Введение к работе
Актуальность темы. За последние годч отмрчаетсл изменение микробной флоры при гнойных инфекциях, связанные с некоторыми особенностями течения раневого процесса, иммунологическими изменениями в организме и рядом других факторов.
В микробных ассоциациях при хирургических, онкологических, урологических инфекциях приоритет преобрели нефернентирующие грам-отрицательные бактерии, которые вместе с грамположительными микроорганизмами наиболее часто вызывают гнойно^-воспалительные процессы, увеличивают продолжительность госгитализации больных в стационаре и повышают летальность ( Г.ІІ.Калина с соавт. 1985; А.Ф.Мороз, 1988; A.M..Далина с соавт, ГЭ92; A.Kramer at al., 1989; A.F.Wold et al, 1989).
Неферментирующие бактерии широко распространены в природе. Ореол их распространения в основчом - вода, no4Ba(3«D.Henrik-een, 1973; Blaaevio D.J. , 1976).Они выделяются из продуктов питания, чаще всего из молока. Многие виды этих микроорганизмов ведут паразитарный образ жизни на здоровом теле человека и ивотннх, на коже, на слизистой оболочк- верхних дыхательных путей, в нижних отделах моче-половой системы. Инфекции, которые вызваны нефермен-тирующими бактериями, в основном, развиваются у человека и животных с пониженной естественной резистентностью: у детей, стариков, больных с тяжелыми соматическими болезнями, онкологических больных. В этом случае бактерии выделяются при острых пиэлонефритах, из желчи, в процессе воспаления желчных протоков, в эксудатах при гнойных конъюктивитах. Вырос также удельный вес этих бактерий в возникновении менингитов, пневмоний (В.И.Илыохин, 1985; R.Appelbaura е* al,, 1968).
Представители грамотрицательных неферментярурщи.х бактерий отлич-втся множественной лекарственной устойчивостью.
К неферментирующим грамотрицательным бактериям относятся представители/Peeudononae^Aclnetobaoter ,зНогахеііа ^Flavo-bacterium. Их роль в патогенезе человека и животных мало изучена, что в свою очереди требует дополнительных исследований и уточнений (ч.Aucicen et al. 1991; И.іЛ-і:і ; 1992). Физиологические и биологические особенности их неоднородные и это не дает возможность бактериологическим лабораториям идентифицировать ..х больие 30-60 *>.-
Как видно иа литературных данных изучение патогенных свойств
ироводили на таком классическом объекте микробиологии, каким является кишечная палочка, а что касается неферментирующих грамот1-рнцательных бактерий, у них патогенные свойства почти нч изучались ( Бекбергенов Б.Г, с соавт. 1987; Мороз А.Ф, с соавт. 1990; T.Nioaa.et al.1985). Не изучены вопросы, которые связаны с патогенными свойствами Aoinetobacter э Могахеїіе^ Flavobacterium а в некоторых случаях и paeudomonaa, в частности: знтерої тси-генность, наличие антигенов адгезии, гемолитическая активность, продукция Экзотоксина А и др.
Не изучены вопросы, которьч, связаны с множественной лекарственной устойчивостью грамотрицательных бактерий, их внехромо-сомная-плазмидная природа, группы несовместимости плазмид и т.д. (Еогатова И.С. и др., 1983; PWhakedza Tfet ai. 199J; Hottier v., 1991). Вместе с уменьшением эффективного действия антибиотиков появляется потребность к созданию новых высокоэффективных безвредных препаратов. Такими безвредными и высокоэффективными препара-^ тами являются лечебно-профилактические бактериофаги, которые за последние годы всё чаще используются в медицинской и в ветеринарной прак-.ике.
Поэтому исследования, связанные с вопросами диагностики,патогенных свойств, антибиотикорезистентности и лечебно-профилактических бактериофагов являются актуальными.
Целью работы является изучение вопросов микробиологической диагностики некоторых представителей неферментирующих грамотрицательных бактерий (Acinetobacter , Moraxella , Paeudomonaa , Fla--
vоbacterium) их патогенные свойства: энтеротоксигенность, антигены адгезивности, гемолитическая активность, наличие экзотоксина А, множественная лекарственная устойчивость и роль этих бактерий в инфекционной патологии человека и животных.
Задачи исследования-
-
Частота выделения грамотршательных неферментирующих бактерий при инфекционных патологиях человека и животных,, а также, из окружающей среды;
-
Разработки рационалыпх схем для идентификации некоторых йидон' ноферментируняцих бактерий;
-
Иаучение антигенных свойств Aoinetobacter , Moraxella , Iflavobfioteviimi и PauuiiomonaB ; установление ИХ роДСТЙЄННОСТИ;
-
Изучении патогенных сиийств атий грушш бактерий (онтеро-і'шичичіШПіі'Ть, гемолитическая активность, наличие антигенов адге-лиынн:'! її, ирпмупировапий укаоюксипн А);
5. Установление множественной лекарственной резистентности
и её генетической природы у штяммов синегнойной палочки, ацинетог бактер, моракселла и флавобактерий;
б . Разработка новых лечебно-профилактических поливе Рентных препаратов против инфекций, вызванных неферментирующими бактериями;
7. Приготовление специфических эритроцитарных диагностикумов для постановления непрямой гемаглютинации и диагностики моракселл и ацинетобактер.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
После изучения культуральных свойств Moraiella и riavo-bacterium разработана универсальная дифференциально-селективная среда, с помощью которой повышается частота выделения этих бактерий из патологического материале;
-
Использование иммунологических ыетодов для выявления специфических антигенов И антител Acinetobactep и Moraxella в крови здоровых и больных людей;
-
Ьыделение штаммов Aci^etobaoter , Moraxella , plavo-baoterium от больных людей и животных, содержащих факторы патоген-ности (энтеротоксин, антигены адгеэивности, гемолизиныі екзотоксин А).
-
Подтверждение приобретения антибиотнкоустойчивости у .СИ; \/ ^тто^оЛтшти. обусловленной плазмидами, принадлежащими к гру- * ппам несовместимости іпоРі , тори , mcpiv , mepvr , ntepvir,
ІПОРХІД ;'' ' ' ' '
b. Изучг ше в штаммах ацинетобактер распространения плаэмид IncPi и Іпсрцгрупп несовместимости;
-
Из культур моракселла выделены неконг дативные R -плазми-ды, v лекулярная масса которых составляет 3,2 «D ; 5,4 Ш> ; 7,0 мо возможность их использования в генно-инженерных работах;.
-
Необусловленность С - плазмидами фагорезистентности в грпм-отпицательных неферыентирущих бактериях к лечебно-профилвктичео-ким бактериофагам
-
Результаты использования адаптированных на госпитальных штаммах ле-збно-профигіктических бактериофагов.
Научная новизна. - Разработана и апробирована на практике схема бактериологической диагностики для грамотрииате-ьннх неферментирующих бактерий.
Из клинических стационаров различного профиля, животноводчески* ферм был получен патологический материал, в котором часто обнаруживались неферментирующ'ие грамотрицательные бактерии;
ІІ0СЛ8 Изучения некоторых ВИДОВ Paeudoroonas , MoraXella , ilavobaoterium , Acinetobacter установлено наличие у них факторов патогенности (антеротоксигенность, гемолитическая е<тивность, наличие антигенов адгезии, екзотоксин А ).
- Выделен и изучен экзотоксин А из клинического штамма р,ae
ruginosa;
- Изучено наличие R- плазмид.антибиотикореаистентности в
различных видах неферментирующих бактерий, которые принадлежат
к группам несовместимости - Шорт , терц , inopiv , Incpvi ,
Xuopvir ,'Jtoopxil.
Плцамиді обуславливают устойчивость к пенициллину ( Ро ), оритромицин" (Вт), хлорамфениколу (cm), канамицину (кга), кар-бенициллнну ( СЪ ), тетрациклину ( То ), стрептомицину ( Sm ).
Резистентность к лечебно-профилактическим бактериофагам штаммов синегнойной палочки, флавобактерий,ацинетобактер и морак-селла не обусловлена R плаамидами;
Плаамиды синегнойной палочки могут распространяться в штаммах ацинетобактер и морькселла.
Практическая ценность работы.
Разработанная схема для идентификации грамотрицательных неферментирующих бактерий улучшает бактериологическую диагностику.
Создана дифференциально-селективная среда для выделения бактерий родов моракиелла и флавобактерий.
Изучение приобретенной резистентности к антибиотикам у грамотрицательных неферментирующих бактерий, выделенных в клинических стационарах различного "рофиля и из окружающей среды, создает .общее прецстші'ішше о характере распространения множественно voi'ottmihux форм микроорганизмов. На основании винвленних ис-їочликои аагрпаненин могут бить рекомендованы мероприятия по оз-«ороичсипіо оштемнолипниткой. и ошшоотичеекой обстановки для нрецогйриіці-ііно раунінчш ['ііуірпб'Чіьіиічтіх инфекций, вызванных
,)ТіЩИ (illli'J f.'l'll.ni.lll
_7-
Исходя из полученных результатов, для лечения инфекций, . вызванных грамотрицательными неферментирущими бактериями могут быть успешно применены клафоран, фортум.
Отличается высокой эффективностью созданный в НЛО "Бактериофаг" поливалентный бактериофаг, в состав ноторого входят пиоцианеус, моракселла и флавобактериофаги.
Илазмиды, которые выделены из штаммов моракселла и детерминируют резистентность к одному или двум антибиотикам, могут быть применены как векторы в генетической инженерии.
Использованы специфические фракции антигенов бактерий Aoinetobacter и Moraxeila для приготовления эритроцитарных ДИ-агностикумов.
Внедрение в практику результатов научных исследований.
Основные положения и матера ли диссертации опубликованы в республиканских изданиях, за пределами республики, зарубежных странах, в том числе Соединенных Штатах Амерш г. Получены отзывы из многих стран мира (СШ, Чехия, Франция), а также приглашения для участия в международных симпозиумах.
Получено Авторское свидетельство на изобретение: "Способ получения лизина", » 4В45692/13,от 02.07.90 г.
Получена приоритетная справка на изобретение: "Новый способ получения эритроиитарного диагностикума для выявления антител Aoinetobacter счісопсвисц» " » 1099/01, . Г.
Авторское удостоверение на рационализаторское предложение f ОЬ/91 от 19,03.91 "Способ получения концентратов бактериофагов с высокой активностью".
Авторское удостоверение на рационализаторское предложениеv t 06/91 от 25.03.91 г."Способ производства высокоактивных бвктв-риофа ов, адаптированных на госпиТальнг штаммах".
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены в г.Ереване в институте микробиологии, вирусологии и паразитологии (1990 г), в г.Телави на конвенции молодых ученых (1991), на нр-'чно-практической конференции по клинической микробиологии (1992), на ниучной конференции медицинского университета (1992), на расширенном научном септе !Ш "Бякте иофаг" (1993). Публикации.
Па ~еме диссертации опубликовано 26 научных трудоп, 2 методических письма, 2 изобретения Зарегистрированы в . осудврственном
Комитете по изобретениям и открытиям (г.Москва), получено авторское удостоверение по двум рационализаторским предложениям.
Структура и объем диссертации.
