Содержание к диссертации
Введение
1 Общая характеристика работы 4
2 Обзор литературы 8
2.1 Биологическое действие диоксинов и диоксинподобных веществ
2.2 Биологическое действие Т-2 токсина 27
2.3 Смешанные токсикозы 34
3 Материалы и методы исследований 39
4 Результаты собственных исследований 42
4.1 Изучение сочетанного действия диоксина и Т-2 токсина на организм белых крыс
4.1.1 Клинико-гематологические и биохимические исследования
4.1.2 Показатели естественной резистентности и иммунобиологической реактивности
4.2 Изучение сочетанного действия диоксина и Т-2 токсина на белых крысах на фоне применения бентонита с димефосфоном
4.2.1 Клинико-гематологические и биохимические исследования
4.2.2 Показатели естественной резистентности и иммунобиологической реактивности
4.3 Изучение сочетанного действия диоксина и Т-2 токсина на организм кроликов
4.3.1 Клинико-гематологические исследования 53
4.3.2 Показатели белкового обмена 54
4.3.3 Показатели естественной резистентности и иммунобиологической реактивности
4.4 Изучение влияния бентонита с димефосфоном на организм кроликов при отравлении диоксином и Т-2 токсином
4.4.1 Клинико-гематологические исследования 59
4.4.2 Показатели белкового обмена 61
4.4.3 Показатели естественной резистентности и иммунобиологической реактивности
Обсуждение результатов исследований 73
Выводы 86
Практические предложения 87
Список использованной литературы 88
- Биологическое действие Т-2 токсина
- Клинико-гематологические и биохимические исследования
- Изучение сочетанного действия диоксина и Т-2 токсина на организм кроликов
- Клинико-гематологические исследования
Введение к работе
1.1. Актуальность темы. В связи с возрастающим антропогенным воздействием на окружающую среду все чаще в кормах обнаруживаются токсиканты как природного, так и техногенного происхождения.
Среди техногенных загрязнителей большую опасность для животных и человека представляют диоксины, которые поступают в биосферу в виде микропримесей с продукцией или отходами многочисленных технологий.
Диоксины - это обобщенное название большой группы полихлорированных дибензодиоксинов (ПХДД), полихлорированных дибензофуранов (ПХДФ), которые представляют собой гетероциклические полихлорированные соединения с очень близкими химическими свойствами (Федоров Л.А., Мясоедов Б.Ф.,1990; Новиков В.А., Тремасов М.Я., 2004; Жуленко В.Н., 2004; Иванов А.В. и др. 2006; Аргунов М.Н. и др. 2007; Желтов В.А., 2008; McKineyJ. etal.,1982).
Самый известный и наиболее токсичный из них 2,3,7,8- тетрахлордибензо-пара-диоксин (2,3,7,8-ТХДД), по отношению к которому часто применяется термин «диоксин». В прошлом веке в мире произошло более 200 аварийных выбросов диоксина, в том числе и в России (Абульханов А.Г., Сабирова А.И., 1996; Марковский О.Ю., 2005; Ревич Б.А. и др., 2006; Первунина Р.И. и др., 2006; Желтов В.А., 2007).
К природным экотоксикантам относятся микотоксины, среди которых наиболее опасным для животных является Т-2 токсин, вырабатываемый грибами рода Fusarium (Саркисов А.Х., 1985; Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1985; Петрович СВ., 1991; Смирнов A.M., Таланов Г.А. и др., 1999; Кузнецов А.Ф., 2001; Иванов А.В., Тремасов М.Я., Папуниди К.Х., 2008). Микотоксины отличаются высокой токсичностью, а многие из них обладают мутагенными, тератогенными, канцерогенными и иммуносупрессивными свойствами.
Не исключена возможность одновременного загрязнения кормов природными и техногенными экотоксикантами. Известны случаи отравления животных полихлорированными бифенилами в сочетании с тяжелыми металлами (Крятов И.А., 1991; Иванова Ю.В., 2004), Т-2 токсина с пиретроидами (Тремасов М.Я. и др., 2005). На территориях, пораженных грибом продуцентом Т-2 токсина, могут возникнуть аварийные ситуации, связанные с выбросом химических веществ, содержащих диоксины. Поэтому существует реальная опасность сочетанного действия Т-2 токсина и диоксина на животных. В то же время, в литературе мы не встретили данных о сочетанном воздействии диоксина и микотоксинов на организм животных, хотя вероятность таких поражений очевидна.
Диоксин и Т-2 токсин, попадая в организм, приводят к нарушению обменных процессов и могут быть причиной низкой продуктивности и повышенной чувствительности животных к инфекционным и незаразным заболеваниям.
В связи с этим изучение сочетанного действия токсикантов, поиск и разработка эффективных и доступных средств для лечения и профилактики отравлений животных, вызванных микотоксинами и диоксинами, является актуальной задачей.
1.2. Цель и задачи исследования. Целью данных исследований было изучение токсического действия диоксина и Т-2 токсина при совместном поступлении их в организм животных, а также оценка эффективности лекарственных средств при отравлении этими токсикантами.
В этой связи перед нами были поставлены следующие задачи: • Изучить клинические признаки отравлений, морфологические и биохимические показатели крови при сочетанном воздействии диоксина и Т-2 токсина на животных.
• Выяснить влияние совместного действия диоксина и Т-2 токсина на естественную резистентность животных.
• Изучить патоморфологические изменения в органах и тканях животных при сочетанном пероралыюм поступлении в организм диоксина и Т-2 токсина.
• Провести оценку эффективности лекарственных средств при сочетанном отравлении животных диоксином и Т-2 токсином.
1.3. Научная новизна работы. Установлено взаимоусиливающее токсическое действие диоксина и Т-2 токсина при сочетанном поступлении их в организм животных. Впервые изучено влияние сочетанного воздействия диоксина и Т-2 токсина на гематологические и биохимические показатели, естественную резистентность и гистоструктуру тканей внутренних органов крыс и кроликов.
Изысканы лекарственные средства и показана лечебная эффективность бентонита с димефосфоном при сочетанном отравлении животных диоксином и Т-2 токсином.
1.4.Нрактическая ценность работы. Проведена токсикологическая оценка сочетанного воздействия диоксина и Т-2 токсина на животных, которую следует учитывать при санитарной оценке кормов и диагностике отравлений.
Разработан способ снижения токсической нагрузки и коррекции естественной резистентности организма путем перорального введения бентонита и димефосфона при комбинированном воздействии диоксина и Т2 токсина на животных. Результаты исследований вошли в " Рекомендации по диагностике, профилактике и лечению токсикозов животных, вызванных диоксинами".- М.: ФГНУ " Росинформагротех", 2006 и " Временную инструкцию по применению димефосфона и левамизола при отравлении животных диоксином " (Утв. ГУВ КМ РТ 26.08.2006 г.).
1.5. Основные положения, выносимые на защиту:
• Клинические признаки, морфологические и биохимические показатели крови, показатели естественной резистентности, патоморфологические изменения во внутренних органах и тканях при сочетанном воздействии диоксина и Т-2 токсина на животных.
• Лечебная эффективность бентонита с димефосфоном при сочетанном отравлении животных диоксином и Т-2 токсином.
1.6. Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены на ежегодных научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ» по рассмотрению и обсуждению отчетов о НИР за 2005-2008гг., всероссийских и международных научно-практических конференциях (Казань 2005; 2006; 2007; Воронеж 2007; 2008; Екатеринбург 2008).
1.7. Публикации. По материалом диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе две - в реферируемых ВАК изданиях.
1.8. Объём и структура работы. Диссертация изложена на 108 страницах компьютерного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, методов и результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа иллюстрирована 17 рисунками и содержит 14 таблиц.
Список литературы включает 204 литературных источника, в том числе 93 зарубежных авторов.
Биологическое действие Т-2 токсина
Т-2 токсин - один из представителей многочисленной группы трихотеценовых микотоксинов, обладающий сильнейшим токсическим действием (Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1985; Хмелевский Б.А. и др., 1985; Петрович СВ., 1991; Котик А.Н., 1999; Кузнецов А.Ф., 2001; Тремасов М.Я., 2002; Oswald LP., Comera С, 1998). Впервые был выделен в США Bamburg с соавторами в 1968 году из культуры гриба F. trincinum Т-2, изолированного из плесневелой кукурузы (Bamburg J. et al., 1968).
Основным продуцентом Т-2 токсина является Fusarium sporotrichioides, наиболее интенсивное накопление токсинов наблюдается при повышенной влажности и пониженной температуре (Билай В.И., 1977).
Гриб-продуцент широко распространен в природе, особенно в средней полосе Российской Федерации, где наиболее благоприятные климато-географические условия для его развития. В годы эпифитотии фузариоза колоса в основных зерносеющих регионах России (Северный Кавказ, Центрально - Черноземный район) поражение колоса штаммами суперпродуцентами достигает 100% (в среднем - около 65%) (Монастырский О.А., Коган Ю.Д., 2001).
F.sporotrichiella - наиболее частый контаминант пищевой продукции и кормов среднего Поволжья. Этот гриб был выделен в 70% случаев из образцов кормов и сельхозпродукции, отобранных в различных районах Республики Татарстан. Около 40% изолятов обладали токсическими свойствами, 14% изолятов продуцировали трихотеценовые микотоксины, абсолютное большинство из которых составляли Т-2 токсин и НТ-2 токсин (Тремасов М.Я. и др., 2000).
Имеются данные о высокой частоте (до 40-50%) случаев обнаружения Т-2 токсина в отдельные годы в зерне пшеницы, ячменя и овса в ряде Европейских стран - Польше, Финляндии (Smith J., Levis С, 1998).
Характерной картиной отравления Т-2 токсином является клиника АТА - алиментарной токсической алейкии, вызываемое потреблением пищи, загрязненной грибом F. sporotrichiella. Это типичный микотоксикоз, характеризующийся очаговостью, сезонностью, связью с потреблением корма, загрязненного микроскопическими грибами (Саркисов А.Х., 1954). Заболевание характеризуется явлениями общего токсикоза (слабость, недомогание), рвотой, диареей, прогрессивной лейкопенией, гранулоцитопенией и умеренным лимфоцитозом. Нарушения крови, характерные для 1-й и 2-й стадий, усугубляются в 3-ей. Смертность при АТА достигает 60 % (Билай В.И., Пидопличко Н.М., 1970).
В клинической картине трихотеценовых микотоксикозов выделяют следующие наиболее часто встречающиеся симптомы: отсутствие аппетита, отказ от корма, рвота; развитие геморрагического синдрома; нарушение функций желудочно-кищечного тракта; дерматотоксический эффект (воспалительные изменения, некрозы, отеки); лейкопения, тромбоцитопения, анемия, в частности при подостром и хроническом течении токсикоза; выраженные деструктивные изменения кроветворных и иммунокомпетентных органов (Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1985). Для Т-2 токсина характерны дерматотоксические свойства. Например, при остром и подостром Т-2 токсикозе у свиней и овец наблюдаются эрозии и некрозы кожи губ и слизистых оболочек ротовой полости и глотки, у кур — некротические поражения слизистой ротовой полости, у крыс и мышей — эксудативные дерматиты и гиперкератоз кожи вокруг рта, некрозы слизистой оболочки ротовой полости, при гистологическом исследовании обнаруживаются некроз эпидермиса, поражения эндотелия мелких сосудов, увеличение числа и дегрануляция тучных клеток особенно в подкожном слое (Ображей А.Ф., 1997; Рухляда В.В., 1983; Yarom R., Bergman В., Yagen В., 1987).
У животных отмечаются признаки поражения центральной нервной системы. Так, у лабораторных животных и телят наблюдаются нарушения координации движений, парезы задних конечностей; у овец — тремор, ослабление тактильной и болевой чувствительности, атаксия и частичная потеря зрения; у кур - опущенность крыльев, вытягивание головы, малоподвижность, принятие неестественных поз (Ображей А.Ф.,1997; Рухляда В.В. 1982, 1983;Уразаев А.Н., Сметов П.К., 1996) Т-2 токсин ингибирует синтез протеинов печени (Melone J., Smith Т., 1995; Смит Т., 2002), что приводит к гипераминоацидемии - избытку свободных аминокислот, увеличению концентрации в мозге триптофана, и в конечном итоге серотонина (McDonald Е. et al., 1988). Рвота является постоянным симптомом фузариотоксикозов сельскохозяйственных животных. Это связано с тем, что Т-2 токсин стимулирует триггерные зоны продолговатого мозга. (Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1985). Наряду с рвотой у крыс, мышей, кошек, кроликов, цыплят, овец и крупного рогатого скота постоянно встречается диарея (Рухляда В.В., 1985; Ueno Y., 1985; Schiefer Н., 1986). В молекулярном воздействии микотоксинов выделяют три важнейших механизма: 1) ингибирование синтеза протеина, ДНК и РНК и образование аддуктов ДНК; 2) нарушение структуры мембран и инициирование липидного переокисления; 3) запуск запрограммированной клеточной гибели (апоптоза) - непосредственно воздействуя на специфические ферменты, либо через изменение баланса антиоксидант/прооксиданты в клетке, в частности, путем снижения содержания глютатиона (Сурай П., 2002).
Действие Т-2 токсина, как и некоторых других микотоксинов, в живом организме вызывает серьезные деструктивные изменения в кроветворных и иммунокомпетентных органах. Многочисленными исследованиями показано, что органами-мишенями Т-2 токсина являются костный мозг, селезенка, вилочковая железа, лимфоидная ткань, а у птиц еще и фабрициева сумка (Красников В.В., Кленина Н.В., Антонов B.C., 1992; Omar Rabea et al., 1996 ).
Многие исследователи считают, что в основе биохимического механизма действия трихотеценовых микотоксинов лежит их ингибирующее действие на биосинтез белка (Тутельян В.А., Кравченко Л.В., 1981; Oldham J et al., 1980; Rasenstein Y., С Lafarge-Frayssint, 1983; Ueno Y. et al., 1983).
Клинико-гематологические и биохимические исследования
В первой группе, где давали один диоксин, клинические признаки отравления отсутствовали. Масса животных оставалась на уровне фоновых величин. Во второй группе, животным которой давали микотоксин Т-2, клинические признаки проявлялись в виде общего угнетения, вялости, диареи. Живая масса к концу опыта снизилась на 7%. Падежа животных не было. Через 10 дней после окончания затравки признаки интоксикации исчезли, поведение опытных крыс не отличалось от интактных.
У животных третьей группы, которым задавали одновременно диоксин и Т-2 токсин, клинические признаки появились на 7 день затравки в виде общего угнетения, вялости, понижения аппетита либо его отсутствия, диареи, взъерошенности шерстного покрова, тремора, нарушения координации движения, в уголках рта — признаки некроза. У некоторых крыс наблюдались слизистые истечения из ноздрей, что является характерным признаком ринита. Масса тела на 10 и 20 сутки снизилась на 13 и 23%, соответственно.
На 8-9й день затравки пало 4 крысы. С 10 по 17 сут пало 16 крыс. На 23-25 день пало 6, на 26 и 30 дни - по 2 крысы. В течение месяца все 30 животных этой группы пали (6 крыс было убито для проведения гематологических, биохимических и патоморфологических исследований).
При отравлении белых крыс диоксином количество эритроцитов на 10 и 20 сут уменьшилось на 15 и 12% , гемоглобина - на 19 и 26%, лейкоцитов -на 12 и 20%, соответственно. При затравке белых крыс Т-2 токсином содержание эритроцитов и гемоглобина существенно не изменялось. Количество лейкоцитов на 20 сут снижалось на 25%. При одновременной затравке крыс диоксином и Т-2 токсином количество эритроцитов на 20 сутки снизилось на 16%. Наблюдалось снижение количества лейкоцитов на 10 и 20 сут на 18 и 31% соответственно.
В первой группе при затравке диоксином изменений в содержании общего белка не наблюдалось. Концентрация альбуминов на 20 день уменьшилась на 12%, В-глобулинов — повысилась на 12%. У животных второй группы, затравленных Т-2 токсином, на 20 день общий белок понизился на 17%, в это время наблюдалось повышение концентрации ос-глобулинов на 25%. Количество В-глобулинов на 10 и 20 сут снижалось на 14 и 30%.
При введении животным 1/200ЛД5о диоксина фагоцитарная активность и фагоцитарное число на протяжении всего опыта существенно не изменялись. Фагоцитарный индекс и фагоцитарная емкость на 20 сут снизились на 11 и 43% соответственно. Активность лизоцима оставалась в пределах фонового уровня.
У крыс, которым вводили Т-2 токсин в дозе 1/10 ЛД5о, фагоцитарная активность на 10 и 20 сут повысилась на 13 и 18%. Фагоцитарный индекс и фагоцитарная емкость нейтрофилов к 20 сут понизились на 26 и 41% соответственно. Незначительное снижение активности лизоцима на 12% наблюдалось на 10 сутки.
При комбинированном отравлении крыс диоксином и Т-2 токсином отмечалось понижение всех показателей фагоцитоза. Фагоцитарная активность на 10 и 20 сутки понизилась на 18 и 31%; фагоцитарное число — на 44 и 58%; фагоцитарный индекс - на 21 и 37%; фагоцитарная емкость - на 54 и 71%, соответственно. Наблюдалось понижение активности лизоцима к 10 и 20 сут на 33 и 44% .
В первой группе крыс, при затравке диоксином в дозе 1/200 ЛД50, количество Т-лимфоцитов колебалось на уровне фоновых величин, количество В-лимфоцитов снижалось на 10 и 20 день на 28 и 39%. У крыс, которым давали только Т-2 токсин, количество Т-лимфоцитов снижалось на 20 сутки на 15%, В-лимфоцитов - на 10 и 20 сут на 12 и 16%. У животных третьей группы наблюдалось снижение содержания на 20 сут Т-лимфоцитов на 13%; В-лимфоцитов - на 15% .
Таким образом, при сочетанном воздействии диоксина в дозе 1/200 ЛДбо и Т-2 токсина в дозе 1/10 ЛД50 происходит потенцирование токсического эффекта, характеризующееся развитием выраженной клиники отравления и гибелью всех животных в течение 30 сут с начала затравки. Комбинированное воздействие диоксина и Т-2 токсина сопровождается нарушением белкового обмена, проявляющимся снижением содержания общего белка, альбуминов, а-глобулинов и увеличением количества 13-глобулинов. При сочетанном отравлении крыс диоксином и Т-2 токсином угнетается фагоцитарная активность нейтрофилов, уменьшается лизоцимная активность сыворотки крови, что свидетельствует о снижении естественной резистентности животных.
Исследования проводили на белых крысах, живой массой 190-2 Юг, которые были разделены на две группы по 36 животных в каждой. Первой группе задавали диоксин в виде масляного раствора в дозе 0,3 мкг/кг, что составляет 1/200 ЛД5о и Т-2 токсин в виде водноспиртового раствора в дозе 0,3 мг/кг(1/10 ЛД5о)- Второй группе наряду с токсикантами выпаивали 15%-ный раствор димефосфона в дозе 90 мг/кг живой массы и давали бентонит Биклянского месторождения РТ в дозе 2% от рациона. В обоих группах затравку животных токсикантами проводили в течение 30 суток.
Изучение сочетанного действия диоксина и Т-2 токсина на организм кроликов
Исследования проводили на 18 кроликах живой массой 2,8-3,2кг. Животные были разделены на три группы. Первой группе давали диоксин в виде масляного раствора в дозе 1/200 ЛД50, второй - Т-2 токсин в дозе 1/20 ЛД5о- Третьей группе вводили одновременно диоксин и Т-2 токсин в вышеуказанных дозах. Во всех группах затравку животных токсикантами проводили в течение 30 суток
При отравлении кроликов диоксином в течение 30 дней в дозе 1/200 ЛД50 внешние признаки интоксикации не проявлялись. У животных второй группы, которым давали Т-2 токсин, клинические признаки появились на 16 день, которые характеризовались угнетением, вялостью, уменьшением потребления корма. После прекращения затравки внешние признаки токсикоза исчезли. При сочетанном отравлении диоксином и Т-2 токсином симптомы интоксикации появились на 10 день в виде общего угнетения, вялости, взъерошенности шерстного покрова, понижения или отсутствия аппетита, слизистых выделений из ноздрей, характерных для ринита. В последующие дни началась диарея. Живая масса к 20 сут снизилась на 21%. В результате комбинированного воздействия диоксина и Т-2 токсина пали все кролики; два на 14 и 15день, по одному на 20 и 21, и два на 30 сут.
Содержание эритроцитов у первой группы на 10 сутки уменьшилось на 24%, уровень гемоглобина на 20 и 30 сут понизился на 17 и 18% соответственно от фонового показателя. Во второй группе животных происходило снижение содержания эритроцитов на 30 сут на 15%, гемоглобина на - 11%. В третьей группе содержание эритроцитов на 20 сут снизилось на 12%. Уровень гемоглобина на 10 сутки повысился на 17%, и к 20 суткам происходило постепенное его понижение до исходных величин . При изучении белкового состава крови установлено, что у животных первых двух групп количество общего белка в сыворотке крови оставалось в пределах фоновых величин. В третьей группе количество общего белка на 10 и 20 сутки снизилось на 11 и 14% соответственно от фонового показателя.
Концентрация альбуминов в первой группе на 10 и 30 сут снижалась на 20 и 26%, количество а-глобулинов на 10 сут уменьшилось на 28%, в дальнейшем происходило повышение их уровня. Во второй и третьей группах также происходило снижение альбуминов и а-глобулинов. Так, у животных, которым давали Т-2 токсин, содержание альбуминов к 30 сут снизилось на 22%, а-глобулинов на 20 сут — на 30%. У животных третьей группы концентрация альбуминов на 20 день эксперимента снизилась на 35%, а а-глобулины повысились на 31%.
Как видно из таблицы 8, на протяжении всего опыта происходило повышение В- и у-глобулинов во всех трех группах. В первой группе содержание В-глобулинов увеличивалось на 20 сут на 87%. Во второй группе концентрация В-глобулинов повышалась на 20 и 30 день на 12 и 45%, у-глобулинов - на 23 и 35%). В группе, где давали оба токсина, содержание В-глобулинов к 20 сут увеличилось на 95%, у-глобулинов на 10 и 20 сут на 74 и 34%.
При изучении показателей естественной резистентности установлено, что в группе, где животные получали только диоксин, количество лейкоцитов уменьшилось на 10 сут на 35%, а к 20 и 30 суткам происходило постепенное восстановление количественного состава белых кровяных клеток. В группе, где животные получали Т-2 токсин, содержание лейкоцитов на 20 и 30 сут уменьшилось на 16 и 17%.У животных, получавших диоксин и Т-2 токсин одновременно, количество лейкоцитов на 10 сут увеличилось на 12%, а к 20 сут происходило снижение этого показателя на 15% ниже фонового уровня. Фагоцитарная активность в первой группе повышалась на 10, 20, 30 сут наблюдений на 32, 34, 40%. Фагоцитарное число на 10 и 30 сут уменьшалось на 32 и 33%; фагоцитарный индекс на 11 и 12%, активность лизоцима на 25 и 32%. Максимальное снижение фагоцитарной емкости отмечалось на 20 сут на 27%. Активность лизоцима на 20 и 30 сутки снижалась на 15 и 31%. Во второй группе животных, фагоцитарная активность на 20 и 30 сут снизилась на 11 и 18%, фагоцитарное число на 12 и 21%; фагоцитарный индекс на 16 и 11%; фагоцитарная емкость на 22 и 24%. Активность лизоцима существенно не изменялась.
В третьей группе происходило снижение всех показателей естественной резистентности. Из таблицы 9 видно, что фагоцитарная активность на 10 и 20 день наблюдений снижалась на 20 и 52%; фагоцитарное число - на 33 и 36%; фагоцитарный индекс на -20 и 24%; фагоцитарная емкость на 26 и 35%; активность лизоцима на 17 и 32%.
Клинико-гематологические исследования
Изучение влияния бентонита с димефосфоном при сочетанном отравлении животных диоксином и Т-2 токсином проводили на 12 кроликах. Животные были разделены на две группы: опытную и контрольную. Животным контрольной группы диоксин вводили в виде масляного раствора в дозе 1/200 ЛД50 и Т-2 токсин в виде водноспиртового раствора в дозе 1/20 ЛД5о. Опытная группа наряду с токсикантами получала димефосфон в дозе 90 мг/кг массы животного и бентонит в количестве 2% от общего рациона. При сочетанном отравлении диоксином и Т-2 токсином клинические признаки появились на 10 день в виде общего угнетения, вялости, взъерошенности шерстного покрова, нарушения аппетита. В последующие дни появилась диарея. В течение месяца пали все кролики; два на 14 и 15 день, по одному на 20 и 21 сут, два на 30 сут. Масса животных к 20 сут снизилась на 21%. У леченных животных на 11 день появились слабо выраженные клинические признаки в виде общего угнетения. На 17 день у двух кроликов наблюдалась диарея, у остальных - на 20 сут. Во время эксперимента пало 50% животных: один кролик на 19 сут и два - на 22 и 24 сут. В контрольной группе (без лечения) количество эритроцитов снижалось на 30 сут на 15%, уровень гемоглобина на 11%. В опытной (леченой) группе существенных изменений в массе тела и гематологических показателях не наблюдалось, отмечались колебания эритроцитов и гемоглобина в пределах 10 - 18 % (табл.11). В группе, где животные получали диоксин и Т-2 токсин, количество общего белка снижалось на 10 и 20 сут на 11 и 14%, альбуминов — на 18 и 35%, В-глобулинов на 20 сут повышалось на 95%, содержание у-глобулинов увеличивалось на 10 и 20 сут на 70 и 31%.
У животных, получавших лечебные препараты, максимальное снижение альбуминов отмечалось на 10 сут на 27%, в дальнейшем концентрация данной фракции восстанавливалась, и к концу опыта показатель был на уровне фоновой величины. Содержание а-глобулинов повышалось на 30, 40, 60 сут исследований на 24, 26, 64 %, В-глобулинов -увеличивалось на 20 и 30 сут на 53 и 67 %. Максимальное увеличение концентрации у-глобулинов на 87% наблюдалось на 10 сутки, с 30 по 50 день она колебалась в пределах фоновых величин, а к 60 сут снова повысилась на 30% (табл. 12).
В группе, получавшей диоксин и Т-2 токсин, фагоцитарная активность на 10 и 20 день наблюдений снижалась на 20 и 22%; фагоцитарное число на 33 и 36%; фагоцитарный индекс на 20 и 24%; фагоцитарная емкость на 26 и 35%. Во второй группе фагоцитарная активность на 10 сутки снизилась на 22%, в последующие дни данный показатель колебался в пределах фоновых величин, фагоцитарное число оставалась пониженным в среднем на 19 -30%. Фагоцитарный индекс снижался в течение 60 суток наблюдений на 16 -19%.. Снижение фагоцитарной емкости на 29% отмечалось на 10 сутки опыта. В первой группе, активность лизоцима на 10 и 20 сутки снижалась на 17 и 32%. Во второй группе угнетение лизоцимной активности составило 18 - 22% (табл. 13). В контрольной группе содержание Т-лимфоцитов существенно не изменялось количество, В-лимфоцитов на 20 сут снизилось на 19%. В опытной группе (с лечением) Т-клетки снижались на 10 сут на 18%, к 20 суткам показатель возвращался к фоновому уровню. Содержание В-лимфоцитов снижалось на 10 и 60 сут на 17 и 20% (табл.14).
Таким образом, проведенными исследованиями установлено, что при отравлении диоксином и Т-2 токсином, бентонит с димефосфоном улучшают клинический статус животных, оказывают нормализующее влияние на гематологические и биохимические показатели, естественную резистенность и предупреждают гибель 50% кроликов, при 100% ном падеже в кантроле (без лечения).
В печени животных, подвергнутых субхронической затравке только одним диоксином, наблюдались нарушения дольчатой структуры печени, мелкие центробулярные очаги некрозов, а по переферии долек — участки некробиоза. Кровеносные сосуды сужены. Местами, вследствие нарушений гистогематических барьеров, в перисинусоидальных пространствах распологались многочисленные эритроциты.
В почках отмечалась сосудистая реакция в виде гиперемии и кровозлияний в межканальцевую соединительную ткань. Извитые канальцы в состоянии некробиоза, о чем свидетельствуют пикноз и отсутствие ядер, зернистая дистрофия клеток эпителия. Прямые канальцы в состоянии дистрофии и некробиоза, ядра эпителиоцитов увеличены.
Селезенка -лимфатические фолликулы уменьшены, пролифирирующая реакция ретикулоэндотелия сглажена. Отмечается разряжение центров фолликулов, подавление реакции образования лейкоцитов. Стенки центральных артерий фолликулов и тробикулярных сосудов утолщены, стенки мелких артерий геалинизированы.
У крыс, получавших одновременно диоксин и Т-2 токсин, наблюдали следующие паталогоанатомические изменения. В подкожной клетчатке жировые отложения отсутствовали, отмечены кровоизлияния. Слизистая оболочка носовой полости гиперимирована. Отмечались язвенно-некротические поражения слизистой оболочки ротовой полости. Легкие розовые с участками тёмно-вишнёвого цвета, плотной консистенции. Селезенка не увеличена, вишнево-красного цвета, края острые.
Печень дряблой консистенции темно-красного цвета, увеличена в размерах. Желудок наполнен кормом, слизистая розового цвета. Тонкий отдел кишечника наполнен газами, слизистая светло-красного цвета. Толстый отдел кишечника умеренно наполнен каловыми массами кашицеобразной консистенции, слизистая оболочка гиперимирована.
Почки неравномерно окрашены, граница коркового и мозгового слоев выражена нечётко. Мочевой пузырь умеренно наполнен прозрачной, соломенного цвета мочой, слизистая бледно-розового цвета. Головной мозг отёчный, плотной консистенции, сосуды кровенаполнены.
При гистологическом исследовании у животных во все сроки сочетанной интоксикации наблюдались выраженные изменения во внутренних органах. У животных, погибших на 9-10 день, отмечался умеренный внутриклеточный и внеклеточный отек головного мозга. В почках на фоне зернистой дистрофии определялись участки некробиоза, десквамация эпителия извитых и прямых канальцев (рис.1), слущивание эпителия прямых канальцев было выражено более значительно. В печени на фоне резкого застойного полнокровия наблюдались кровоизлияния в перисинусоидальные пространства, в синусоидах находились единичные микрофаги, гепатоциты были в состоянии зернистой дистрофии, некоторые -некротизированные. Регенераторные признаки гепатоцитов были выражены слабо, в портальных трактах появлялись единичные лимфоциты и гистиоциты (рис. 2). В селезенке отмечалось полнокровие красной пульпы с кровоизлияниями, фолликулы с просветленными центрами и повышение численности Т-лимфоцитов.
Похожие диссертации на Сочетанное действие диоксина и Т-2 токсина на организм животных и оценка эффективности лекарственных средств
