Введение к работе
I.I. Актуальность темы. Лихорадка Ку одіш из опасных болез
ней животных_и людей,-Продолжает-оставаться важной проблемой ве-
теринарии и медицины. Её значение становится очевидным, если учесть наличие массивных природних очагов инфекции, включающих практически всех млекопитающих, птиц, многие виды клещей, образование вторичных антропургических очагов, стойкость возбудителя к факторам внешней средн. разнообразия путей передачи, а также высокую чувствительность к ко:;сиелл8м ненкмушых лодей я животных (Н.И.Федорова, 1968; К.И.Лобан, 1974; А.Б.Дайтер а др., 1978; А.И.Коршун и др., 1983; Р.Г.Госманов и др., 1984, 1985; Р.Х.Юсу-Нов, 1987; Р.И.Ситдиков, 1989; И.а.ТартС0ВЯЧ Я Др., 1990).
У сельскохозяйственных животных болезнь протекает энзоотически, преимущественно бессикпто?дно с накоплением специфических антител в крова и аллергизэцвей организма (Р.Г.Госманов и др., Р.Х.Юсупов, 1987; Р.И.Ситдиков в др., 1989). Инфекция может протекать остро и хронически; острый процесс продолжается 2 месяца и заканчивается выздоровлением. Хроническая же патология длятся долго, вплоть до 2 лет, часто клинически напоминая бруцеллез.
По данным Р.Г.Госмаяова, Р.Х-Юсупова (1938, 1989) подтверждением диагноза болезни является выделение коксиелл Бернета из крови, мочи или мокроты, что возможно лишь после заражения этими материалами морских свинок и белых мишей от больных животных. Одного ато осуществимо ять в специализированных лабораториях.
В связи о большими трудностями роспозкаваизя лихорадки Ку по клиническому симдтомскокшлексу правильный диагноз может быть установлен лишь с учетом эпидемиологических, клинических и лабораторных данных (Б.П.Богомолов и др., I960; К.Д.дгзшяов, 1981; И.З.Торасевач и др., 1388; Р.Г.Госыакоа и др., 1989). Однако лабораторные метода (РА, РДСК и бвопроба) в той иди иной степени обладают различными недостатками. Так, баодогкчэокая проба требует продолжительного времени наблвдепия за подопытными ЯЙЕОТНКМЗ - до 12-24 суток, постановка РДСК дает положительные результаты только при наличии определенной концентрации антител в сыворотке крови подозрительных в заражении животных.
В последнее время для ускоренной лабораторной диагнеотйки инфекционных болезней аивотных весьма успешно разрабатывается
метод иммуноферментного анализа (ИфА), основанный на использовании антител и антигенов, меченных ферментом (И.Ф.Вишняков и др., 1983; Н.З.Хазипов и др., 1983; Г.Х.Ильясова и др., 1983, 1995; Н.А.Хишатуллина и др., 1985; Г.Ф.Коромыслов и др., 1985; Л.К. Эрнст и др., 1989;'Р.Х.Юсупов и др., 1989, 1995; В.А.Мищенко и др., 1995; E/^vj// eial. , 1971; Voile г e.t dl. , 1978 и др.). К его преимуществам относят высокую чувствительность, простоту постановки реакции, воспроизводимость, возможность обследования больших количеств проб в предельно короткие сроки. В специальной литературе имейся, в частности, сообщения по применению иммунопе"роксидазной реакции для обнаружения антигена возбудителя лихорадки Ку в органах больных людей (И.В.Тарасевич и др., 1988; Н.К.Токаревич и др., 1989). Однако к началу наших исследовании этот метод в ветеринарии не разрабатывался для обнаружения возбудителя лихорадки Ку и специфических к нему антител. В плане усовершенствования методов диагностики лихорадки Ку, как показывают единичные сообщения, перспективным является МФА - метод флуоресцирующих антител (К.Ковачевэ, 1989; Р.М.Ситдиков и др., 19Ь9). Таким образом, дальнейшее усовершенствование и изыскание аффективных методов диагностики лихорадки Ку по-йрежнему остается очень важной задачей практики здравоохранения а ветеринарной медицины.
1.2. Цель Я задачи исследований. Основная цель исследований - дать научно-практическое обоснование эффективности применения метода ІШ и ША для ускоренной диагностики лихорадки Ку и титрования специфических антител в сыворотке крови зараженных животных.
В связи с этим били поставлены следующие задачи:
-
Разработать твердофазный метод ИФА и МФА для выявления антигена возбудителя лихорадки Ку, изучить эффективность их в сравнении с онопробой на мышах, РДСК и установить возможность их применения,
-
Разработать непрямой вариант твердофазного метода ИФА для титрования антител к возбудителю лихорадки Ку, изучить эффективность, его в сравнении с РДСК, установить возможность его применения.
-
Изучить некоторые иммунобиологические свойства возбудителя лихорадки Ку (патогенность в отношении овец, антигеиность в ИФА и РДСК после очистки).
-
Разраоотать проекты наставлений по применению иммуиофер-
мвнткого анализа й метола флуоресцирующих зктател для лзботтор-ной диагностики лихорадки Ку жязсшшх.
1.3.-Научная; новизна работы. Лйгервые в ветеринарной практике
ракработан способ мзготовдеякя кммужферменткнх коиъвгатов для ИФА с иснользоіяиибм иммуноглобулинов кроликоз к возбудителю ля-хорсдки Ку с сохранением зктивнсств фермент», знсокой специфической активности иммуноглобулина, оптсиааыа.тг отношением фермента и иммуноглобулина в конъюгате. Показана високая чувствителъ-ьооть прямого варианта ЛФА с асиодьэолзниек получаїяого кояъвга-?з, для диагностики лихорадка Ку по обааругкниа возбудителя з патологическом материале. Разработан непрямой варшнт ИФА для выявления специфических антител при ляхорядке Ку уявотянх. Рдсрвне ус;аииьлена возможность использования для сенсибилизации плзншет специфического антигена возбудителя лихорадка Ку I фазы, полученного нами по методике Р.Г.Постанова в др. (IBM) для РДСК. Получен глобулин флуоресцирующий для выявления возбудителя лихорадки Ку методом флуоресцирующих антител в мазквх-отпечатках из органов больных яивотиых. Новизна полученных результатов подтверждены рационализаторскими предложениями # 10 в & 12.
I-4- ВШШ^Ш?8ЛШШ5Ш^Й9Ш^ Я оонзвапва эксяергыся-тзлькых исследований подучены специфические ящунофсрмантяий коньвгзт и иммуноглобулин флуоресцирувдвй, позволявшие есотзетат-2Є5Ш0 с помощью ИФА и М'М выявлять антиген возбудителя лихорадки Ку в течение 2-5 часов в 33-ГСОД! случаях. Ш оскованвіз применения антигена для РДСК разработан матод иммуноферкепгного анализа для выявления специфических антител в сиворотко крови больных к ранние сроки по сравнении РДСК. Составлены Эрекеннке наставления по их применению.
1.5. Апробация резудьтатоз исследований.- Ооковныз результата работ доложены на:
научной конференции студентов я преподавателей Вузов ТАССР (г.Казань, 1991);
Республиканской научно-производственной конференция (г.Казань, 1991,.1992, 1994);
научной конференции Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусология и микробиологии (г.Шжроэ, 1992); ,
Всероссийской науч'до-пройзводственноЗ яонфоренцав "Гигиена,
эетсанитария н экология животноводства" (г.Чебоксари, 1994); - заседаниях. Учеїшх Советов КВИ (1991-1994 гг.).
-
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 7 статей и 2 рационализаторских предложения.
-
Внедрение результатов исследований. Результаты проведенных исследований внедрены в лаборатории иммунологии ВНИКІ (г.Казань) в используются при диагностических исследованиях на лихорадку Ку с.-х.животных и изготовлении соответствующих диагностических наборов.
-
Основные положения, вынесенные на защиту;
-
Научно-практическое и экспериментальное обоснование возможности применения И&А и МФА в качестве ускоренных методов диагностики лихорадки Ку животных по обнаружении возбудителя и специфических к нему антител.
-
Результаты отработки оптимальных условий приготовления основных компонентов Шк и МФА и определения режимов их применения.
-
Разработка наставлений по применению №А и МФА для ускоренной лабораторной диагностики лихорадки Ку животных,
1.9. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа
изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из вве
дения, обзора литературы собственных исследований, обсуждения
результатов, выводов, практических предложений, списка литерату
ры и приложения. Материала диссертаций иллюстрированы 8 фотогра
фиями, 2 схемами и 12 таблицам". Список литературы включает 216
лоточников (145 отечественных ь 71 зарубежных авторов).
