Разработка бактериологического метода выделения и идентификации Pseudomonas aerugnosa Афонин Эдуард Анатольевич

Содержание к диссертации

с.

Введение 5

Обзор литературы 9

1. Этиологическая и санитарно-гигиеническая значимость Pseudomonas aeruginosa 9

2. Таксономическая структура и внутри родовая дифференциация бактерий рода Pseudomonas .... 14 2.2.1. Биологические свойства микроорганизмов

флюоресцирующей группы рода Pseudomonas .
18

3. Устойчивость Pseudomonas aeruginosa к антибиотикам 20

4. Среды для выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa 28

5. Обнаружение и идентификация Pseudomonas

aeruginosa в объектах окружающей среды ...... 32

6. Методические рекомендации по выделению Pseudomonas aeruginosa ГУВ МСХ РФ 38

7. Микробиологические методы идентификации микробов рода Pseudomonas 40

Собственные исследования 43

1. Материалы и методы 43

2. Результаты собственных исследований 44

3. Изучение специфичности элективных сред . . 44

4. Изучение роли ацетамидной среды в выделении и типизации Pseudomonas aeruginosa ... 48

5. Изучение роста Pseudomonas aeruginosa в присутствии хлорида бария 53

Конструирование элективных сред 57

6. Определение устойчивости Pseudomonas aeruginosa к некоторым антибиотикам 57

7. Определение устойчивости Pseudomonas aeruginosa к фурадонину и фуразолину .... 62

8. Испытание элективного агента в питатель-ных средах 71

9. Разработка питательной основы элективной

среды для Pseudomonas 75

3.3.5. Испытание специфичности элективной среды

для Pseudomonas 78

3.3.6. Определение чувствительности элективной

среды для Pseudomonas aeruginosa 83

Конструирование элективной минеральной среды

для Pseudomonas aeruginosa 86

10. Испытание специфичности элективной минеральной среды для Pseudomonas 90

11. Определение чувствительности элективной минеральной среды для Pseudomonas 94

Конструирование накопительной среды для

Pseudomonas aeruginosa 98

3.5.1. Определение специфичности накопительной

среды для Pseudomonas 99

2. Расчёт оптимального времени культивирования Pseudomonas aeruginosa на среде накопления . 103

3. Определение чувствительности накопительной среды для Pseudomonas 106

3.6. Разработка бактериологического метода выделения
и идентификации Pseudomonas aeruginosa из патоло
гического материала 110

3.6.1. Испытание бактериологического метода вы
деления и идентификации Pseudomonas
aeruginosa из патологического материала 113

3.7. Разработка бактериологического метода выделения
и идентификации Pseudomonas aeruginosa для обсле
дования санитарного состояния объектов 115

4. Обсуждение 119

5. Выводы 128

6. Практические предложения 130

7. Список литературы 131

8. Приложение 149

Введение к работе

Бактерия Pseudomonas aeruginosa всё чаще выделяются в воде открытых водоёмов и объектах внешней среды и интерес к Pseudomonas aeruginosa огромен (J. Vincent 1995; G. Gillardi 1991; N. Palleroni 1984; A. Darzins 1997; H. Hahn 1997; W. Bitter, M. Koster, M. Latijnhouwers et. el. 1998; P. Pllesiant, J. Aires, С Godard et. el. 1997; D. Hart 1994; Von Graevenitz 1985; P. Meadow 1975; J. Liston et. el. 1963; R. Freedman et. el. 1973; Мильченко Б. П. 1975; Захарова И. Я. 1984; Киприанова Е. А. и соавторы 1980; Кудлай Д. Г. и соавторы 1966). Классификации псевдомонад и элементам воздействия Pseudomonas aeruginosa на макроорганизм посвещено большое количество литературы (J. Stock et. el. 1989; D. Frank et. el. 1991; M. Hobbs, E. Collie, P. Free et. el. 1993; W. Fugua et. el. 1994; E. Pesci et. el. 1997; T. Yahr, L. Mende-Mueler, M. Friese et. el. 1997; J. Kadurugamuwa et. el. 1997). Псевдомонадные инфекции стали занимать ведущее место среди нозокоминальных заболеваний (Ильюхин В.И., 1985; Н. Neu, 1985). Pseudomonas aeruginosa вызывает внутри-больничную инфекцию и фибринозную пузырчатку лёгких у человека, особенности клинической картины инфекций, вызываемых Pseudomonas aeruginosa описаны у следующих авторов (D. Talon, В. Mulin, С. Rouget et. el. 1998; J. Fagon, J. Chastre, Y. Domart et. el 1996; M. Falagas, L. Barefoot, J. Griffith et. el. 1996; A. Fluit, M. Jones, F. Schmitz et. el. 1998; A. Baltch, P. Griffin 1977; G. Bodey et. el. 1985; M. McKendrick et. el. 1981; A. Lechi, E. Arosio, P. Pancera et. el. 1984; P. Gallaghar, С Watanakunakorn 1989; M. Hilf, V. Yu, J. Zuravleff et. el. 1989; J. Mallolas, J. Gatelli, J. Miro et. el 1991; F. Vidal, J. Mensa, M. Almela et. el. 1996; T. Laughlin, D. Armstrong, J. Caporusso et. el 1997; H. Pedersen, J. Rosborg 1997). В санитарно-гигиеническом аспекте Pseudomonas aeruginosa считают наиболее мощным источником контаминации поверхностных вод, в которой человек является ми-

6 шенью, а жидкости промежуточным звеном передачи. В литературе описаны случаи, когда Pseudomonas aeruginosa была этологической причиной заболеваний человека, где фактором передачи была водная среда. Трудности этиотропной терапии, вызванной Pseudomonas aeruginosa, отмечаются многими авторами, такими как С. Femandes, R. Pritchard, A. Morris et. el. (1998), V. Andriole (1979), R. Weinstein, L. Young, W. Hewitt (1975), R. Khakoo, et. al (1979), A. Baltch, R. Smith (1985), G. Bodey et. el. (1976), С Solberg, H. Sjursen, (1995), С Brun-Buisson, J. Sollet, H. Schweich et. el. (1998), J. Garau, J. Blanquer, L. Cobo et. el. (1997), S. Byrne, J. Maddison, P. Connor et. el. (1995), Y. Siegman-Igra, R. Ravona, H. Primerman et. el. (1998), L. Leibovici, M. Paul, O. Polznanski et. el. (1997), J. Denhollander, A. Horrevorts, M. Vangoor et. el. (1998), при чём на ярко выраженную резистентность Pseudomonas aeruginosa во время терапии указывали N. Troillet, et. el. (1997), D. Pierard et. el.(1998), G. Bonfiglio, Y. Laksai, N. Franceschini et. el. (1998), J. Laconis, D. Pitrin, W. Sheikh, H. Nadler (1977). У животных и птиц, Pseudomonas aeruginosa вызывает эпиоозотическое заболевание псевдомоноз.

При изучении роли Pseudomonas aeruginosa в патологии человека и животных приходится сталкиваться с тем, что длительное время в таксономии рода преобладали отрицательные признаки. Достаточное число видов не имеет чётких критериев идентификации. Описано 250 видов, относящихся к бактериям данного рода, но из них всего 29 имеют определительные критерии в справочнике Берджи. Осложняют работу бактериологам-практикам отсутствие современных методов выделения Pseudomonas aeruginosa из патологического материала и объектов внешней среды. Это привело к тому, что многие выделенные культуры, имеющие явные родовые признаки Pseudomonas, диагностируются, как вид Pseudomonas aeruginosa, хотя могут не являться таковыми. Более детальная идентификация от-

7 дельных видов данного рода стала разрабатываться лишь в последнее время.

Целью настоящей работы являлось усовершенствование методов бактериологической идентификации Pseudomonas aeruginosa. Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать метод выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa из патологического материала.

2. Разработать метод выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa из объектов внешней среды.

3. Разработать накопительную среду для выделения
Pseudomonas aeruginosa.

4. Разработать элективные среды для выделения Pseudomonas
aeruginosa.

Научная новизна работы. Разработаны новые, менее трудоемкие и более точные, методы выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa из патологического материала и объектов внешней среды, которые позволяют сократить сроки исследования на 24 часа по сравнению с разработанными методами. Разработаны новые элективные среды, которые по чувствительности не уступают уже имеющимся, но более специфичны по отношению к росту возможных ассоциантов. Разработана накопительная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa, которая позволяет накапливать микробную массу из концентрации от 10 микробных тел в см³.

Практическая значимость. Разработанные методы бактериологического выделения Pseudomonas aeruginosa позволяют выделять и идентифицировать микроорганизм данного вида в течении 72-96 часов.

Разработанные элективные среды УГСХА-Рз.а1э и УГСХА-Ps.23 имеют чувствительность, способную выделить Pseudomonas

8 aeruginosa из возможных ассоциантов в концентрации от 20 микробных тел в см³.

Разработанная накопительная среда УГСХА-Рв.Зэ позволяет в течении 24-48 часов накапливать Pseudomonas aeruginosa из концентрации от 10 микробных тел в см³, при этом ингибируется рост ассоциантов.

На защиту выносятся следующие положения.

1. Конструирование бактериологических методов выделения и
идентификации Pseudomonas aeruginosa из: а) патологического мате
риала; б) объектов внешней среды.

2. Конструирование среды накопления для Pseudomonas aeruginosa.

3. Конструирование элективных сред для Pseudomonas aeruginosa.

Похожие диссертации на Разработка бактериологического метода выделения и идентификации Pseudomonas aerugnosa

Совершенствование лабораторных методов выделения и идентификация микобактерий туберкулеза у крупного рогатого скотаТаллер, Любовь Аркадьевна

Совершенствование методов идентификации CAMPYLOBACTER FETUS путем определения молекулярных характеристик ДНК и выделение фаговГарг Судхи Ранджан

Разработка методов бактериологической диагностики кишечного иерсиниоза сельскохозяйственных животныхПомеранцев, Дмитрий Александрович

Разработка методов лабораторной диагностики цирковирусной инфекции свинейТимина Анна Михайловна

Разработка метода получения стерильных вирусосодержащих суспензий для изготовления противоящурных инактивированных вакцинБорисов, Владимир Владимирович

Разработка методов диагностики, лечения и профилактики при ассоциативном течении дирофиляриоза с чумой плотоядныхФисько Михаил Александрович

Разработка метода культивирования патогенных микобактерий на перевиваемой культуре клеток Алексеев Александр Юрьевич

Разработка методов иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней Каньшина Анжелика Владимировна

Разработка методов лечения чумы плотоядных и парвовирусного энтерита собак с использованием химиопрепаратов абактана-Р и абактана-ДМакарова Наталья Николаевна

Разработка новых методов генодиагностики болезни Марека и определение их роли в системе противоэпизоотических мероприятийГородов Владимир Сергеевич