Введение к работе
1
Актуальность проблемы
Пограничная болезнь овец (ПБО, Border disease, Syndrom "X", "Hairy shakers", "Fuzzy lambs") - вирусная конгенитальная болезнь овец, возникающая при заражении суягных овцематок, характеризующаяся абортами, рождением мертвых и слаборазвитых ягнят с ненормальным шерстным покровом, тремором мускулатуры тела и замедленным развитием. Исход болезни зависит от стадии суягности, на которой произошло заражение овцематки и плода, и может проявляться смертью плода с его последующей резорбцией, мумификацией или абортом, мертворождением или смертью приплода в первые дни жизни. В ряде случаев наблюдается рождение молодняка с типичными клиническими признаками, или персистентно инфицированных ягнят (Boden Е. et al., 1991; Brennand D.M. et al., 1986). Описаны отдельные вспышки ПБО, сопровождавшиеся значительным процентом (до 50%) гибели взрослых овец (Barlow R.M. et al. 1960; Campen H.V. et al., 1998; Chappuis G. et al., 1989).
В настоящее время болезнь регистрируется во всех странах с развитым овцеводством, где наносит значительный экономический ущерб (Boden Е. et al., 1991; Bonniwell М.А. et. al., 1987; Brizzi A. et al., 1996; Campen H.V. et al., 1998).
Возбудителем болезни является вирус, имеющий близкое антигенное и генетическое родство с вирусами классической чумы свиней (КЧС) и вирусной диареи КРС (ВДКРС) (Acland Н.М. et al., 1972; Becher P. et al., 1994, 1995, 1996; Brugere-Picoux J. et al., 1984). По данным МКТВ вирусы ПБО, ВДКРС и КЧС представляют род Pestivirus, семейства Flaviviridae (Murthy F.A. et a]., 1995). В настоящее время доказано, что синдром ПБО может быть вызван инфицированием суягных овцематок не только "истинным" вирусом ПБО, но также и вирусом ВДКРС (French EL. et а]., 1974; Snowdon W.A. et al„ 1975; Barlow R.M. et al., 1980; Paton D.J. et al., 1994; Sullivan D.G. et al., 1995). Кроме того, доказана возможность перекрестного заражения овец, КРС, коз и свиней вирусами ПБО, ВДКРС и КЧС (Barlow R.M. et al., 1975,1980; Shimizu M. et al., 1989; Loken T. et al., 1991; Paton D.J. et al., 1994,1997).
Способность представителей рода Pestivirus преодолевать межвидовой барьер и вызывать инфекционный процесс у всех парнокопытных, культивироваться на клеточных культурах различного происхождения и давать перекрестные реакции при серологическом тестировании, обусловливают определенные трудности в постановке соответствующего диагноза при пестивирусных инфекциях животных. Это особенно важно при дифференциации возбудителя ПБО от других пестивирусов, что связано с различным характером проводимых мероприятий, необходимыми для ликвидации очага инфекции.
Таким образом, ПБО, как отдельная нозологическая единица представляет собой важную проблему в ветеринарии. Это обусловлено непосредственными экономическими потерями при вспышке болезни, трудностью дифференциации вируса ПБО из-за близкого генетического и антигенного родства с другими пестивирусами, опасностью распространения нецитопатогенных пестивирусов-контаминантов среди вое-
Общая характеристика работы'
приимчивого поголовья животных при использовании в биологической промышленности, в частности в производстве вакцин, биоматериалов овечьего происхождения.
В современных социально-экономических условиях с расширением международных торгово-экономических отношений возрастает опасность заноса инфекции из различных регионов мира и неконтролируемого ее распространения в России и странах СНГ. До сих пор в России исследования в области ПБО не проводились, однако, указанные выше причины определяют необходимость разработки средств и методов лабораторной диагностики и изучения эпизоотической ситуации по данной болезни в России. Не менее актуально создание средств специфической профилактики ПБО. Перечисленные проблемы обусловили выбор цели настоящей работы.
Цель и задачи исследования
Целью настоящей работы является разработка средств и методов лабораторной диагностики ПБО.
Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:
-
изучить способность вируса ПБО к репродукции в первичных и перевиваемых культурах клеток, условия, позволяющие получать наибольшее накопление вируса;
-
изучить формы течения инфекции, обусловленной вирусом ПБО, у овец;
-
разработать способ получения сывороток, специфичных вирусу ПБО, и пригодных для использования в диагностических целях;
-
разработать лабораторные методы диагностики ПБО;
-
разработать схему лабораторной диагностики ПБО.
-
провести исследования полевых сывороток крови овец и коз с целью определения распространенности пестивирусных инфекций в популяциях мелких жвачных в отдельных регионах России.
Научная новизна
Научная новизна проведенных исследований состоит в том, что:
установлено, что наиболее чувствительными к вирусу ПБО являются первичные культуры клеток, ТЯ и ПЯ;
показано, что заражение вирусом ПБО овец романовской породы вызывает инаппарантную форму болезни, при которой наиболее вероятным путем распространения вируса является вертикальный;
разработан метод выделения вируса ПБО в культуре клеток ТЯ с его последующей идентификацией в РИФ;
для серологического типирования вируса ПБО отработана перекрестная РН; с целью детекции антител к ПБО разработаны два варианта РН; для обнаружения РНК вируса ПБО и дифференциации его от других пестивирусов разработана ПЦР.
5щая характеристика работы
оактическая значимость
Для диагностики ПБО предложены тесты: реакция иммунофлюоресценции, ре-:ция нейтрализации и полимеразная цепная реакция.
Разработаны "Методические указания по лабораторной диагностике ПБО" , ут-ржденные директором ВНИИВВиМ.
Разработанные средства и методы лабораторной диагностики ПБО внедрены в іучно-исследовательскую и диагностическую работу во ВНИИВВиМ.
сновные положения, выдвигаемые на защиту:
-
Результаты исследований по определению оптимальных условий культивирования вируса ПБО в культурах клеток.
-
Результаты изучения форм течения инфекции, обусловленной вирусом ПБО, у овец романовской породы в пост- и пренатальном периодах и формы проявления данной инфекции у свиней.
-
Результаты разработки методов и схемы лабораторной диагностики ПБО с использованием иммунофлюоресценции для идентификации вирусного антигена, перекрестной реакции нейтрализации для дифференциации вируса ПБО от других пестивирусов, полимеразной цепной реакции для обнаружения и дифференциации РНК вируса ПБО и реакции нейтрализации - для выявления специфических антител.
пробация результатов работы
Материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях в ИЭВ (г. Москва, 1998), ВНИИВВиМ (г. Покров, 1998) и на заседаниях Ученого Сота ВНИИВВиМ (г. Покров, 1997-1999). Результаты основных научных исследова-ш подтверждены комиссионными испытаниями.
убликация результатов исследований
По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.
бъем и структура диссертации
Диссертация изложена на 148 листах машинописного текста и включает еле-тощие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты соб-венных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и список [тературы (254 источника, в том числе 14 отечественных). Работа иллюстрирована ' таблицами, 22 рисунками и дополнена приложением.
Собственные исследования
Похожие диссертации на Разработка средств и методов лабораторной диагностики пограничной болезни овец
