Содержание к диссертации
Введение
I. Обзор литературы 9
1.1. Биологическая активность соединений в ряду бензофуроксанов 9
1.2. Дерматомикозы. Наиболее применяемые методы и средства их лечения 14
1.3. Саркогггоидозы. Наиболее применяемые методы и средства их лечения 19
II. Собственные исследования 23
2.1. Материалы и методы исследований 23
2.2. Результаты исследований 29
2.2.1. Биологическая активность в ряду замещенных нитробензофурок-
санов 29
2.2.1.1. Акарицидная активность нитробензофуроксанов 30
2.2.1.2. Бактериостатическая активность нитробензофуроксанов 32
2.2.1.3. Фунгистатическая активность нитробензофуроксанов 34
2.2.2. Определение параметров острой токсичности «Тримикса на» 38
2.2.3. Определение кумулятивных свойств «Тримиксана» 43
2.2.4. Влияние «Тримиксана» на массу тела крыс при длительном поступлении в организм 47
2.2.5. Определение раздражающего действия «Тримиксана» на кожу и слизистые 49
2.2.6. Определение аллергенных свойств «Тримиксана» 52
2.2.7. Изучение отдаленных последствий действия «Тримиксана» 53
2.2.7.1. Изучение мутагенного действия «Тримиксана» 53
2.2.7.2. Выявление эмбриотоксического действия «Тримиксана» 56
2.2.8. Изучение влияния «Тримиксана» на морфологический и биохимический состав крови 61
2.2.9. Патоморфологические изменения в органах и тканях белых крыс при накожном применении «Тримиксана» 65
2.2.10. Разработка лекарственных форм и гоучение лечебной эффективности «Тримиксана»при саркоптоидозах и дерматомикозах 78
22.10.1. Изучение растворимости «Тримиксана» 79
2.2.10.2. Разработка лекарственных форм «Тримиксана»... 79
2.2.10.3. Терапевтическая эффективность «Тримиксана» при псо-роптозе кроликов 81
2.2.10.4. Терапевтическая эффективность «Тримиксана» при отодектозе плотоядных 82
2.2.10.5. Терапевтическая эффективность «Тримиксана» при микроспории кошек и собак 84
III. Обсуждение результатов исследований 86
IV. Выводы 98
V. Практические предложения 100
VI. Библиографический список использованной литературы
- Дерматомикозы. Наиболее применяемые методы и средства их лечения
- Саркогггоидозы. Наиболее применяемые методы и средства их лечения
- Бактериостатическая активность нитробензофуроксанов
- Определение раздражающего действия «Тримиксана» на кожу и слизистые
Введение к работе
Актуальность темы. Наукой и практикой в ветеринарии достигнуты значительные успехи в лечении и ликвидации многих болезней животных. Тем не менее, болезни кожи микотической и саркоптоидозной этиологии имеют распространение среди всех видов животных [54, 161, 132, 45]. Еже-годно лечебной и профилактической обработке против стригущего лишая подвергаются свыше 50% общего поголовья крупного рогатого скота, против псороптоза — 13%, овец ~ 18%. Многие регионы Российской Федерации считаются неблагополучными по псороптозу овец и крупного рогатого скота, а также по саркоптозу свиней [8,13].
Большинство лекарственных соединений, рекомендуемых для лечения болезней кожи животных, по ряду причин не удовлетворяют требованиям ветеринарной науки и практики. Производные фосфор- и хлорорганических соединений (хлорофос, циодрин, акродекс и др.) обладают высокой токсичностью, кумулятивны, эмбриотоксйчны, длительно сохраняются в пищевых цепях [96, 59, 97, 1, 2, 6]. Нистатин, леворин, амфотерицин и др. часто вызывают аллергические реакции и другие побочные эффекты [142, 94, 131]. Препараты йода и салициловой кислоты, гризеофульвин и другие малоэффективны [100, 218,182, 21, 156, 136, 35, 40], а гризеофульвин обладает канцерогенным, эмбриотоксическим и тератогенным действием [188]. Менее безопасными и эффективными для лечения трихофитии и микроспории считаются сера и ее препараты, в том числе серооргаяические соединения нефтехимического синтеза сульфоны и сульфоксиди [153, 154].
Из приведенного следует, что поиск перспективных лечебно-профилактических средств для лечения паразитарных и инфекционных болезней кожи животных актуален и требует усилий химиков и ветеринарных специалистов.
Одним из перспективных направлений поиска новых средств для лечения саркоптоидозов и дерматомикозов животных является: направленный
6 синтез соединений, обладающих широким спектром действия (акарицидным, бак-терицидньгм, фунпщидным). По литературным данным некоторые нитро- и гало-генпроизводные бензофуроксанов и бензофуразанов проявляют высокую биологическую активность [38,70,120,121,157,159].
Изучение биологической активности и фармако-токсикологических свойств дигалогеннитробензофуроксанов позволило выявить наиболее активные и малотоксичные препараты для лечения дерматомикозов и саркопгоидозов, а также в дальнейшем рекомендовать их для ветеринарной практики. Анализ же зависимости биологической активности препарата от его химической структуры позволит в дальнейшем проводить целенаправленньга синтез соединений, проявляющих необходимую биологическую активность.
Цель и задачи исследований. Основной целью нашей работы было создание нового лекарственного средства для лечения кожных болезней животных паразитарной и микотической этиологии. Для достижения поставленной цели необходимо было решение следующих задач:
1. Исследовать акаршшдную, антимикробную, антимикотическую активность
замещенных нитробензофуроксанов, выявить связь между их структурой и актив
ностью, найти наиболее перспективное соединение.
2. Определить параметры токсичности, кумулятивные свойства 5,7-дихлор-4,6-
динитробензофуроксана, 5,7-дихлор-б-нитробензофуроксана и 5,7-дихлор-4-
нитробензофуроксана («Тримиксан»).
Изучить отдаленные последствия действия «Тримиксана» на организм животных.
Изучить действие «Тримиксана» на клинический статус, гематологический и биохимический состав крови лабораторных животных; определить характер гис-томорфологических изменений, возникающих в организме животных после его применения.
Установить лечебную эффективность «Тримиксана» при дерматомико-зах и саркоптоидозах животных, разработать лекарственные формы, дозы и схемы его применения.
7 Научная новизна. Впервые установлено, что нитробензофуроксаны -новая группа соединений, обладающая широким спектром биологического действия (акарицидным, антимикотическим, антимикробным). Выявлена зависимость их биологической активности от структуры молекулы. Впервые определены параметры токсичности и клинические проявления токсикоза «Трнмиксана». Доказано отсутствие отрицательного влияния «Тримиксана» на общее состояние, морфологический и биохимический состав крови, гис-томорфологию тканей животных при длительном применении в рекомендуемых концентрациях и дозах, доказано отсутствие отдаленного последствия действия препарата на организм животных (мутагенность, эмбриотоксич-ность, тератогенность). Разработаны лекарственные формы, дозы, схемы применения «Тримиксана» при дерматомикозах и саркоптоидозах животных. Впервые показан высокий терапевтический эффект «Тримиксана» в виде 0,1% спиртового раствора и 0,2% жидкой мази при болезнях кожи животных паразитарной и микотической этиологии.
Практическая ценность. Установлены закономерности проявления биологической активности производных нитробензофуроксана, что позволяет проводить направленный синтез химических соединений. Определен ряд производных нитробензофуроксана, обладающих широким спектром биологической активности (акарицидной, бактериостатической, фунгистатиче-ской).
Рекомендован для внедрения в ветеринарную практику «Тримиксан» в виде 0,1% спиртового раствора и 0,2% жидкое мази, как высокоэффективное средство при псоропгозе кроликов, отодектозе, дерматомикозах и гнойном отите плотоядных.
Апробация работы. Материалы диссертации обсуждены и получили положительную оценку на: международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета (Казань, 2000), научно- производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехники (Казань, 2001), международной конференции ветеринарных
8 фармакологов и токсикологов, посвященной 125-летию НА. Сошественского (Казань,2001), IV научно-практической конференции молодых ученых и специалистов РТ (Казань,2001), итоговой конференции Республиканского конкурса научных работ среди студентов и аспирантов на соискание премии имени Н.И. Лобачевского (Казань,2002), семинаре RSAVA в рамках программы постдипломного образования ветеринарных специалистов (Казань, 20О4).
Настоящая работа проведена в соответствии с тематикой научных исследований Казанской государственной академии ветеринарной медицины (гос. регистрации № 0.1.98.0002094)
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
замещенные нитробензофуроксаны обладают выраженными фунгистати-ческими, бактериостатическими и акарицидными свойствами; -5Д-дихлог>4,6-дшштробешофуроксана+5Д-дихлор-6-нитробензофуроксана и 5,7-дахлор-4-нитробензофуроксана («Тримиксан») малотоксичен, умеренно кумулятивен при длительном применении;
«Тримиксан» в рекомендуемой концентрации и кратности применения не оказывает отрицательного действия на общее состояние, состав крови, морфологию тканей, не обладает мутагенным, эмбриотоксическим действием;
«Тримиксан» в виде 0,1% спиртового раствора обеспечивает высокий терапевтический эффект при псороптозе кроликов, отодектозе и гнойном отите собак и кошек;
«Тримиксан» в виде 0,2% жидкой мази обеспечивает высокий терапевтический эффект при микроспории собак и к^ок.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 134 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа иллюстрирована 17 рисунками, содержит 21 таблицу. Список литературы включает 238 источников.
Дерматомикозы. Наиболее применяемые методы и средства их лечения
Ветеринарная наука в основном решила проблемы, связанные с профилактикой, лечением и ликвидацией многих болезней. Однако микотические заболевания встречаются среди всех видов домашних животных, диких зверей и человека. Микотические заболевания относятся к инфекционной патологии и составляют ее значительную часть [ Ш.
В настоящее время проблема лечения грибковых инфекций кожи, ее придатков и слизистых оболочек приобретает особую актуальность в связи с ростом количества больных людей и животных, увеличением распространенных, тяжело протекающих форм микозов [158, 228, 209, 212].
Самыми распространенными грибковыми инфекциями являются дер-матофитии, вызываемые патогенными грибами, и с условно-патогенной, а иногда и сапрофитной флорой, такие как Trichophyton, Microsporum, Epider 15 mophiton, которые имеют выраженное сродство к кератину и роговым струк турам, и кандидоз, вызываемый дрожжеподобными грибами рода Candida [141, 126]. Создание эффективных средств специфической профилактики существенно снизило распространение некоторых дерматомикозов. Совсем недавно от всех инфекционных заболеваний на трихофитию крупного рога того скота приходилось 40%. Внедрение в ветеринарную практику вакцины ЛТФ-130 позволило ликвидировать эту инфекцию как эпизоотию [107]. Тем не менее, пораженносгь дерматомикозами собак, кошек, лошадей, верблюдов и других животных доставляет хлопоты ветеринарным специалистам и Ц владельцам [10, 41, 42, 98,115,138, 152].
Для борьбы с дерматомикозами были предложены разные способы, множество различных средств, от жестоких - выжигание огнем [43], применение кипящих минеральных масел [53], до специфических средств местного применения, такие как юглон [4, 5,], гексамид в виде мази [3], однохлори-стый йод [139], фурфурол [101], препараты салициловой кислоты [116] и другие.
Современные лекарственные средства для лечения дерматомикозов как животных, так и человека, представлены двумя основными группами: 1.Противогрибковые (полиеновые) антибиотики: нистатин, гризеофуль вин, амфотерицин-В, леворин, натамицин. 2.Синтетические препараты: бифоназол, итраконазол, кетоконазол, клотримазол, оксиконазол, флуконазол (производные имидазола и триазола); тербинафин, нафтифин, толнафтат (производные нафталина); аморфолин (производное морфолина); циклопирокс (производное оксипиридона); мико-септин, нитрофунгин (детергенты и антисептики).
Большинство противогрибковых препаратов воздействуют на фермент ные этапы сложного процесса синтеза эргостерина. Подавление синтеза эрго стерина, приводящее к истощению его запасов или замене на другие произ ф водные стеринов (игностерин), оказывает разрушающее действие на микро организм [158]. Одним из первых антибиотиков стал гризеофульвин [128, 219], который обладает фунгистатическим действием, препятствуя ядерному делению грибов через микротубулярные транспортные структуры. Связываясь с протеинами, он вызывает дезорганизацию стенок внутриядерных канальцев и нарушение их проводящей функции. В свою очередь повреждение связей между канальцами приводит к нарушению транспорта разнообразных веществ. Как следствие этого, микозы блокируются на стадии метафазы. Спектр действия гризеофульвина достаточно узок, включает в себя только грибы-дерматофиты, а дрожжеподобные грибы (род Candida) и плесневые грибы являются устойчивыми к этому препарату. При пероральном применении препарат накапливается в кератине волос и ногтей и оказывает фунгистати-ческое действие, в связи, с чем его применение должно быть длительным. Гризеофульвин обладает высокой токсичностью (как следствие: гепатит, тошнота, рвота, крапивница, кожная сыпь, невропатии), обладает тератогенным и эмбриотоксическим действием.
Из группы полиеновых антибиотиков нистатин, используется в виде мази, таблеток при поражениях кожи и слизистых оболочек дрожжеподоб-ными грибами рода Candida, хотя в настоящее время многие штаммы грибов рода Candida недостаточно чувствительны к препарату [200]. Амфотерицин -антифунгальный препарат широкого спектра действия, но он нефротоксичен [169, 171, 190]. К натамицину чувствительны большинство патогенных дрожжевых грибов, особенно Candida albicans, менее чувствительны - дерматофиты. В основе фунгицидного действия полиенов лежит прямое избирательное связывание с эргостерином мембран и, как следствие, нарушение мембранных структур и проницаемости мембран с конечным лизисом и гибелью клетки.
Саркогггоидозы. Наиболее применяемые методы и средства их лечения
Чесотка, как паразитарное заболевание кожи животных и человека, известна с глубокой древности, но человечество до сих пор ищет наиболее радикальные и экологически чистые методы и способы избавления от нее. Трудность борьбы с ней осложняется еще и тем, что чесоточные клещи благодаря свойствам термотаксиса легко переходят к здоровым животным, поражая все новых и новых животных [25, 55, 162]. Заболевание носит сезонный характер - летом имеет стертый характер, а осенью и зимой обостряется. Клещи долгое время могут сохраняться в помещениях и предметах ухода, которые образуют очаги постоянной инвазии. Чесоточные клещи по месту внедрения в тело животного нарушают целостность эпидермиса, они сами и продукты их жизнедеятельности, как чрезвычайные раздражители вызывают зуд и воспаление. Происходят биологические и биохимические изменения в коже, создаются оптимальные условия питанию и размножению паразитов. Происходит сосудистое расстройство кожи, накопление в ней биологически-активных соединений (гистамин, серотонин, гепарин и др.), возникают гемодинамические сдвиги в кровеносной системе кожи. На поверхности кожи образуются плотные корочки, содержащие продукты распада клеток, яиц клещей, которых животные, расчесывая, распространяют в среде обитания. Кожа, в случае активных поражений, перестает выполнять свои функции. Постоянные раздражения рецепторов кожи вызывают сложные измене- ния в печени и центральной нервной системе. Животные снижают продуктивность, истощаются, а при генерализованной форме чесотки погибают [134,135, 235]. Для лечения животных, пораженных псороптозом, зудневыми клещами и отодектозом, предложено большое количество препаратов, которые можно подразделить на следующие группы.
Хлорорганические препараты. Они активны, длительно сохраняются на животных и объектах внешней среды. Например, после обработки помеще 20 ний дустом гексахлорана, его активность сохраняется более 30 месяцев [78]. Животным его можно применять в виде 12%-ного дуста или в виде 2-4%-ной эмульсии на креолине [18, 57]. Лечение животных гексахлораном обеспечивает полное выздоровление, но следует отметить, что он легко проникает через кожу, кумулируется в органах и тканях, выделяется с молоком, обладает гонадо- и эмбриотоксическим эффектом. [87, 179, 226]. Поэтому гексахлоран, каїс акарицид, представляет интерес только в историческом аспекте.
Для лечения псороптоза кроликов используется 5% гексаталп [116], аурикан эффективен при заболевании ушей у собак и кошек, вызванных разными возбудителями (отодектоз и др.) [72].
Фосфорорганические соединения (ФОС). Карбофос используется для обработки свиней при саркоптозе в виде 0,5 % эмульсии [113], фоксим эффективен при лечении чесотки у овец в концентрации 0,05%, а также в форме ванн и аэрозолей, фтолофос [72], неоцидол [52,63, 195], сульфидофос [1], гудронтрикрезол [34] предложены для обработки овец против псороптоза, огодектоза лисиц, песцов. Фосмет [14, 201, 231], кумафос [227, 237] - для лечения саркоптоза свиней. Для купания в ваннах применяют диазинон, хлорфенвинфос, пропетамфос [206, 220, 224], эктанон [217], ветиол [9]. На основе диазинона разработаны ушные капли « Барс» для лечения плотоядных [76]. Для лечения псороптоза крупного рогатого скота рекомендованы три-хлорметафос [72], изофен [143], байтикол [30, 123, 177, 229], хлорацетофос [31], акарол - для лечения саркоптоза собак [185].
В настоящее время хорошо себя зарекомендовали, как активные инсек-тоакарициды, препараты на основе авермектинов, получаемых при ферментации почвенного микроорганизма Streptomyces avermitilis. Это ивермектин, механизм действия которого основан на нарушении передачи нервных импульсов, путем воздействия на гамма-аминомасляную кислоту, что увеличивает проницаемость мембран для ионов хлора. [83, 130, 210,221, 236, 238].
Новая лекарственная форма ивермектина - ивермек-гель (0,1-0.2%) обладает высокой антипаразитарной активностью даже при однократном при 21 менени [140]. На основе ивермектина был разработан ивомек [6, 124], но применение его некоторым породам собак противопоказано [86]. На основе абамектина разработан препарат дуотин [15].
При псороптозах применяется моксидектин [176, 211, 225], дорамектин [74], дектомакс-S, который создан на основе дорамектина [223].
Сероорганические соединения относятся к наиболее важным классам пестицидов. Коллоидная сера применяется при псороптозе крупного рогатого скота [148]. Созданы препараты на основе сероорганических соединений нефтехимического синтеза - сульфоны и сульфоксиды [8, 16, 17, 36, 66, 153, 154, 160]. При отодектозе лисиц и песцов рекомендован полисульфидный линимент [48, 49, 167], метилтиофен [7]. При псороптозе крупного рогатого скота — плизон [64, 108, 144, 166], тиофен-кетон (CKso - 0,007%) является высокоэффективным акарицидом, но очень токсичен [96].
Соединения из группы синтетических пиретроидов являются действующим веществом большого количества препаратов [95, 75]. Пиретроиды воздействуют на мембраны нервных клеток. Связываясь с липидными структурами мембран, пиретроиды нарушают работу натриевых каналов, в результате чего возникает замедление реполяризации мембраны и паралич паразита [73].
Бактериостатическая активность нитробензофуроксанов
Определение влияния препаратов на бактериальные культуры in vitro имеет большое значение при изучении его химиотерапевтической ценности. Часто работа над новыми препаратами начинается именно с определения их бактериостатическо-го действия. Под бактериостатическим действием понимается, как известно, остановка роста и размножения бактерий под влиянием препарата. Гибели бактерий при этом не наблюдается [11,106,155].
Для определения бактериостатической активности исследуемых соединений производили посев бактерий на питательную среду, содержащую препарат в прогрессивно снижающихся концентрациях, растворенный в ДМСО, отмечали, при каких его разведениях отсутствует рост бактерий. В опыте использована культура St. aureus штамм 209-Р. Контролем служили раствор ДМСО в питательной среде и питательная среда без препарата. В пробирки засевали суточные агаровые культуры используемых бактерий (бактериальная нагрузка -330 000 микробных тел в 1 мл.). Пробирки инкубировали в термостате 24 часа при температуре 37С. Результаты представлены в таблице 4, где МБСК, % -минимальная бактериостатическая концентрация, выраженная в процентах, (остановка роста и размножения бактерий под влиянием препарата; гибели бактерий при этом не наблюдается).
Исследования бактериостатическоЙ активности полиядерных нитробен-зофуроксанов показали (таблица 4), что активность возрастает на порядок и более при замещении атомов галогена в 5,7-дихлор-4,6 динитробензофуроксане ароматическими и гетероциклическими аминами (соединения № 5, 6, 11), причем также отмечается зависимость активности от природы заместителя в ароматическом или гетероциклическом ядре.
Бактериостатическая активность нитробензофуроксанов относительно бактерий Staphylococcus aureus №п/п Препараты МБСК, (%) St aureus 1 5,7-дихлор-4,6Чщнитробензофуроксан+ 5,7-дихлор-б-нитробензофуроксан 0.025 2 5,7-дихлор-4-нитробешофуроксан + 5,7-дихлор-б-нитробензофуроксан 0.0312 3 5,7-дихлор4,б-динитробензофуроксан +5,7-дихлор-6-нитробензофуроксан + 5,7-дихлор-4-нитробензофуроксан 0.0156 4 4-(3-хлорфениламино)-6-бром-5,7-динитробензофуроксан 0.025 5 4,6-динитро-5,7-бис-{4-хлорпиридинамино)-бензофуроксан 0.0056 6 4,6-динитро-5,7-бис-(4-бромпиридинамино)-бензофуроксан 0.0067 7 4,6-динитро-5,7-бис-(фениламино)-бензофуроксан 1 8 2-амино-пиримидино-молекулярныйкомплекс с 5-окси-7-хлор 4,6-динитробензофуроксаном 0.025 9 5,7-динитро-4,б-бис-(4-нитрофениламино)-бензофуроксан 0.1 10 5,7-динитро-4,6-бис-(3 -нитрофениламино)-бензофуроксан 0.0125 11 5Д-динитро-4,6-бис-(4-карбоксифениламино)-бензофуроксан 0.003 12 12 креолин 0,07 Так, присутствие атомов галогена как в ароматическом, так и в гетероциклическом кольце обусловливает в большинстве соединений проявление высокой активности относительно St aureus (соединения № 5, 6). Согласно данным Шиндала [159] на проявление бактериостатической активности немаловажным оказалось также и количество атомов галогена Автор показал, что сильное влияние на активность оказывает природа галогена, замена атома хлора на бром в бензольном кольце замещающего амина вызывает уменьшение активности на порядок.
Нами установлено, в случае замены бензольного кольца на пиридиновый цикл зависимость активности от природы галогена не выражена столь существенно (соединения № 5,6, см. табл. 4).
Анализ зависимости бактериостатической активности полиядерных структур от природы заместителя в ариламинной группировке показал, что для усиления бактериостатической активности немаловажным оказалось наличие в бензольном кольце заместителя таких групп как карбокси-, окси- (соединения № 8, И, табл. 4). Предположительно, что увеличение биологической активности может быть связано с образованием водородных связей, характерных для донорных групп (карбокси-, окси-). Это предположение подтверждается тем, что в случае замены атома водорода в карбоксильной группе пара-аминобензойной кислоты на этильную группу активность соединения понижается примерно в 15 раз [159].
Фунгистшпичесшя активность нитробензофураксаиов
Многообразие грибов, быстрая изменчивость их структуры и привыкание к известным препаратам побуждает искать новые фунгициды. Из соединений, проявляющих антимикотическую активность, наибольший интерес представляют соединения, подавляющие рост гриба Aspergillus niger, наиболее устойчивого среди плесневых грибов.
Для определения фунгистатической активности нитробензофуроксанов готовили двукратные разведения препаратов в среде Сабуро, куда засевали культуры исследуемого гриба. Пробирки инкубировали в термостате при 27 С в течение 14 суток. Чувствительность к препаратам определяли по их минимальной фунгистатической концентрации (МФСК, %), при которой рост гриба не наблюдается. Результаты представлены в таблице 5.
Таблица 5 Зависимость фунгистатической активности от структуры нитробензофуроксанов (тест-объект - гриб Aspergillus niger) п/п Препараты МФСК,% 1 57-дихлор ,6 динитробензофуроксан + 5 -дихлс -нитробензофуроксан 0.0007 2 5,7-дихлор-4-нитробензофуроксан + 5,7-дихлор-6-нитробензофуроксан 0.0013 3 5,7-дихлор ,6-динитробензофуроксан +5,7-дихлор-б-шпробензофуроксан + 5,7-дихлор-4-нитробензофуроксан 0.0011 4 4-(3-хлорфениламино)-6-бром-5,7-динитробензофуроксан 0.005 5 4,6-динитро-5,7-бис-(4-хлорпиридинамино)-бензофуроксан 0.0005 6 4,6-динитро-5,7-бис-(4-бромпиридинамино)-бензофуроксан 1 7 4 6-динитро-5,7-бис-{фениламино)-бегоофуроксан 0.5 8 2-амиБо-пиримидино-молекулярныйкомплекс с 5-окси-7-хлор-4,6-динитробензофуроксаном 0.1 9 5Д-динитро-4,6-бис-(4-нитрофениламино)-бензофуроксан 0.1 10 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)-бензофу роксан 0.05 И 5,7-динитрс-4,6-бис-(4-карбоксифениламино бензофуроксан 0.1 к диметилсульфоксид 1
Исследования позволили выявить яркую зависимость фунгистатической активности бензофуроксановых соединений от строения. Установлено, что фунгистатическая активность возрастает в тех соединениях, где присутствуют такие заместители как атомы галогена в сочетании с нитрогруплои, причем наибольший эффект наблюдается при наличии в структуре атомов хлора (соединения № 1 — 5, см. табл.5). Также установлено влияние нитрогрупп на фун-шстатическую активность и показано, что с увеличением количества нитрогрупп в структуре фунгастатическая активность понижается (соединения № 9, 10, см. табл. 5).
Определение раздражающего действия «Тримиксана» на кожу и слизистые
Аллергенные свойства препарата изучали на 12 кроликах массой 1,5-2 кг. На первом этапе опыта оценивали первично-раздражающее действие препарата путем однократных накожных аппликаций различных его разведений с целью определения концентрации, которая не вызывает реакцию кожи животных. Такой концентрацией явг тся 1 % раствор препарата в ДМСО. На втором этапе животных сенсибилизировали путем многократных аппликаций препарата в 1% концентрации на один и тот же участок кожи. Для этого предварительно (за сутки до опыта) выстригали волосы на участке спины размером 2x3 см. Аппликации делали в направлении от шеи к хвосту. На поверхность кожи наносили 1 % раствор «Тримиксана» в ДМСО объемом 0,1 мл, выдерживали 4 часа и смывали дистиллированной водой. На 10-й день нанесения препарата у кроликов наблюдалась слабая гиперемия кожи, и на несение раствора было прекращено. Через 21 день после последней аппликации на свежевыстрнженный участок кожи на спине наносили разрешающую дозу - 1 мл в той же концентрации. Учет реакции проводили через 24 часа. Признаков аллергической реакции экспериментальных животных не выявили. Таким образом, «Тримиксан» не обладает аллергизирующим действием,
Как известно, целый ряд химических соединений, лекарственных препаратов длительно воздействуя на организм, могут вызвать отдаленные нежелательные последствия. Яды вызывают изменения генеративной функции у человека и животных, оказывают мутагенное, тератогенное действие, изменяют ово- и спермиогенез [112]. Многие инсектициды (фталафос, оксид, бонафт, дисалан, аббат и др.) проявляют отдаленные последствия, особенно гонадотоксичность, тератогенность и бла-стомогенность [2,32, 110, 111, 117, 133,145]. Исходя из этого, проведены специальные исследования по изучению отдаленных последствий действия «Тримиксана».
Широкое внедрение в животноводческую практику новых препаратов требует всестороннего исследования отдаленных последствий их применения. Одним из основных аспектов выявления отдаленных эффектов является изучение мутагенной активности, которое ставит своей задачей г лючить опасное воздействие препаратов не только на сегодняшнее поколение, но и на будущие.
Мутагенное действие «Тримиксана» изучали согласно методике [ПО] в лаборатории Казанского государственного университета. Метод основан на индукции испытываемых ветеринарными препаратами или их метаболитами обратных мутаций от ауксотрофности к прототрофности индикаторных штаммов сальмонелл по гистидину, а именно минимальную концентрацию, при которой подавляется рост бактерий. Для «Тримиксана» эта концентрация составила 70 мкг/мл.
На следующем этапе проводили полуколичественное определение генных мутаций с внесением растворов препарата в слой полужидкого агара с метаболической активацией in vitro и визуальном учете числа колоний ревертантов в опытных и контрольных чашках Петри. Тестовые бактерии, Salmonella thyphimurium, культивировали на специальной среде, на которой могут расти лишь микроорганизмы, у которых произошла мутация от ауксотрофности по гистидину к прототрофности. Без внеш-них воздействий такие мутации происходят с низкой частотой. Если же в среду культивирования ввести химический мутаген, то частота мутаций значительно увеличивается, что регистрируется по числу колоний микроорганизмов, выросших на данной селективной среде. Нами использовался индикаторный штамм сальмонелл ТАюо; штамм несет мутацию ауксотрофности по гистидину. Штамм ТАюо в ряде случаев способен выявлять эффект мутагенов, действующих по обоим названным молекулярным механизмам [27, 147].
В селективный полуобогащенный 0,6% агар объемом 3 мл вносили 0,1 мл бактериальной суспензии, ОД мл раствора «Тримиксана» в различных концентрациях, 0,5 мл микросомальной активирующей смеси (MAC) на дистиллированной воде, размешивали содержимое пробирки и выливали его на слой нижнего минимального агара на чашки Петри. Чашки оставляли при комнатной температуре на 40 минут и после полного застывания переносили в термостат (37). В контрольные чашки в слой верхнего агара вместе с суспензией тест-бактерий добавляли неполную MAC и 0,1 мл растворителя. В качестве позитивного контроля использовали 0,1 мл раствора нитрозометилмочевины (100 мкг/мл). Учет результатов проводили через 48 часов инкубации, подсчитывая число колоний ревертантов. Опыт проводили в трехкратной повторносте.
