. Достоверность различий средних значений показателей выживаемости погибших животных оценивали с использованием точного метода Фишера [103]. Вероятность р 0,05 и выше считали достаточной для вывода о статистической значимости различий полученных данных.
Влияние фармакологических препаратов пептидной и непептидной природы на выживаемость, неврологический статус, температуру тела и частоту дыхательных движений крыс при острой тяжелой интоксикации этанолом в дозе 1 ЛД5о
В начальный период интоксикации этанолом тяжесть состояния больных обусловлена, главным образом, развитием токсического поражения головного мозга с нарушением регуляции систем жизнеобеспечения. При этом одновременно включаются патологические механизмы, лишенные «химической» специфичности, такие как развитие нарушений звеньев транспорта кислорода, нарушения метаболизма, активация свободнорадикального окисления и формирование синдрома эндогенной интоксикации [24].
В качестве изучаемых средств фармакологической коррекции клинических проявлений острой крайне тяжелой интоксикации этанолом использовали семакс, селанк, бестим, глутоксим, инозин, моликсан, гептрал.
В качестве токсиканта использовали 40% этанол, который вводили внутрижелудочно при помощи зонда в дозе 1 ЛД5о (8,0 г/кг). В связи с большим объемом вводимого раствора, указанную дозу делили поровну на два введения через 15 мин. Эффективность препаратов оценивали путем изучения выживаемости, неврологического статуса и некоторых витальных функций (частоты дыхательных движений и температуры тела) крыс.
Применение, моликсана, семакса и сочетанное применение моликсана с семаксом в различной степени защищали отравленных этанолом в дозе 1 ЛД5о животных, а выраженность эффекта зависела от схемы введения препаратов. Применение селанка, бестима, глутоксима и инозина было малоэффективно.
Так, интоксикация этанолом сопровождалась гибелью 67% крыс в течение 3 сут. При применении препаратов за 1 ч до введения этанола наиболее выраженным действием обладали моликсан и комбинация моликсана с семаксом. Применение этих препаратов позволяло выжить 100% отравленных животных, причем ни одно животное из этих групп не находилось в терминальной коме.
При использовании препаратов за 1 ч до и сразу после введения этанола препараты семакс, моликсан и комбинация моликсана с семаксом выживаемость крыс составила 100%. Также в этих группах не было животных, находившихся в терминальной коме.
При применении препаратов сразу после введения токсиканта наиболее выраженным защитным действием обладал моликсан, при использовании которого количество выживших животных, по сравнению с контролем, возрастало в 3 раза (табл. 2).
При введении препаратов с началом лечения через 30 мин после интоксикации значимый результат по критерию выживаемости показали моликсан и комбинация моликсана с семаксом, повысив выживаемость крыс в 2 раза по сравнению с контрольной группой.
Влияние фармакологических препаратов пептидной и непептидной природы на выживаемость, неврологический статус, температуру тела и частоту дыхательных движений крыс при
Изменение содержания общего белка в крови имеет важное диагностическое значение, и позволяет оценить функцию жизненно важных органов (в частности печени), определить как острые воспалительные процессы в организме, так и нарушения водно-солевого обмена, дисбаланс на микроэлементном уровне. Установлено, что при остром крайне тяжелом отравлении этанолом, показатели общего белка и мочевины сыворотки крови животных, получавших только этанол, и животных, получавших лечение, значимо отличались от показателей интактных животных на конец 1 сут после введения этанола в дозе 1,5 ЛД5о, умеренно снижаясь. Значимых изменений уровня креатинина в сыворотке крови животных всех групп по сравнению с интактными не отмечалось.
Измерение содержания глюкозы в крови используется для диагностики нарушений углеводного обмена. Гомеостаз глюкозы в крови и клетке является одним из определяющих факторов нормального функционирования организма. Понижение содержания глюкозы в крови вызывает серьезные нарушения в функционировании органов и систем, особенно структур центральной нервной системы.
Установлено, что значимое снижение уровня глюкозы, по сравнению с ин-тактной группой животных, наблюдалось через 3 ч после введения этанола для всех экспериментальных групп, а через 1 сут только для животных, получавших только этанол. На 3 сут данный показатель значимо не отличался от показателей интактных животных ни у животных, получавших только этанол, ни у животных, получавших лечение.
Печень является основным органом, осуществляющим метаболизм липидов в организме, следовательно, любой патологический процесс, ведущий к нарушению функции печени, сказывается на обмене липидов.
Показано, что концентрация холестерина в сыворотке крови всех групп экспериментальных животных значимо повышалась на конец 1 сут эксперимента, по сравнению с группой интактных животных, в 1,3 раза для животных, получавших только этанол, в 1,2 раза для животных с профилактической схемой введения препартов и в 1,3 раза для животных с лечебно-профилактической схемой введения препаратов.
Изменение активности АлАТ широко используют в эксперименте как показатель, характеризующий цитолитический синдром [133]. Установлено, что этанол в дозе 1,5 ЛД5о оказывает выраженное повреждающее действие на печень подопытных животных, которое оценивалось по активности в сыворотке крови маркерных ферментов повреждения мембраны гепатоцитов - аспартатами-нотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ).
Установлено, что концентрация фермента АлАТ в сыворотке крови животных, получавших только этанол, значительно повышала показатели интактных животных через 3 ч, 1 сут и 3 сут в 1,5, 1,8 и 1,2 раза соответственно по сравнению с группой интактных животных.
Профилактическое и лечебно-профилактическое применение препаратов приводило к снижению выраженности повреждений тканей печени. Так, в группе с профилактическим применением пептидных препаратов повышение концентрации АлАТ было менее выражено по сравнению с группой этанола на всех сроках наблюдения: 3 ч, 1 сут и 3 сут на 30%, 33% и 10% соответственно. При лечебно-профилактическом применении препаратов повышение концентрации АлАТ было менее выражено по сравнению с группой этанола на всех сроках наблюдения: 3 ч, 1 сут и 3 сут на 31%, 31% и 8% соответственно.
Рост активности АсАТ в сыворотке крови крыс, получавших только этанол, наблюдался через 3 ч, 1 сут и 3 сут в 1,8, 2 и 1,2 раза соответственно по сравнению с группой интактных животных. В группах с фармакологической коррекцией увеличение показателей АсАТ в сыворотке крови крыс было незначимо.
Выявленная гипогликемия, по данным литературы [119], связана так же с активацией щелочной фосфатазы, которая ответственна за дефосфорилирование фосфатных эфиров моносахаридов. Так, при определении динамики концентрации показателей щелочной фосфатазы в сыворотке крови крыс при остром крайне тяжелом отравлении этанолом в дозе 1,5 ЛД5о было установлено, что в сыворотке крови животных, получавших только этанол, наблюдалось значимое (р 0,05) повышение концентрации щелочной фосфатазы по сравнению с животными из ин-тактной группы (забор материала через 3 ч, 1 сут и 3 сут) и животными из групп с фармакологической коррекцией (через 3 ч и 1 сут после введения этанола). При этом в группах с фармакологической коррекцией сочетание препаратов приводило к умеренному повышению концентрации щелочной фосфатазы через 3 ч и 1 сут после введения этанола, а через 3 сут после введения этанола не отличалось от показателей группы интактных животных.
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) - фермент, обратимо катализирующий окисление лактата в пируват. Установлено, что при остром крайне тяжелом отравлении этанолом в дозе 1,5 ЛД5о при фармакологической коррекции пептидными препаратами наблюдалось значимое, умеренное повышение уровня лактатдегидрогена-зы (ЛДГ) во всех контрольных точках забора материала (3 ч, 1 сут, 3 сут) по сравнению с интактными животными, при этом было отмечено значимое отличие по сравнению с группой животных, получавших этанол.
Таким образом, применение комбинации моликсана с семаксом при обеих схемах введения снижало выраженность нарушений белкового обмена по показателям общего белка, мочевины, креатинина, углеводного обмена по показателям глюкозы, жирового обмена по показателям холестерина, а также снижало повреждающее действие этанола на гепатоциты по показателям цитолиза. А значит, можно говорить о гепатопротекторном эффекте изучаемых средств фармакологической коррекции острого крайне тяжелого отравления этанолом.
Система глутатиона принимает участие в реализации целого ряда важнейших физиологических процессов: детоксикации и антиоксидантной защиты; в биохимических превращениях витаминов С, Е, липоевой кислоты и убихинона; в регуляции тиол-дисульфидного равновесия; в процессе транспорта аминокислот; в регуляции углеводного, липидного, белкового и нуклеинового обменов; в поддержании гемоглобина эритроцитов в восстановленном состоянии; в поддержании оптимального состояния и функций биологических мембран; в регуляции клеточной пролиферации; в обмене ряда эйкозаноидов - простагландинов и лей-котриенов; глутатион выступает и в качестве резерва цистеина в клетке; участвует в регуляции функциональной активности лимфоцитов и обеспечении иммунного ответа организма; оказывает регулирующее влияние на синтез белков теплового шока; принимает участие в реализации механизмов программируемой клеточной гибели [60]. Повреждения системы глутатиона и нарушения ряда ее регулирующих функций может играть важную роль в патогенезе повреждающего действия этанола на организм.
Проведенное исследование позволило установить, что острое крайне тяжелое отравление этанолом сопровождалось изменениями содержания восстановленного глутатиона в тканях головного мозга и печени отравленных животных, в зависимости от времени, прошедшего после введения этанола. Выраженные нарушения обмена глутатиона отмечались как в тканях печени, так и в тканях головного мозга. При этом применение препаратов пептидной природы оказывало положительное влияние на динамику концентрации восстановленного глутатиона в тканях отравленных животных (табл. 24).
Показатели углеводного, белкового, липидного обмена, маркеров цитолиза в сыворотке крови
Однако, при остром крайне тяжелом отравлении этанолом в дозе 1,5 ЛД5о (12 г/кг), мочевина не проявляла своих антиоксидантных свойств. На всех сроках наблюдения ее динамика носила убывающий характер, а на конец 1 сут наблюдались значимые отличия концентрации мочевины в сыворотке крови животных, получавших только этанол и животных с фармакологической коррекцией от интактной группы животных, что, по-видимому, обусловлено срывом функциональных возможностей печени вследствие развития дистрофических повреждений. Необходимо отметить, что снижение уровня мочевины находится в корреляционной зависимости активного использования аминогрупп в условиях дефицита белка [118], концентрация которого значимо снижалась на конец 1 сут наблюдения в сыворотке животных контрольной и экспериментальных группах нашего эксперимента. Полученные данные в целом согласуются с результатами исследований других авторов [98].
Показатели общего белка сыворотки крови животных, получавших только этанол, и животных с применением пептидных препаратов значимо отличались от показателей у интактных животных на конец 1 сут после введения этанола в дозе 1,5 ЛД5о, умеренно снижаясь. Это может свидетельствовать о том, что при остром крайне тяжелом отравлении этанолом нарушается процесс обновления белков в организме экспериментальных животных, а также это свидетельствует о возможном нарушении функциональной активности гепатоцитов вследствие токсического поражения паренхимы печени алкоголем.
Также, через 1 сут после введения этанола в сыворотке крови крыс контрольной и экспериментальных групп повышался уровень холестерина по сравнению с интактными животными, что может свидетельствовать о нарушении синтеза и утилизации данных соединений клетками печени вследствие их токсического поражения алкоголем.
Печень является важнейшим органом, синтезирующим глюкозу, которая служит источником энергии для обеспечения приспособительной энергии органов и систем [8]. Постоянство глюкозы в крови и клетках является одним из определяющих факторов нормального функционирования организма. Снижение содержания глюкозы в крови ниже минимального уровня, к которому адаптирован организм, вызывает серьезные нарушения в функционировании всех органов и систем, особенно структур центральной нервной системы [47].
Биотрансформация этанола и ацетальдегида проходит при участии дегидро-геназ (алкогольдегидрогеназы и ацетальдегиддегидрогеназы соответственно), которые в ходе биохимической реакции активно используют коферменты, в частности, никотинамидадениндинуклеотид (НАД+), который в ходе реакции переходит в восстановленную форму (НАДН). Все это является следствием нехватки данного кофермента для других жизненно важных биохимических реакций, которые протекают в организме, в частности глюконеогенеза. Следовательно, нормальная последовательность глюконеогенеза из пирувата блокируется, что приводит к уменьшению выхода глюкозы из печени и к гипогликемии [9].
Учитывая, что этанол вызывает поражение гепатоцитов, можно предположить, что в этих условиях будет наблюдаться дефицит глюкозы в организме. Установлено, значимое снижение уровня глюкозы в сыворотке крови животных, получавших только этанол, по сравнению с группой интактных животных, которое наблюдалось уже в самые ранние сроки моделирования острого отравления этанолом, а также отмечалось на конец 1 сут. При этом, в группах с применением фармакологической коррекции пептидными препаратами, снижение уровня глюкозы было умеренным и только через 3 ч после введения этанола, а к концу первых суток значение этого показателя возвращалось к норме и в 1,4 раза было выше по сравнению с группой животных, получавших этанол. Снижение уровня глюкозы при остром крайне тяжелом отравлении этанолом отмечалось в работе А. В. Машанова [74].
Аминотрансферазы катализируют реакции переаминирования между амино-и а-кетокислотами, участвуя таким образом в синтезе и распаде собственных белков организма. Наиболее высокая активность АлАТ определяется в печени. В связи с тем, что специфическая активность АлАТ в печени в 10 раз выше, чем в миокарде и скелетной мускулатуре, повышенная активность этого фермента в сыворотке рассматривается как индикатор поражения паренхимы печени.
В результате проведенных исследований показано, что острое крайне тяжелое отравление этанолом в дозе 1,5 ЛД5о оказывает выраженное повреждающее действие на печень подопытных животных, о чем свидетельствовал рост активности АлАТ в сыворотке крови контрольной и экспериментальных групп, при этом профилактическое и лечебно-профилактическое применение препаратов, приводило к снижению выраженности повреждений тканей печени, которое оценивалось по активности в сыворотке крови маркерных ферментов повреждения мембраны гепатоцитов: аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансфера-зы (АсАТ).
Установлено, что концентрация фермента АлАТ в сыворотке крови животных, получавших только этанол, значительно повышала показатели интактных животных через 3 ч, 1 сут и 3 сут в 1,5; 1,8 и 1,2 раза соответственно по сравнению с группой интактных животных.
Профилактическое и лечебно-профилактическое применение препаратов приводило к снижению выраженности повреждений тканей печени. Так, в группе с профилактическим применением пептидных препаратов, повышение концентрации АлАТ было менее выражено по сравнению с группой этанола на всех сроках наблюдения: 3 ч, 1 сут и 3 сут на 30%; 33% и 10% соответственно. При лечебно-профилактическом применении препаратов повышение концентрации АлАТ было менее выражено по сравнению с группой этанола на всех сроках наблюдения: 3 ч, 1 сут и 3 сут на 31%; 31% и 8% соответственно.