Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы
1.1. Фармакологические средства, применяемые для повышения продуктивности животных 8
1.2. Необходимость изыскания альтернативы кормовым антибиотикам 30
1.3. Кормовые дрожжи 33
2. Собственные исследования
2.1. Материалы и методы исследований 40
2.2. Анализ причин отхода поросят раннего возраста 45
2.3. Ростостимулирующие свойства дрожжей 48
2.4. Адаптогенные свойства дрожжей 55
2.5. Иммуностимулирующие свойства дрожжей 60
2.6. Токсикологическая характеристика дрожжей 65
2.7. Производственные испытания сухих пивных дрожжей 69
3. Обсуждение и заключение 85
Выводы 94
Рекомендации производству 95
Список литературы 96
Приложение 121
- Фармакологические средства, применяемые для повышения продуктивности животных
- Необходимость изыскания альтернативы кормовым антибиотикам
- Анализ причин отхода поросят раннего возраста
- Иммуностимулирующие свойства дрожжей
Введение к работе
Актуальность темы. С целью повышения рентабельности при производстве продукции животноводства и птицеводства создавались более крупные свинокомплексы, фермы крупного рогатого скота и птицефабрики. Укрупнение хозяйств наряду с очевидными преимуществами в эксплуатации, возможностью автоматизации многих производственных процессов и более рационального использования трудовых ресурсов создало ряд проблем в области здоровья животных. Большая скученность, стресс, нарушение многих зоогигиенических норм (качество воздуха, температурный режим) стали негативно сказываться на здоровье животных и появлении иммунодефицитных состояний. Болезнетворные организмы, многократно пассажируясь на ослабленных животных, приобретали все более патогенные формы. В зависимости от приемов лечения и профилактики, а также применяемых лекарственных и - дезинфицирующих средств у возбудителей болезни, вырабатывалась устойчивость к этим средствам (Урбан В.П., 1983; Соколов В.Д.,1990, 2005; Придыбайло Н.Д.;1991; Андреева Н.Л., 1993; Курдеко А.П., 2005).
На практике эти процессы проявлялись вспышками заболеваний охватывающих большое поголовье животных. Повышалась заболеваемость молодняка диареей и болезнями органов дыхания. Снижался средний прирост массы-тела животных, увеличивалось количество павших, повышались затраты на корма и лекарственные средства, вследствие чего значительно снижались экономические показатели хозяйств. Для преодоления этих негативных явлений в животноводстве стали применять стимуляторы роста: гормоны, ферменты, иммуномодуляторы, пробиотики, а также кормовые антибиотики (Пивняк И.В., 1982; Соколов ВІД., Андреева H.JL, 1988; Антипов В.А., 1989; Соколова JI.H. и соавт., 1990; Ноздрин Г.А., 1994). Среди ростостимулирующих средств, наиболее эффективными оказались кормовые антибиотики, поэтому они стали чаще использоваться для этих целей.
Применение кормовых антибиотиков позволило значительно снизить негативное действие условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, повысить эффективность использования кормов, прирост живой массы, и устойчивость животных к инфекционным заболеваниям, уменьшить отход. Такой метод хозяйствования позволил повысить рентабельность в животноводстве и избавиться от некоторых острых проблем на протяжении нескольких десятилетий (Антипов В.А., 1989; Петрухин И.В., 1989; Соколов В.Д., Андреева Н.Л., 1990; Соколов В.Д. и соавт., 2001).
Однако со временем, наряду с положительными стали проявляться и отрицательные побочные действия от применения кормовых антибиотиков, как в самом животноводстве, так и негативно сказываться на состоянии здоровья населения как окончательного потребителя продукции животноводства, так как продукты животноводства содержали остаточные количества антибиотиков и их метаболиты. Кроме того, это выражалось в образовании новых штаммов болезнетворных микробов, устойчивых к применяемым длительное время в животноводстве кормовым и лечебным антибиотикам и, следовательно, снижения их эффективности при лечении животных и человека (Навашин СМ., Фомина И.П., 1982; Сидоренко СВ., 1998; Соколов В.Д., 2005).
Учитывая негативные факторы последействия кормовых антибиотиков в ряде Европейских стран, например, в Швеции и Дании эти препараты были запрещены для использования в животноводстве. В результате таких радикальных мер среди животных увеличилось количество больных желудочно-кишечными и респираторными болезнями, повысился расход корма на единицу продукции и резко снизились экономические показатели при производстве животноводческой продукции.
В этой связи возникла необходимость изыскания альтернативы кормовым антибиотикам. В качестве альтернативных средств стали более широко использовать адаптогены, иммуностимуляторы, органические кислоты и пробиотики, в том числе и дрожжи (Андреева Н.Л. и соавт., 1988, 2003; Антипов В.А., 1989; Соколова Л.Н., 2001, 2003; Ноздрин Г.А., 2003; Соколов В.Д., 2003; Аликин Ю.С. и соавт., 2006). При этом дрожжи, исходя из их промышленной наработки, в большей степени подходили для этих целей. Однако их нативные формы были не совсем удобны для применения, что сдерживало внедрение в производство этих весьма полезных веществ. В этом плане разработка и появление на ветеринарном рынке сухих пивных дрожжей, полученных по особой технологии, устранило неудобства применения нативных препаратов.
Предварительные исследования, проведенные в ряде стран (Ян Фрерикс, Германия; Емельянов А., Богданов В., Латвия; Соколов В.Д., Андреева Н.Л., Россия, Jerzy Pres, Польша; Zdzislav Mroz, Нидерланды) и доложенные на Международной конференции «Роль препаратов из пивных дрожжей в кормлении животных» показали перспективность этих препаратов.
Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение, апробация и внедрение в животноводство сухих пивных дрожжей Saccharomyces cerevisiae.
Длядостижения этого были поставлены следующие задачи:
1.Изучить фармако-токсикологические свойства сухих пивных дрожжей Saccharomyces cerevisiae.
2. Определить оптимальную эффективную дозу на лабораторных животных.
3. Определить уровень эффективности от применения сухих пивных дрожжей Saccharomyces cerevisiae в производственных условиях.
4.Разработать рекомендации по применению сухих пивных дрожжей Saccharomyces cerevisiae в животноводстве.
Научная новизна работы. Впервые изучены фармако-токсикологические свойства сухих пивных дрожжей, приготовленных по оригинальной технологии с промышленной наработкой.
Установлено влияние на организм животных различных доз препарата сухих пивных дрожжей, в том числе возможный токсический эффект.
Определена оптимальная доза препарата, которая дает наибольший ростостимулирующий эффект на лабораторных животных.
Отработаны оптимальные ростостимулирующие дозы препарата из пивных дрожжей и определен уровень эффективности на поросятах-отъемышах в производственных условиях.
Практическая значимость работы
Впервые отработаны оптимальные ростостимулирующие дозы и схемы применения сухих пивных дрожжей Leiber ВТ на поросятах-отъемышах в самый критический период их жизни. На основе этого разработаны рекомендации для применения в свиноводстве.
Важное практическое значение имеют данные, характеризующие ростостимулирующее влияние пивных дрожжей и повышение устойчивости организма животных к экстремальным факторам.
Основные положения, выносимые на защиту
Материалы по фармако-токсикологическим и ростостимулирующим свойствам новой кормовой добавки — сухие пивные дрожжи Leiber ВТ и рекомендации по их применению в свиноводстве.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:
• Международной конференции «Роль препаратов из пивных дрожжей в кормлении животных» (Юрмала, Латвия 23-25.09.2005).
• XVII Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». (Санкт-Петербург, 2005г.).
• III Международной конференции «Современные вопросы ветеринарной гомеопатии». (Санкт-Петербург, 2005 г.).
• XIX Международной научно-практической конференции ««Новые фармакологические средства в ветеринарии». (Санкт-Петербург, 2007 г.).
Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 8 печатных работах, в том числе в одном из научных журналов, входящих в список ВАК.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.
Объём диссертации 130 страниц. Список литературы включает 248 источников, в том числе 58 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 8 рисунками и 23 таблицами.
Фармакологические средства, применяемые для повышения продуктивности животных
Для повышения продуктивности животных используют ряд препаратов, которые принято подразделять на кормовые добавки (витамины, микроэлементы и др.) и эрготропики (Соколов В.Д., Андреева Н.Л., 1993). Эрготропные вещества не являются жизненно необходимыми для организма, но, тем не менее, повышают продуктивность животных, сохраняют и улучшают качество корма, качество получаемой продукции и обладают анаболическим эффектом. К эрготропикам относятся кормовые антибиотики, ферменты, пробиотики, пребиотики, экстракты различных растений, так называемые, кишечные стабилизаторы. Вторая группа эрготропиков представлена препаратами, стимулирующими обмен веществ. В эту группу входят иммуностимуляторы, гормоны и некоторые другие препараты. Кишечные стабилизаторы - это основная группа эрготропных средств, используемых в животноводстве и птицеводстве. Они нормализуют "микробный пейзаж" в кишечнике (антибиотики, пробиотики,органические кислоты) и облегчают переваривание кормов (Андреева Н.Л., 2004).
Кормовые антибиотики. Почти сразу же после внедрения антибиотиков и, в частности тетрациклинов, в лечебную практику ветеринарии было обнаружено их ростостимулирующее действие. Первое сообщение о ростостимулирующем влиянии хлортетрациклина на цыплятах сделал T.RJukes (1949). В дальнейшем эти данные были подтверждены целым рядом исследователей (Wouldroup P.W. et al.1967; Малатян Н.А., Смбытян Н.А., 1968; Cerulti F. et al.,1968; Polujanski P.,1968; Begin I., 1971). После открытия ростостимулирующего действия антибиотиков исследователи старались объяснить механизм его действия. В.М.Субботин (1964) считает, что малые дозы антибиотиков усиливают все физиологические функции пищеварительной системы не только в период их применения, но и в течение нескольких дней после окончания их введения. При этом степень усиления всех процессов пищеварения равняется в среднем 180 — 200%.
По мнению П.Д.Евдокимова (1964) наиболее объяснимым механизмом ростостимулирущего действия антибиотиков является их действие на кишечную микрофлору в благоприятном для организма направлении
Одновременно с установлением ростостимулирущего эффекта антибиотиков было замечено, что этот эффект достигается тогда, когда они задаются птице, страдающей различными хроническими заболеваниями пищеварительной и дыхательной системы (Smith H.W. et all., 1965). Авторы сообщали, что постоянное скармливание хлортетрациклина курам - несушкам в Англии экономически выгодно в птичниках с низкой яйценоскостью кур. Для птичников с высокой яйценоскостью добавление в рацион антибиотика неэкономично. Эти выводы согласуются с данными В.Ф.Грезина (1962), который сообщает, что при применении биомицина и террамицина отставшим в росте цыплятам был получен значительный ростоотимулирующий эффект, по сравнению с контрольной группой цыплят. В то же время применение указанных антибиотиков нормально растущим цыплятам не давало значительной прибавки в росте.
Но дальнейшее применение антибиотиков, особенно тетрациклинов в качестве ростостимулирующих средств, стало сдерживаться, так как они одновременно используются в лечебных целях, как в медицине, так и в ветеринарии. Поэтому тетрациклиновые антибиотики стали заменяться другими, а именно, кормовыми антибиотиками, предназначенными для стимулирования роста животных и отвечающим требованиям, предъявляемым к ним. В.Ф.Ковалев (1980) пишет, что кормовые антибиотики должны не только положительно влиять на рост и развитие животных, но и обладать следующими особенностями: не всасываться в желудочно-кишечном тракте и не загрязнять продукты животного происхождения; не применяться в лечебной практике; не обладать способностью образования у микроорганизмов множественной резистентности. В чем же состоит ростостимулирующий эффект антибиотиков? Выясняя механизм ростоотимулирующего действия антибиотиков исследователи констатировали, что малые дозы тетрациклинов, как и некоторых других антибиотиков, положительно влияют на процессы пищеварения. При этом увеличивается секреция фосфотаэы и энтерокиназы, увеличивается содержание каротиноидов и витаминов группы В, улучшается переваримость азотистых веществ и жира, повышается активность каталаэы крови И целый ряд других показателей, характеризующих активизацию обмена веществ (Курилов Н.В., 1959; Кивман Г.Я., Порфирьева Р.П., 1961;Marmori 1962; Чайкина О.А., 1963; Котова М.В., 1963; Тараканов Б.В., 1965; Майоров A.II;,1966;Kordic В. et al.,1975; Егоров Н.С., 1979; Bericht V., 1981; Pensack І.М et al 1982; Bungartz F., 1983; Papparella V. et al.1983 и др.) Многие авторы считают, что механизм ростоотимулирующего действия антибиотиков, в том числе кормовых, связан с влиянием антибиотических средств на кишечную микрофлору. Кроме того, кормовые антибиотики содержат в своем составе еще целый ряд биологически активных веществ - продуктов биосинтеза микроорганизмов, которые активируют обменные процессы в организме и оказывают комплексное воздействие, при котором основным, остается антибиотический эффект, так как ростостимулирующим действием обладают и"чистые" антибиотики (Мозгов И.Е., 1971; Субботин В.М. и соавт., 1981, 1884; Михалевский Н.П., 1982,1984; Шахов А.Г, и соавт. 1982; Субботин В.М., Панфилова В.И., 1982,1984; Антипов В.А., 1982, 1988; Субботин В.М., Сыздыкова Г.Т., 1989). Так, И.Е.Мозгов (1985) считает, что действие антибиотиков заключается в активизации функциональной деятельности пищеварительного тракта и в улучшении обмена веществ. Применяя стимулирующие дозы антибиотиков, автор установил усиление активности ферментов кишечника. Это действие проявляется уже через несколько минут после введения антибиотика с кормом, то есть значительно раньше, чем могло бы проявиться антимикробное действие. Аналогичное действие наблюдал В.Д.Соколов (1984) после применения с кормом субтерапевтических доз тетрациклинов. То есть антибиотики в стимулирующих дозах значительно улучшают обмен веществ, координацию физиологических процессов, активизируют защитные силы и таким образом, оказывают благоприятное влияние на развитие, рост и продуктивность животных.
При этом изменения в организме зависят от вида антибиотика, и дозы. По данным Г.Т.Сыздыковой (1990) введение тилана и фармазина телятам в дозах 2500 и 5000 ЕД/кг вызывало повышение уровня общего белка и его фракций на всем протяжении эксперимента (10 суток введения и 90 суток после) с более выраженным эффектом в дни введения и 15 суток после. Повышение уровня общего белка в эти дни было в пределах 9:,3...33,3%, альбуминов 37,4...47,9%, глобулинов 16,7...51,0%, с преимущественным повышением гамма -глобулинов и меньшими изменениями в концентрации бета - глобулинов.
Необходимость изыскания альтернативы кормовым антибиотикам
Эффективность антибиотиков в борьбе с инфекционными болезнями известна с начала сороковых годов прошлого столетия, когда англичанам, используя пенициллин, удалось предотвратить сепсис у военных как после ранений, так и хирургических операций. Но уже в 1947 году констатировали резистентность к пенициллину. Это означало, что бактерии могут противостоять столь эффективному орудию борьбы. (McManus М.С., 1997).
В 1986 году в США были опубликованы результаты исследований доказавпше, что резистентные микроорганизмы у поголовья животных сохраняются ещё 13 лет после прекращения применения кормовых антибиотиков! До этого было распространено мнение, что резистентность исчезает одновременно с прекращением применения антибиотиков. Резистентность превратилась в практически неразрешимую проблему, т.к. гены резистентности к антибиотикам могут передаваться от одной бактерии другим (Langlois В.Е., Dawson К.А., Cromwell G.L., Stanly T.S., 1986).
Проблема резистентности микроорганизмов к антибиотикам вовлекла фармацевтическую промышленность в нескончаемую гонку и требовала от нее разработки все новых поколений более сильных антибиотиков. Понимая, что такое состязание между миром микроорганизмов и фармакологической промышленностью не может продолжаться бесконечно долго и закончится отнюдь не в пользу фармакологов, некоторые ученые стали задумываться над тем, как разорвать порочный круг.
Во-вторых, антибиотики попадали в продукты питания. Причиной такой ситуации зачастую являлись: 1. Ошибки в технологии применения кормовых антибиотиков. 2. Неправильный выбор антибиотика, без определения на чувствительность к нему патогенной флоры. 3. Погрешности в расчете оптимальной дозы. 4. Чрезмерное использование антибиотиков для лечения вспышек заболеваний, желая любыми путями их погасить. 5. Нарушение технологии приготовления кормов (недостаточная точность дозировочного оборудования и недостаточная тщательность перемешивания, добавленных антибиотиков с составными частями кормов). 6. Зачастую владельцы животных, не придавая особого значения этому вопросу, либо сознательно не желая нести убытки, нарушали сроки ограничения использования продуктов животноводства, полученных от леченных антибиотиками животных, сдавали скот на убой, либо полученное от них молоко на переработку. 7. Отсутствие чувствительных лабораторных методик, позволяющих определить остаточное количество тех или иных антибиотиков в продуктах питания или сырье, предназначенном для переработки. По указанным выше причинам, население невольно тоже становилось потребителем кормовых антибиотиков, как конечное звено пищевой цепочки..
Однако благодаря развитию технологий лабораторных исследований стало возможным находить в продуктах питания (мясе, яйцах, молоке) остаточные количества некоторых применяемых кормовых антибиотиков, которые впоследствии запрещались к использованию. Всё более новые исследования доказывают, что использование кормовых антибиотиков» в животноводстве напрямую связано с явлением резистентности бактерий при лечении людей.
Средства массовой информации, иногда гипертрофируя, уделяли данной проблеме довольно много внимания, формировали в обществе негативное отношение к применению кормовых антибиотиков. Из-за этого у населения росло недоверие к продуктам питания животноводства, что влекло за собой снижение потребления и спроса на данную продукцию.
Анализ причин отхода поросят раннего возраста
После отъема поросят от матки у них изменяется весь процесс существования: появляется новая среда обитания, изменяется тип кормления, как и сами корма, исчезает опека (защита) матери, возникают конфликты с другими, новыми особями. При этом смешивание поросят нескольких пометов в одном станке вызывает у них новые проблемы, связанные с сохранением или приобретением «первенства», выяснение ранговых отношений, что приводит к дракам, травмам и беспокойству. Поросята меньше отдыхают, у них уменьшается аппетит (надо привыкать к новому корму), изменяется микроклимат, газовый и температурный режим, что само по себе является стрессом. В этот период, как указывают С.И.Плященко и В.Т.Сидоров (1983), активируется симпатико-адреналовая и гипоталамус-аденогипофиз-адренокортикальная системы, что приводит к существенным изменениям в обменных процессах и иммунобиологической реактивности, которые наряду с другими факторами играют важную роль в возникновении ряда заболеваний, особенно желудочно-кишечных, регистрируемых в послеотъемный период.
Анализ показывает, что в отъемный период у поросят резко увеличивается количество диарей, затем появляются бронхопневмонии, авитаминозы и другие нарушения обмена веществ, отчего снижаются привесы животных и возникают летальные исходы. При этом пик возникновения количества диарей приходится на первую неделю после отъема, что согласуется с результатами наблюдений С.Н.Гурьянова и соавт. (1991), Э.Е.Шутова (1994) и других исследователей. Стрессовое состояние организма поросят после отъема подтвердилось и иммунобиохимическими исследованиями крови, которые провели через 3, 24, 48 и 72 часа после отъема (табл.2). Данные таблицы 2 показывают, что сразу же после отъема в организме поросят происходят выраженные иммунобиохимические изменения, среди которых некоторые являются постоянными показателями, «медиаторами» стрессовых реакций. Уже через 8 ч после отъема в крови поросят резко увеличивается содержание лейкоцитов - с 14,8 х 109/л до 26,7 х 109/л, т. е. почти в два раза. Возрастает активность лизоцима с 16,1% до 24,7% (в полтора раза); увеличивается содержание глюкозы (превращение гликогена печени в глюкозу) с 7,1 ммоль/л до 9,7 ммоль/л; иммуноглобулина G - с 16,3 г/л до 21,4г/л. Одновременно с этим увеличивалось накопление конечного продукта перекисного окисления липидов (ПОЛ) - малонового диальдегида (МДА) с 0,7 до 0,9 мкмоль/л. Следовательно, организм отвечает защитными реакциями на возникновение чрезмерного раздражителя, каким является отъемный стресс.
При исследовании указанных показателей через 24 часа после стресса их уровень постепенно снижался, однако оставался выше фоновых, достоверное увеличение наблюдалось лишь лейкоцитов и глюкозы. Что же касается МДА, то в это время наблюдалась интенсивность его накопления. Активность лизоцима и содержание иммуноглобулина G хотя и было выше фоновых, но оказалось статистически недостоверным.
На третьи сутки почти все исследуемые показатели стрессовой реакции стабилизировались, за исключением МДА, концентрация которого вновь увеличивалась. Полученные результаты согласуются с данными Є.НТурьянова (1993); Э.Е. Шутова (1994); М.Э. Онуфриенко (1996) и другими исследователями.
Таким образом, ответная реакция на стресс характеризуется резким увеличением (выбросом) в крови лейкоцитов, лизоцима, иммуноглобулина G, глюкозы, МДА. Все эти медиаторы являются одновременно естественными факторами защиты организма, за исключением МДА, который указывает на усиление перекисного окисления липидов. В то же время весьма возможно, что и усиление перекисного окисления липидов также является определенной защитной реакцией, за счет перевода жиров в энергетически востребованные вещества. Видно, что налицо четкие, закономерно протекающие сдвиги иммунологической защиты организма в ответ на стресс, каким является отъем поросят. Однако, «защищаясь» от стресса, организм, по-видимому, становится уязвимым к другим патологиям, поскольку как раз в моменты нормализации иммунобиохимических показателей у поросят появляются диареи и возникают бронхопневмонии.
В этом же периоде значительно увеличивается количество заболеваний желудочно-кишечного тракта, проявляющихся диареями. Наши результаты согласуются с данными Э.Е.Шутова (1994), полученными при изучении динамики возникновения диарей у поросят.
На первом экспериментальном этапе работы изучили ростостимулирующие свойства и возможное негативное действие сухих пивных дрожжей на лабораторных животных - белых крысах.
В стандартный гранулированный корм подопытных лабораторных животных (молодые растущие белые крысы) добавляли сухие пивные дрожжи. Для этого взяли 5 групп животных: четыре подопытных и одну контрольную по 20 голов в каждой. Намечали испытать четыре дозы кормовой добавки 2,5; 5; 7,5 и 10% к корму.
Всех животных взвешивали перед экспериментом, через 15 и затем через 30 дней после начала опыта. В конце опыта все животные были убиты и проведено патологоанатомическое вскрытие, а также была взята кровь для клинических и иммунобиохимических исследований.
За время эксперимента, который продолжался 30 дней, животные не проявляли признаков беспокойства, охотно поедали корм и пили воду (особенно животные 1 и 2 групп, получавших пивные дрожжи в дозе 2,5 и 5% к корму). У животных 4-й группы, получавших пивные дрожжи в дозе 10% к корму, аппетит был несколько понижен, особенно в последней декаде эксперимента, однако они также были подвижными и охотно пили воду.
Анализ полученных результатов показывает, что влияние сухих пивных дрожжей на рост и развитие белых крыс зависит от дозы кормовой добавки. Наилучшие показатели по сравнению с контрольными животными получены при внесении в рацион крыс 2,5% сухих пивных дрожжей. Прирост живой массы в этой группе у животных составил 21,2 г или 120,1% по отношению к приросту живой массы контрольных животных (17,5 г). При дозе кормовой добавки 5% к рациону прирост живой массы составил 18,4 г или 105% к приросту живой массы животных контрольной группы. Доза 7,5% практически не стимулировала прирост массы, которая была 17,7 г, т.е., как и в контрольной группе. Добавление в рацион белых крыс кормовой добавки в количестве 10% отрицательно сказалось на росте и развитии животных. Прирост живой массы в этой группе составил всего 5,45 г или 69% против 100% в контрольной группе.
При патологоанатомическом вскрытии животных в конце эксперимента видимых паталогоанатомических изменений во внутренних органах у белых крыс всех подопытных групп обнаружено не было. В то же время-у животных 3-й группы (доза 10% кормовой добавки) в 15% случаев наблюдался метеоризм толстого отдела кишечника.
Подобная закономерность более позитивного влияния дозы 2,5% сухих пивных дрожжей к рациону белых крыс прослеживается и при анализе гематологических и иммунобиохимических показателей крови животных, исследуемых после завершения введения кормовой добавки в корм. В крови животных первой группы (доза 2,5%) наблюдалось более высокое содержание эритроцитов, чем при использовании других доз 5 и 10% (8,88 против 8,57 и 7,26х1012/л) и гемоглобина (146,5 против 140,3 и 136,8 г/л). В этой же группе животных, к стати единственной, указанные гематологические показатели были несколько выше, чем в контрольной группе. Одновременно с этим в крови этой группы была замедлена СОЭ по отношению к другим группам животных, в том числе и к контролю, причем в данном случае результаты были статистически достоверными (1,8 против 4,3 мм/ч в контроле, Р 0,001).
Иммуностимулирующие свойства дрожжей
В следующем опыте выяснили возможные иммуностимулирующие свойства сухих пивных дрожжей. Для этого использовали иммуносупрессор циклофосфан (так называемый прямой метод) и изучили профилактическую и лечебную эффективность дрожжей на модели экспериментального колибактериоза белых крыс (опосредованный метод). Животных заражали культурой кишечной палочки (серовар 078), предварительно оттитрованной дозой, вызывающей гибель 50-55% животных. Сухие пивные дрожжи вводили внутрь в ранее отработанных дозах 3, 5 и 10 % к рациону. С профилактической целью препарат назначали в течение 7 дней до заражения, с лечебной целью в течение 7 дней подряд после заражения. Из таблицы 7 видно, что сухие пивные дрожжи оказались достаточно эффективными при экспериментальном колибактериозе белых крыс. При этом эффективность препарата зависела от дозы. Так, при дозе 3% к рациону профилактическая эффективность составила по заболеваемости 75% и по сохранности 90%, при дозе 5% , соответственно 85- 95% и при дозе 10%: 90 -100%. Лечебная эффективность сухих пивных дрожжей была ниже профилактической и составила: при дозе 5% - 70%; при дозе 3% - 80% и при дозе 10% - 85%. Учитывая, что в условиях производства иногда бывает трудно определить точно для каждого животного, с какой целью назначается препарат, особенно при массовых применениях (в стаде находятся и больные и здоровые животные), выяснили лечебно-профилактическую эффективность сухих пивных дрожжей. С этой целью испытали те же дозы препарата, но его вводили за 3 дня до заражения и спустя 5 дней подряд после заражения белых крыс (табл. 8).
Анализ таблицы 8 показывает, что лечебно-профилактическое назначение сухих пивных дрожжей при экспериментальном колибактериозе белых крыс оказалось таким же эффективным, как и профилактическое применение препарата. При назначении сухих пивных дрожжей в дозе 10% к рациону сохранность животных составила 95%. В то же время и меньшие дозы препарата, также обладали выраженным лечебно-профилактическим действием, эффективность которого составила 80 — 90%. В зараженном контроле сохранность составила 45%.
Сообщение В.М.Земскова и соавт. (1977) о повышении устойчивости различных тканей внутренних органов белых мышей, получавших иммуностимулятор РНК, к эшерихиям, побудили нас провести подобный опыт на белых мышах, с предварительным назначением сухих пивных дрожжей (3% к рациону на протяжении 3-х недель).
Оказалось, что содержание эшерихий в органах и тканях контрольных белых мышей (кровь, печень, селезенка, почки) было примерно одинаковым и составляло 900-1000 микробных клеток в 1 мг. Совсем другую картину у подопытных мышей, у которых содержание эшерихий в указанных, органах было в несколько раз меньше и колебалось в пределах 200-350 микробных клеток.
Таким образом, сухие пивные дрожжи, примененные за 3 недели до заражения, повышали устойчивость организма белых мышей к бактериальным агентам за счет активации защитных сил (показатели естественной резистентности). Установили, что циклофосфан обладал выраженным иммуносупрессорным действием. На 15 день от начала эксперимента у крыс, которым инъецировали цитостатик, наступало иммунодефицитное состояние. Содержание общего белка в крови снизилось на 36%, Ig G на 30,4%, активность лизоцима на 28%, количество лейкоцитов на 25,5% и лимфоцитов на 23,3%. Весьма характерно, что на этом фоне четко проявились корректирующие (иммуностимулирующие свойства пивных дрожжей.
Таким образом, проведенные исследования по выяснению возможных защитных свойств сухих пивных дрожжей, показали, что эта биологически активная кормовая добавка, проявляет иммуностимулирующее действие, которое проявляется в повышении эффективности при экспериментальном колибактериозе, снижении обсемененности органов и тканей животных кишечной палочкой и в корректирующем влиянием на иммунодефицитное состояние организма.
Незыблемое правило фармакологии и токсикологии при внедрении в практику нового фармакологического средства состоит в том, что у каждого нового препарата, внедряемого в ветеринарную практику, предварительно определяют два основных параметра: эффективность и безвредность, которые выясняют экспериментальными исследованиями по определенным тестам и проверяют в условиях производства.
Поэтому в дальнейших опытах выяснили возможные токсикологические эффекты препарата для лабораторных животных, изучив острую и подострую токсичность препарата по тестам, рекомендуемым для этой цели. Опыты провели на белых мышах и крысах. При определении острой токсичности сухих пивных дрожжей, в частности ЛД50 и ЛДюо нам не удалось установить эти показатели, поскольку максимально вводимые разовые дозы препарата не вызывали гибели лабораторных животных и птиц. В силу этого рассчитанная гипотетически ЛД50 сухих пивных дрожжей для крыс была более 15000мг/кг, а для мышей более 12500 мг/кг, что говорит об очень низкой токсичности препарата, если учесть тот факт, что по токсической классификации препараты, у которых ЛД50 превышает 1000 мг/кг относятся к малотоксичным соединениям.
В подостром опыте препарат задавали на протяжении 30 дней подряд в дозах в 2 и 3 раза превышающих оптимальные. Учитывали прирост живой массы, рост и развитие внутренних органов, гематологические и некоторые иммуно-биохимические показатели. Данные таблицы 10 показывают, что увеличение дозы сухих пивных дрожжей в 2 и 3 раза по сравнению с оптимальной практически не влияло на гематологические показатели и содержание глюкозы в крови белых крыс при месячном назначении препарата. В то же время проявлялась некоторая тенденция снижения содержания гемоглобина и увеличения лейкоцитов в крови белых крыс, получавших дозу држжей в 3 раза превышающую оптимальную по сравнению с животными, получавшими оптимальную дозу и контрольными животными. Однако эти различия оказались статистически недостоверными.