Содержание к диссертации
ВВЕДЕНИЕ 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 14
1.2. Историческая справка 14
1.3. Этиология и факторы, способствующие возникновению висцеральных микозов животных 20
1.4. Кандидоз 25
1.5. Аспергиллез 39
1.6. Мукороз 48
1.7. Воспроизведение кандидоза, аспергиллеза и мукороза 55
1.8.Конструирование и использование иммуногенных и аллергенных
препаратов из грибов рода Candida, Aspergillus и Mucor 82
1.9. Лечение животных больных кандидозом, аспергиллезом и мукорозом .103
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 108
2.1. Материал и методы исследований 108
2.2. Результаты исследований 112
2.2.1. Причины возникновения кандидоза, аспергиллеза и мукороза животных 112
2.3. Кандидоз животных 116
2.3.1. Прижизненная диагностика 116
2.3.2. Посмертная диагностика 118
2.3.3. Лабораторная диагностика 127
2.4. Аспергиллез животных 134
2.4.1. Прижизненная диагностика 134
2.4.2. Посмертная диагностика 136
2.4.3. Лабораторная диагностика 143
2.5. Мукороз животных 148
2.5.1. Прижизненная диагностика 148
2.5.2. Посмертная диагностика 149
2.5.3. Лабораторная диагностика 159
2.6. Экспериментальный кандидоз, аспергиллез и мукороз 168
2.6.1. Оценка гематологических, иммунологических и биохимических показателей, в зависимости от способов заражения возбудителями висцеральных микозов 172
2.6.2. Локализация поражений и тканевая реакция при кандидозе, аспергиллезе и мукорозе, в зависимости от способов заражения 183
2.6.3. Особенности фагоцитоза грибов рода Candida, Aspergillus и Mucor in vitro и in vivo 186
2.6.4. Ассоциированное действие кандиды, аспергилл, мукора и бактерий на организм животных 201
2.7. Культурально-морфологические и патогенные свойства штаммов грибов С. albicans, A. fumigatus и М. racemosus, выделенных из патологического материала и кормов 206
2.8. Научно обоснованная система противомикозных мероприятий 212
2.8.1. Разработка средств специфической профилактики и прижизненной диагностики кандидоза, аспергил леза и мукороза животных 212
2.8.1.1.Сравнительная оценка культуральных свойств авирулентных штаммов грибов при выращивании их на различных питательных средах 213
2.8.1.2. Получение антигенов из культур грибов С. albicans, A. fumigatus и М. racemosus 230
2.8.1.3. Разработка способа лабораторной оценки антигенов грибов С. albicans (шт. №253), A. fumigatus (шт. №6) и М. racemosus (шт. №195) 231
2.8.1.4. Конструирование аллергодиагностических и иммуногенных препаратов из антигенов грибов С. albicans (шт. №253), A. fumigatus (шт. №6)иМ. racemosus (шт. №195) 242
2.8.1.4.1. Технология получения иммуногенных препаратов из антигенов грибов С. albicans (шт. №253), A. fumigatus (шт. №6) и М. racemosus (шт. №195) 244
2.8.1.4.2. Технология получения аллергогенных препаратов из антигенов грибов С. albicans (шт. №253), A. fumigatus (шт. №6) и М. racemosus (шт. №195) 256
2.8.1.5,Изучение аллергенных, пирогенных и реактогенных свойств противогрибковых вакцин 262
2.8.1.6. Гематологические, иммунологические и биохимические показатели у лабораторных и сельскохозяйственных животных, вакцинированных противогрибковыми препаратами 265
2.8.1.7. Испытание экспериментальных вакцин и аллергенов, полученных из грибов, в условиях хозяйств, неблагополучных по кандидозу, аспергиллезу и мукорозу сельскохозяйственных животных 274
2.8.1.8. Разработка способов лечения животных при аспергиллезе 2 3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 290
4. ВЫВОДЫ 310
5. РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ 313
6. ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА 317
7. ПРИЛОЖЕНИЯ 3
Введение к работе
Состояние и эффективность современного животноводства определяются на ряду с другими факторами и функционированием эволюционно сформировавшихся инфекционных и инвазионных паразитарных систем, соактантами которых являются их возбудители, а также домашние и дикие животные, а нередко и человек.
Многие исследователи указывают, что главным этиологическим фактором ряда паразитарных систем являются микроскопические грибы, степень изученности которвх до сих пор остается недостаточной [Морозов В.Л. с соавт., 1989; Маилян Э.С., 1999; Кузнецов А.Ф., 2001 Thenizol-Ferly М., 1996; Haase G, 1999].
Наиболее значимыми среди этих болезней в современной медицине и ветеринарии преставляются кандидоз, аспергиллез и мукороз [Хмельницкий O.K., Быков В.Л., 1998; Офицеров В.И. с соавт., 2003; Маянский А.Н., Салина Е.В., Заславская Т.И., 2003; Barboza О.А. et al., 2000].
Увеличение числа и степени тяжести системных микозов, выдвигает эту группу патологий на передний план, как в медицине, так и в ветеринарии.
Ухудшение эпизоотической ситуации по висцеральным микозам обусловлено снижением резистентности восприимчивых к ним животных, неполноценностью рационов, плохими санитарно-гигиеническими условиями содержания, не рациональностью применения антибиотиков широкого спектра действия, использование иммуномодуляторов и гормонов [Кузнецов А.Ф., 2001; Campbell С.С., 1997].
Актуальность проблемы микозов признана во всем мире. На 31 съезде микологов в Аяхси в 1997 году подчеркнуто, что: «... назрела необходимость в качественно новом подходе к диагностике, лечению и профилактике висцеральных микозов». Одним из перспективнейших направлений в решении этих задач является создание из грибов препаратов, обладающих иммуногенными и аллергодиагностическими свойствами.
Для решения этой проблемы необходимо глубокое изучение биологических свойств возбудителей болезней, патогенеза микозов с учетом иммунобиологической перестройки организма [Будумян Т.М. с соавт., 2000].
Наиболее актуальными и перспективными в научном плане и имеющими большое практическое значение, общепризнаны направления ветеринарно-медицинской микологии, обеспечивающие всестороннее изучение: особенностей эпидемического и эпизоотического процессов, формирования специфического иммунитета, клиники и патогенеза заболеваний, обусловленных псевдомицелиальными и мицелиальными грибами, а также разработка эффективных методов их терапии и профилактики [Аравийский Р.А., Антонов В.В., 1995; Будумян Т.М. с соавт., 2002].
Важным моментом успешной борьбы с любой болезнью служит наличие эффективных средств диагностики. На сегодняшний день существует огромное количество методов диагностики микозов: разноплановая микроскопия (световая, флюоресцентная), серологические реакции (РА; РП), диагностические тест-системы, в том числе полученные на основе моноклональных антител (ИФА, РИД) (Pangan А., 1998), ПЦР [Лесовой B.C., Очкурова О.М., 1998], прижизненное исследование фекалий [Баринов В.Н., 1979], гистологические методы изучения биопсийного и секционного материала [Деримсанова И.С., 2001], ДНК-зонды [Weishurg W.E. et al., 1994, Мс. Adams et al., 1997] и некоторые другие. Однако при всей их несомненной значимости, они не лишены ряда недостатков. К примеру, серологические исследования при помощи РА и РП малоэффективны, так как антитела к грибам рода Candida, Aspergillus и Mucor имеются и у большинства здоровых животных. Иммуноферментные и радиоиммунные методы анализа высокочувствительны, но диагностическая ценность их в ряде случаев не высока [Stunen D., 1994], ПЦР обладает высокой специфичностью [Rimek Dagmar et al., 1988), но не имеет решающего диагностического значения. Довольно большой процент ошибок имеет место при биопсиях тканей органов [Das Reena, 1997]. Кроме того, некоторые из этих методов довольно сложны в выполнении, их проведение возможно только при наличии специального оборудования, многочисленных дорогостоящих реактивов, высококвалифицированных специалистов, что в конечном итоге затрудняет их ис ользование в условиях районных и даже областных лабораторий [Nucsstein T.G.,RiedelF.etal.,1994].
Не смотря на успехи, современной микологии, некоторые вопросы освещены недостаточно полно или в ходе их решения получены противоречивые результаты. В частности, имеющиеся сведения об изменениях клеточно-гуморального иммунитета при висцеральных микозах носят отрывочный и неполный характер. Мало работ по воспроизведению глубоких микозов с использованием естественных путей заражения. Недостаточно внимания уделено иммунологической оценке антигенов грибов. Отсутствуют сведения об иммуногенности и аллергенности антигенов, особенно с учетом стадии развития грибов и условий культивирования (в частности, влияние того или иного питательного субстрата на формирование спор и мицелия).
На настоящий момент отсутствует лабораторный способ оценки антигенов грибов. Отбор антигенов, в большинстве случаев, носит эмпирический характер, с использованием огромного количества экспериментальных животных [Выхрестенко Л.Р., 2001].
Информация о принципах конструирования и технологии производства вакцин против кандидоза, аспергиллеза и мукороза животных отсутствует. Имеются лишь отдельные сообщения о применении вакцин против кандидоза и аспергиллеза птиц, с отмечаемым в них низким защитным эффектом [Yerout D.R, 1988]. Неоспоримо, что создание новых вакцин и способов вакцинации весьма актуально и в наши дни [Петров Р.В., Хаитов Р.Т., 2003].
Аллергическая диагностика, в том числе и глубоких микозов, позволяет прижизненно и в короткие сроки устанавливать причину заболевания. Однако, практически полностью отсутствует информация о применении кожно-аллергических проб в ветеринарной практике для диагностики как кандидоза, так и аспергиллеза, и мукороза.
Недостаточность изученности формирования инфекционных паразитарных систем, вызываемых микроскопическими грибами, особенности их эпизоотического проявления в популяциях животных и потребность совершенствования противомикозных мероприятий определили выбор темы и направления наших исследований.
Работа была выполнена в 1991-2005 годах в лабораториях ГНУ Саратовской научно-исследовательской ветеринарной станции Россельхозакадемии и на кафедре патологической анатомии и патологической физиологии ФГОУ ВПО СГАУ им. Н.И. Вавилова Отдельные этапы исследований проводились в лабораториях Саратовского института гематологии и профпатологии СГМУ, Саратовского НИИ биохимии и физиологии микроорганизмов, а также в животноводческих хозяйствах Саратовской и Ульяновской областей.