Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1 Систематика возбудителя анаплазмоза крупного рогатого скота . 9
1.2. Морфология и биология возбудителя анаплазмоза крупного рогатого скота 9
1.3.. Эпизоотология анаплазмоза (переносчики - кровососущие насекомые и иксодовые клещи) 11
1.4. Патология при анаплазмозе и лечение 17
1.5. Меры борьбы и профилактики анаплазмоза крупного рогатого скота 27
2 Собственные исследования 36
2.1. Материалы и методы 36
2.1.1. Характеристика подопытных животных 36
2.1.2- Методы исследования 38
2.2. Афо-климатические условия Рязанской области 42
2.2-1- Характеристика ландшафта и климата районов, где выполнялась работа 42
2.2,2- Экономические показатели агропромышленного комплекса и перспективы развития Рязанской области 44
2.3- Видовой состав и эколого - фенологические аспекты развития иксодовых клещей и двукрылых кровососущих насекомых -
основных переносчиков возбудителя анаплазмоза животных 47
2.3.1. Определение видового состава и эколого - фенологическая характеристика иксодид 47
2.3.2. Определение видового состава и эколого-фенологическая характеристика основных компонентов гнуса , 67
2.4. Распространение анаплазмоза крупного рогатого скота в Рязанской области. Возрастная и сезонная динамика 81
2.5. Показатели резистентности больных анаплазмозом животных 93
2.5.1. Показатели клеточных факторов естественной резистентности 94
2.5.2. Показатели гуморальных факторов естественной резистентности 96
2.6. Усовершенствование мер борьбы и профилактики анаплазмоза 98
2.6.1. Меры борьбы с переносчиками возбудителя анаплазмоза 98
2.6.1. К Испытание препарата «Акарнн» против иксодовых клещей 98
2.6.1.2. Испытание препарата «Пурофен» против двукрылых кровососущих насекомых 103
2.6. КЗ. Разработка и испытание устройства для опрыскивания животных (УОЖ) 108
2.6.2. Лечение больного анаплазмозом крупного рогатого скота 118
2.6.2.1. Разработка и испытание мицеллярного препарата «ОТОЛ» 117
2.6.2.2. Показатели резистентности крупного рогатого скота больного анаплазмозом, после лечения мицсллярным препаратом «ОТОЛ» .123
3. Заключение 126
4. Выводы 132
5. Практическое использование полученных научных результатов 135
6. Рекомендации по использованию научных выводов 136
7. Список использованной литературы 137
Приложения 155
- Систематика возбудителя анаплазмоза крупного рогатого скота
- Патология при анаплазмозе и лечение
- Характеристика подопытных животных
Введение к работе
Актуальность темы. За последние 10 - 15 лет заметно расширился нозоареал анаплазмоза, особенно крупного рогатого скота. Так, появление очагов анаплазмоза на ранее благополучных территориях свидетельствует об увеличении численности зараженных клещей во внешней среде (Государственный доклад за 1998 г, часть 1, раздел 8).
Свою работу, посвященную анаплазмозу крупного рогатого скота, мы проводили в течение 2002 - 2006 гг в Рязанской области, природно -климатические условия которой достаточно характерны для Центральной части Нечерноземной зоны Российской Федерации.
Впервые возбудитель анаплазмоза крупного рогатого скота па территории нашей страны был обнаружен Е. Джунковским и И. Лусом в 1903г. В 1926 г В.Л. Якимов и B.C. Белавин наблюдали случаи анаплазмоза крупного рогатого скота в Пятигорске. В дальнейшем в 1957 г анаплазмоз был зарегистрирован в Белорусской ССР (Савиченко М.А., 1959), в Смоленской области (Абрамов И.АМ I960) в Толсинском районе Латвии (Иванова П.С., 1961). Был обнаружен и в Ростовской, Калининградской областях {Дьяконов Л.П.; Гусев В.Ф., Степанова Н.И., 1958,1962).
По мнению большинства исследователей возбудителя анаплазмоза крупного рогатого скота - Anaplasma marginale, переносят в основном иксодовые клещи: 22 вида из семейства Ixodidae и 1 вид из семейства Argasidae.
В 196І г П.М* Мордасовым и П.А. Битюковым было установлено, что Der-macentor pictus является переносчиком анаплазмоза крупного рогатого скота в Белоруссии. О.Ф. Гробов (1963) доказал, что возбудитель анаплазмоза передается клещами Rhipicephalus bursa при прерывистом питании их сначала на больном, а затем на восприимчивом животном. А.А. Агеевым (1971) экспериментально установлено, что на территории Айзербайджана переносчиками возбудителя анаплазмоза являются клещи Hyalomma anatolicum, Н. plumbeum, Boophilus calcaratus и Rhipicephalus bursa.
А.Н. Гасанова (1992) установила, что личинки D, marginatus,co6paHHbie от спонтанно зараженных животных, передают этого возбудителя.
Двукрылые кровососущие насекомые также играют немаловажную роль в передаче возбудителя анаплазмоза. В США опытами было установлено, что слепни Tabanus gracilis, Т. sulcifrons и Chrysops seguax оказались способны переносить анаплазмы (Stiles G.W., Sanborn С.Е., 1931). Затем выявили и других переносчиков среди кровососущих насекомых: слепней различных видов, мух-жигалок и комаров (Howell D.E., Stiles G,W,, Мое L.H., 194!; Mackerras MJ.,MulhearnCR., 1942).
В СССР была установлена возможность передачи слепнями возбудителя анаплазмоза, который сохраняет свои вирулентные свойства в организме слепней Chrysops relictus в течение 9-11 часов. (Гробов О.Ф.,1963). Л.П. Артеменко, Л,К. Лиховоз (1975) определили, что мошки способны заглатывать возбудителя анаплазмоза, который в течение 3,5 часового пребывания в их организме не теряет свою вирулентность.
По данным О.Е. Мальцевой (2004) в настоящее время стационарно неблагополучными по анаплазмозу являются многие районы Рязанской области, в том числе зараженность крупного рогатого скота (по результатам серологических исследований) в Кадомском районе составило 75-100 %.
Тем не менее, в областном управлении, районных лабораториях нет точного учета зараженности крупного рогатого скота анаплазмозом в разрезе районов и хозяйств. Не проводятся современные серологические исследования для выявления хронически больных животных*
Учитывая современное состояние животноводства Рязанской области, следует отметить, что единственным источником дохода осталось молочное скотоводство. Однако, известно, что при заболевании коров анаплазмозом молочная продуктивность снижается до 27, 3% (Мордасов М.П., Битюков П.А., 1958).
Следует подчеркнуть, что по нашим исследовании, в Рязанской области имеются все условия для широкого распространения анаплазмоза крупного рогатого скота: благоприятные природно - климатические показатели для развития основных переносчиков - иксодовых клещей и слепней. Тем не менее, не проводятся ветеринарные мероприятия, в условиях хозяйств, районов, по борьбе с заболеванием,
В хозяйствах области недостаточно и не квалифицированно организована борьба с иксодовыми клещами и компонентами гнуса.
Исходя из вышеизложенного можно допустить, что данная тема является актуальной.
Цель и задачи исследования. Цель исследований - изучение эколога -эпизоотологических аспектов анаплазмоза крупного рогатого скота в Рязанской области и усовершенствование мер борьбы с ним.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи;
L Изучить агро - климатические условия скотоводческих хозяйств Рязанской области.
Установить причины и закономерности распространения анаплазмоза дойных коров.
Изучить фенологию иксодовых клещей и компонентов гнуса (первичные сроки появления переносчиков весной в природе, их динамику развития по сезонам года, максимум иаразитировапия), имеющих практическое значение в переносе возбудителя анаплазмоза.
Изучить экстенсивность и интенсивность нападения переносчиков возбудителя анаплазмоза па дойных коров.
Изучить зараженность дойных коров возбудителем анаплазмоза, динамику развития титра антител в сыворотке крови у больных животных в пастбищный период.
Разработать мицеллярный препарат «ОТОЛ» для усовершенствования методов лечения больного анаплазмозом крупного рогатого скота.
Сконструировать новую модель опрыскивателя для животных против иксодовых клещей и компонентов гнуса и внедрить его по области.
Определить эффективность новых инсектоакарицидов Пурофена и Акарина и внедрить их в ветеринарную практику.
Научная новизна. Установлена непосредственная взаимосвязь между аг-ро - климатическими условиями Рязанской области, численностью и активностью нападения иксодовых клещей, а также двукрылых кровососущих насекомых на крупный рогатый скот»
Определены сроки первичного нападения в весеннее - летние сезоны года, динамика развития и максимум нападения клещей и слепней на животных в условиях области.
Доказано, что на территории области распространены клещи Dermacentor pictus и Ixodes ricinus, а не Dermacentor marginatus и Haemaphysaiis otophila (как указывалось в работе Мальцевой О.Е,, 2004),
Разработан и испытан новый мицеллярный препарат «ОТОЛ» для лечения больных анаплазмозом коров, способствующий снижению титра антител в два раз и отсутствию паразитемии даже после однократного введения.
Определена инсектицидная, акарицидная и репеллеїгшая эффективность новых инсектоакарицидов Пурофен и Акарин,
Сконструировано Устройство для опрыскивания животных (УОЖ), эффективное в применении и доступное по цене для хозяйств.
Практическая значимость работы. Установление конкретных сроков нападения слепней и иксодовых клещей на крупный рогатый скот, в зависимости от природно - климатических и ландшафтных условий области, позволяет прогнозировать точные сроки обработок животных, и тем самым профилактировать распространение анаплазмоза и уменьшить ущерб в животноводстве от нападения кровососов.
Применение нового мицеллярного препарата «О'ГОЛ», способствует более эффективному лечению больных анаплазмозом животных, при меньших затратах труда и финансов.
Внедренные в практику недорогие по стоимости новые инсектоака-рициды Пурофсн и Акарин, обладают высокой степенью защиты животных отиксодовых клещей и компонентов інуса, а также более длительным рспел-лентным действием.
Результаты испытания Пурофена были использованы в написании «Инструкции по применению Пурофена для борьбы с акарозами и энтомозами животных» утвержденной Россельхознадзором 04 октября 2005 г. Сертификат соответствия № РОСС RU 00GL11J1096. Свидетельство о регистрации № ПВР-2-2.5/01451.
Результаты испытания Акарина легли в основу «Инструкции по применению Акарина при паразитарных болезнях животных и для дезакаризации помещений без удаления животных» (2006),
На сконструированное нами Устройство для опрыскивания животных (УОЖ) разработан технический паспорт. Устройство выпускается на заводе ООО «ТД Зоовет» г. Касимов Рязанской обл. УОЖ прошло широкие производственные испытания и используется во многих хозяйствах Рязанской области.
Систематика возбудителя анаплазмоза крупного рогатого скота
Начиная с момента открытия возбудителя анаплазмоза Anaplasma marginal в 1910 г Тендером и до шестидесятых годов прошлої о столетия рассматривались различные теории его происхождения и систематического положения.
A. Theiler (1910) при описании вида Anaplasma marginale высказал мнение, что эти организмы входят в тип Protozoa, у которых по мере развития паразитизма утратились специфические органеллы.
Schilling - Yorgau и др. в 1921 г считали, что анаплазмы - продукт патологического изменения эритроцита.
Анаплазмы долгое время включали в систематику простейших, как некла-ссифицируемые организмы (Wenyon, 1929; Якимов В.Л.? 1931), либо как семейство Anapiasmatidae в отряде Piroplasmida.
В 1956 г СВ. Philip, в своей систематике, включил анаплазмы в отдельный класс Microtatobiotes, отряд Rickcttsiales.
По субмикроскопической организации риккетсин стоят близко к таким микроорганизмам, как Francisella и Brucella. Риккстсии относятся к бактериям, классу Schizomycetes, порядку Eubacteriales, семейству Rickellsiaceae da ИосЬа-Ьіїїіа(Авакян А.А., 1971).
Семейство Rickettsiaceae представлено небольшими плеоморфпыми (палочки, кокки и диплококки) микроорганизмами; грамотрицательны, культивирование на бесклеточных средах невозможно. Семейство разделено на три трибы - Rickettsieae, Ehrlichieae и Wolbachieae. Риккетсии размно жаются путем бинарного деления; сложного цикла развития не имеют. Большинство обитает в облигатных внутриклеточных ассоциациях, паразитических или мутуалистических, с хозяевами - эукариотами (позвоночные или членистоногие). Клеточные стенки содержат мурамовую кислоту. Некоторые риккетсии в окрашенных препаратах имеют кольцевидную форму; имеют один жгутик; некоторые риккетсии могут окрашиваться по Грамму положительно (Берджи, 1997; Покровский В.И., Поздеев ОХ, 1998),
Изучение ультраструктуры анаплазм, показало, что они представляют собой колонию (микроколонию) риккетсиоподобных организмов. Это дало основание отнести анаплазм к риккетсиям (Bergys Manual, 1957; Марков А.А., 1965; Дьяконов ЛЛ, 1969- 1985; Bergys Manual, 1984-1989),
Следовательно, анаплазмы, паразитирующие в эритроцитах животных, как представители надцарства (империи) прокариотов (Prokaryota), не являя ются простейшими и могут быть классифицированы следующим образом:
Морфология анаплазм изменяется в зависимости от стадии течения болезни, В период посительства и в начале заболевания они округлой формы, в процессе нарастания паразитемии появляются угловатые включения в виде треугольника, мельчайших точек - вкраплений, овальные и делящиеся формы (Абрамов И.В., Степанова Ы.И., и др., 1965).
Некоторые авторы (Boynton W.H., 1932; Dikmans, 1933; Franclin Т.Е., 1958) наблюдали анаплазм кометоподобной, кольцевидной, продолговатой формы и с выступами («хвостами»),
С помощью электронной микроскопии сверхтонких срезов эритроцитов было установлено, что анаплазмы состоят из 1 - 7 образований по 0,2 - 0,7 \i, каждое из которых содержит различное число включений (инициальных тел) размером приблизительно в 100 А0 (1 А0 = 0,1 мкм). В теле анаплазмы не от-мечаютядраи других органелл (FooteL.E., GeerJ.C, StichK.E, 1958),
По данным Л.П. Дьяконова (1972) на ультратонких срезах пораженных эритроцитов овец анаплазмы предстают в виде одиночных включений и микроколоний. Микроколонии расположены внутри эритроцита, имеют округлую форму, окружены отграничивающей мембраной и состоят из 2, 3, 4, и 6 инфекционных особей, расположенных в зернистом матриксе. Ультраструктура A.marginale аналогична, но із срезах микроколоний встречается до 7 особей. Размеры 0,2-1,2 мш.
М, Ristic (1960) установил, что анаплазма проходит экстра- и интро-эритроцитарные стадии развития, а также способность инициальных тел про- никать через мембрану эритроцита.
Около 80% анаплазм расположены по периферии эритроцитов (Петешев В.М., 1975), Л.П.Дьяконов и А.А.Авакян (1970) с помощью электронного микроскопа установили, что анаплазмы с внешней стороны окружены оболочкой эритроцита, то есть находятся внутри кровяных клеток.
Количество анаплазм в одном эритроците колеблется от 1 до 18 экземпляров (Арифджанов К.А., Исламов Н.Н., Лебедев Г.К., 1963).
Патология при анаплазмозе и лечение
Возбудитель, попав в организм животного, размножается пре-имущественно в крови капилляров внутренних органов. Постепенно накапливаясь, паразиты поступают в переферическую кровь (Конюхов М.П., 1957).
И.В, Абрамов с соавт. (1965) считают, что возбудитель анаплазмоза, внедрившись в организм животного, начинает быстро размножаться, поражая эритроциты. Организм реагирует активизацией рстикуло - эндотслиалыюй системы, появляются комплементсвязывающие антитела, начинается фагоцитоз пораженных эритроцитов, в чем немалую роль играют образующиеся антитела против эритроцитов.
Характерным патогенетическим признаком при анаплазмозе является развитие анемии. Некоторые ученые (Корниенко - Конева З.П, 1958; Foote L.E., 1959) считают, что возможен лизис эритроцитов в кровеносном русле. Другие (Конюхов МП., 1955; Baker N.F, a. Douglas J.R, 1957; Osebold J.W.a. Chnstensen JJ\, 1959) утверждают, что распад эритроцитов идет в основном в клетках РЭС, активность которой так велика, что се одной достаточно для развития анемии.
По теории М. Ристика (I960) в организме анаплазмозного животного образуются аутоантитела против пораженных и не пораженных анаплазмами эритроцитов. Эти антитела подготавливают эритроциты к захватыванию и лизису в клетках РЭС. В 1961 г М.Ристик провел детальное изучение этих аутоантител и установил закономерную связь между титром антител и стадиями развития анемии.
Максимальная анемия у больного животного следует за пиком пара-зитемии, титр комплемент связывающих антител нарастает несколько раньше и изменяется параллельно увеличению числа паразитов, а затем удерживается на высоком уровне и после уменьшения их количества (Н.И.Степанова, 1963),
Многие исследователи {Конюхов МЛ., 1957; Мяло И.И.3 1957; Корниенко - Конева 3JL, 1958) утверждают, что анемия при анаплазмозе ана-пластическая и главную роль в ее развитии иірает нарушение и извращение гемопоэза и регенеративной способности костного мозга,
В 1961 - 1964 гг зарубежные ученые J. W. Osebold, J.F, Christensen, М. Ristic высказали мнение, что развитие острой анемии является результатом быстрого разрушения огромного числа эритроцитов.
При анаплазмозе, несмотря на очень быстрое развитие анемии, ге-моглобинурия никогда не наблюдается. Это говорит о том, что внут-рисосудистое разрушение эритроцитов не имеет значения в развитии анемии (Петешев В.М., 1975). При анаплазмозе внутриклеточное разрушение эритроцитов является ведущим в развитии острой анемии (Конюхов М.П., 1957; Ristic М., 1964, Петешев В.М., 1975).
В тесной связи с анемическими процессами находится и газообмен.
М.П, Конюхов (1955) установил повышение газового и энергетического обмена при анаплазмозе овец. У больных животных значительно повышено поглощение кислорода (на 38,4%) и выделение углекислоты (на 52,1%).
K.S. Piicher, W.G.Wu (1961) изучали in vitro респирационную способность эритроцитов животных, зараженных анаплазмами и пришли к выводу, что потребление кислорода при этом возрастает в 2 - 2,5 раза по сравнению с нормой.
С развитием анемии нарушается газовый и энергетический обмены, усиливается интоксикация из - за накопления недоокисленных продуктов распада белков, жиров, углеводов. Они вызывают раздражение и блокируют
РЭС, печень не в состоянии обезвреживать их по причине возникших дегенеративных изменений, в крови и тканях увеличивается количество промежуточных продуктов распада, что усиливает токсикоз. Вследствие бурного развития паразитов в крови и нарушения обмена веществ возникает токсикоз, усиливается ответная реакция организма, появляется лихорадка. В результате нарушается деятельность центральной нервной системы, работа желудочно -кишечного канала, изменяется деятельность сердечно - сосудистой системы; учащается и извращается работа сердца, появляются кровоизлияния в различных органах и тканях. Нарастание этих признаков при прогрессирующем исхудании приводит к смерти даже при снижении паразитемии (Абрамов ИЗ-, Степанова НИ, Дьяконов Л.П., Гробов О.Ф.,1965).
Характеристика подопытных животных
Работа выполнена на кафедре паразитологии и инвазионных болезней животных ФГОУ ВПО МГАВМ и Б и в 9 районах Рязанской области; Ерми-шевском, Касимовском, Ряжском, Чучковском, Спасском, Путятинском, Михайловском, Шиловском, Шацком.
В Шиловском, Шацком и Путятинском районах, расположенных в центре и на юго - востоке области, проводили подробные исследования эколого
- фенологических особенностей и сезонную динамику основных переносчиков возбудителя анаплазмоза крупного рогатого скота - иксодовых клегщей и двукрылых кровососущих насекомых (гнуса). В Михайловском районе, расположенном на западе области, кроме переносчиков, изучали некоторые аспекты иммунитета и лечения при анаплазмозе крупно о рогатого скота.
Диссертационная работа выполнялась с мая 2002 по март 2006 гг. Под опытом находились дойные стада указанных выше районов и главным образом, последних 4-х. В частности, в Шиловском районе под опыт было использовано: в СПК "Березово11 - 200 кор., в СПК "Санское" - 700 кор,, в СПК "Желудево" - 360 кор., в В/с «Пробуждение» - 375 кор., СПК «Тимошкино»
- 50 кор. Телок и нетелей в этих хозяйствах - 674 гол, В Шацком районе под опыт было использовано: в СПК «Высокое» - 325 кор,, в СПК «Прогресс» - 350 гол. Соответственно телок и нетелей - 270 гол. В Путятинском районе под опыт было использовано: в СПК «Виктория» - 280 кор., в СПК «Восход» - 200 кор., СПК «Заря» - 150 кор., СПК «Родина» - 200 кор., СПК «Песочня» - 100 кор., СПК «Рассвет» - 50 кор- Соответственно телок и нетелей - 392 гол. В Михайловском районе под опыт были использованы в ООО «Новопанское» (ООО «Михайловская нива») - 300 кор,, в ООО «Воскресение» - 100 кор. Телок и нетелей случного возраста
- 162гол Кроме общественных стад, были обследованы коровы частного сектора: с. Береговое Путятинского района - 50 кор., с. Санское и с. Юшта Шиловского района - 100 и 80 коров соответственно.
Всего 3970 дойных коров и 1496 нетелей и телок случного возраста. Таким образом, под опытом находилось 5466 гол крупного рогатого скота.
Распространение анаплазмоза было изучено путем определения клинического состояния поголовья, исследования тонких мазков крови из периферических сосудов (всего исследовано - 1093 шт), серологических исследований 50 коров Михайловского района, подозреваемых в заражении анаплазмозом и опроса ветеринарного персонала (ветврачей, ветфельдшеров).
При этом учитывали зональность, сезонность года и породность скота. Кроме того особое внимание было обращено на агро - климатические условия и ландшафт местности.
Возможные сроки первичного заражения животных анаплазмозом мы изучали в тех же хозяйствах, начиная с момента выгона животных на пастбище, а именно с 9-15 мая,
В Михайловском районе, в результате серологических и клинических исследований было выявлено 11 больных коров, из которых 10 подвергали лечению.
Переносчиков возбудителей анаплазмоза - иксодовых клещей изучали в 9 районах, но сезонность распространения, экстенсивность и интенсивность поражения изучали в условиях хозяйств Шиловского, Шацкого и Путятинского районов.
Всего было собрано 10900 экз иксодовых клещей. Была изучена экстенсивность и интенсивность поражения животных в весенний (с 9 мая), летний и осенний (до начала ноября) периоды. При изучении переносчиков в разрезе хозяйств учитывали характер расположения пастбищ, их рельеф, наличие водных ресурсов, захламленность пастбищ, развитие растительности (лесных массивов), наличие прокормителей - диких животных и грызунов.
Основных механических переносчиков возбудителя анаплазмоза - слепней и други$ компонентов гнуса изучали на территории тех же хозяйств с апреля по ноябрь. Всех переносчиков возбудителей анаплазмоза изучали в период 2002 - 2004 гг.
Для организации мер борьбы с анаплазмозом мы использовали препарат нашей разработки на основе окситетрациюшна гидрохлорида в мицеллярной форме. Токсичность препарата испытывали на 20 белых мышах. Бактерио-статическую эффективность новой формы испытывали на микробных культурах.
