Введение к работе
I.I. Актуальность темы. В этиологии желудочно-кишечных и респираторных заболевании молодняка сельскохозяйствэкных животных, в условиях интенсивного ведения животноводства, наряду с патогенной микрофлорой, повысилась роль условно-патогенных микроорганизмов. Концентрпция поголовья на малых площадях, изменение микроклимата в помещениях способствуют накоплению условно-патогенной микрофлоры, которая при пассаже на животных усиливает свои вирулентные свойства и может вызывать массовые заболевания у новорожденного молодняка.
Данные литературы последних лет свидетельствуют о возрастании роли синегнойной палочки, как этиологического фактора при заболеваниях сельскохозяйственных животных.
Эпиэоотслогическйе особенности синегнойной инфекции, ее диагностика, а также методы профилактики и лечения до последнего времени выяснены недостаточно. Среди ученых, занимающихся данной инфекцией, нет единого мнения о роли Pa.aeruginosa в патологии животных. Некоторые авторы (В.Ф.Шаталов с соавт.,1986, В.П. Радченкоп с соавт., 1987} отрицает значение этого возбудителя в патологии животных. В то же время, ряд отечественных и зарубежных ученых доказали, что ейнегнойная палочка является этиологическим фактором при заболеваниях сельскохозяйственных животных. Опытами В.И.Парусова, 1974, Н.Н.Михайлова, В.А.Зудилина, 1975, Е.В.Кочер-гиной-НикитинскоЙ, 1986, 1987 и др.было установлено, что инфицирование коров синегнойной полочкой сопровождается развитием эн* дометритов, мертворождаемостъв, абортами, гибеяьо эмбрионов, маститами, а у быков-производителей она вызывает воспаление органов мочеполовой системы (А.Г.Шипкцин, 1981, В.А.Зудиаин,1984 и др.). У пушных зверей псевдомоноз протекает » виде геморрагического воспаления легких и септицемии (Н.К.Седов, І98І, Е.П.Данилов,
2 1984}. Доказана, также отиологическая роль возбудителя при заболеваниях птиц (3.И.Артемьев, Н.А.Радчук, 1976,1977, В.Т.Больных с совет., І9Й7, С.Г.Африкантов с соавт., I9U8). У молодняка сельскохозяйственных животных инфицирование Ps.aeruginosa вызывает же-лудочно-ккаечные и респираторные заболевания {З.М.Ильина, 1975, В.И .Продано в. с соавт., "1983, Б.А.Корж, Я.Д.Злонкевич, 1979,1988).
В то же время, как показывает практика, многими ветеринарными лабораториями не уделяется должного внимания данному возбудителю, что связано с отсутствием единых подходов в. диагностике псевдомоноза, а также налой специфичности клинических симптомов и сходством с заболеваниями другой этиологии, что значительно затрудняет дифференциации заболеваний молодняка и правильную организацию мероприятий по борьбе с ними. .
Неизученность патогенеза болезни, высокая устойчивость возбудителя к антибиотикам, отсутствие специфических средств терапии и профилактики требую? всестороннаго изучения роли сянегнойной палочки в этиологии заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных.
Учитывая приведенные сообщения, остро встает вопрос о необходимости более глубокого изучения вопросов патогенеза, усовершенствования диагностики, лечения, средств и методов профилактики, а также выяснения роли отдельных- факторов, способствующих и предрасполагающих возникновению болезни у телят.
1,2. Цель и задачи исследования; В нашей работе ставилась цель: изучить роль Ре. aeruginosa в этиологии заболеваний те. ля? раннего: возраста, разработать. н предложить практике подходы к распознованию болезни, и определению путей й методов борьбы с сииегнойной инфекцией.
Для решения этих вопросов Поставлены следующие задачи:
1. Изучить культуральные, морфологические, тинкторкальные,
биохимические, патогенные и антигенные свойства ытаммов
Рг,. aeruginosa , изолированных из патологического материала от павших телят и из спермы быков-производителей.
-
Изучить чувствительность выделенных* штаммов Ps. aeruginosa к антибактериальным и дезинфицирующим препаратам.
-
Определить в эксперименте этиологическую роль синегноп-ной палочки в патологии телят раннего возраста. Изучить клиническую, патологоанатомическую и морфологическую картину при псевдо-монозе телят.
1.3. Научная новизна. Изучена распространенность синегной-ной инфекции в-хозяйствах Воронежской и Липецкой областей. Экспериментально доказана роль Ра. аезлісіпова в этиологии заболеваний телят раннего возраста. Изучена выживаемость возбудителя во внешней среде, а также чувртвительность его к действию антибактериальных и дезинфицирующих препаратов.
Г.4. Практическая ценность работы. Полученные данные расширяют имеющиеся сведения о синегнойной инфекции у молодняка сельскохозяйственных животных. Предложены методы лабораторной диагностики псевдомоноза, а также средства терапии и профилактики данного заболевания.
1.5. Апробация работы. Основные материалы диссертации изложены и обсуждены на Всесоюзной конференции "Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных" (Львов,'1988), на региональной научно-практической конференции "Вклад молодых ученых ДЧЗ в интенсификацию сельскохозяйственного производства в новых условиях хозяйствования" (Воронен, 1989) и научных конференциях профессорско-преподавательского состава,
4 научных сотрудников и аспирантов ветеринарного факультета Воронежского сельскохозяйственного института имени К.Д.Глинки (Воронеж, 1989 и 1990гг.).
1,6. Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 4 научных статьях.
1.7. Объем и- структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и списка использованной литературы. Работа содержит 16 таблиц и иллюстрирована 12 рисунками. Список литературы включает 228 наименований, из них 53 иностранных авторов.
2. МАТЕРИАЛЕ! И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Работа выполнена в период с 1987 по 1989 год в лаборатории кафедры эпизоотологии и микробиологии Воронежского сельскохозяйственного института им.К.Д.Глинки ив хозяйствах Воронежской и. Липецкой областей.
В процессе выполнения работы были использованы методы: опи-зоотологический, экспериментальных исследований, клинический, па-тологоанатомический, серологический, гематологический, бактериологический и гистологический.
Бактериологическому исследованию подвергнуто 144 трупа телят и 21 труп поросят, в опытах было использовано 322 белых мыши , экспериментальное заражение проведено на 5 телятах. Выделено и изучено ОЙ итаммов Pa.aerugiuoDa , из которых 12 были изолированы из спермы быков-производителей, 70 - из трупов молодняка сельскохозяйственных животных, в том числе 60 штаммов выделено из патологического материала от пэеших телят, 10 - из трупов поросят. Б работа использовано 12 эталонных штаммов
5 коллекции Хабс, предоставленных ВП1НИ ветпрепаратов.
Посевы из патологического материала от павших животных проводили на ШІА, Ш1Б, среду Эндо и селективную питательную среду с и-цетилпиридиний хлоридом (К- ЦДХ). У выделенных культур изучали морфологические, тинкториальные, биохимические, серологические и патогенные свойства по общепринятым методам в бактериологии.
для идентификации культур синегнойной палочки использовали схему, предложенную С.К.Борисовой и И.С.Богатовой (1983). Пигмён-тообрэзование определяли по методике, описанной В.А.Зудилиным (I9B2).
Для определения окислительного или ферментативного типа расщепления глюкозы использовали среду Хью-Лейфсена в модификации Л.Г.Воронежской (1970). .
Серологическое типирование'выделенных культур проводили методом постановки реакции агглютинации на стекле с использованием поливалентных и моновалентных сывороток для диагностики псевдомо-ноза, согласно "Временного наставления по применению набора 0-аг-глютинирующих сывороток для диагностики псевдомоноза" (Утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 15 декабря 1982 года).
Патогенность культур возбудителя изучали на белых мышах массой Ш-20 граммов путем внутрибргошинного их заражения смывом агаровой культуры в дозе Q3-Q5 мл в концентрации 500 млн.микробных клеток в I мл.
Чувствительность выделенных культур к антибактериальным препаратам определяли согласно "Методическим указаниям по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных" (Утверждены Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 30 октября 1971г.). Для этого
применяли метод диффузии в агар с использованием стандартных дисков, содержащих антибиотики. Количественную чувствительность определяли методом серийных разведений в жидкой питательной среде. За минимальную подавляющую концентрацию принимали наименьшую концентрацию антибиотика, вызывающую полную задержку роста микробов.
Аминокислотный состав белков микробных клеток Ps.aeruginosa определяли на автоматическом аминокислотном анализаторе ААЛ-339.
Выживаемость культур синегнойной палочки на объектах внешней среды определяли путем инфицирования тест-объектов (доска, кирпич, вода, почва, навоз, комбикорм) суточной агаровой культурой, с последующим посевом через определенное время проб на селективную питательную среду с N -ЦДХ.
Действие дезинфицирующих средств, оптимальную их концентрацию и экспозицию определяли путем инфицирования тест-объектов смывом суточной агаровой культуры Pa.aeruginosa , с последующим нанесением различных дезинфицирующих средств. Определение дезинфицирующего действия проводили по методике А.А.Полякова (1975).
Опыты по экспериментальному заражению телят культурами Рз.aeruginosa были поставлены на 5 телятах 7-8 дневного возраста,
Животных заражали смывом суточных агаровых культур синегнойной палочки, выделенных ранее от павших телят, путем.перорально-го, внутривенного и внутритрахеального введения разных доз возбудителя. За опытными телятами в течение 2-х недель велось клиническое наблюдение с-ежедневным измерением температуры тела, пульса и частоты дыхания утром и вечером. Перед началом опыта, на 5 и 10 день после заражения у телят брали кровь из яремной вены для серологических и гематологических исследований.
Гематологические исследования проводили по общепринятым ме-
тодам. Определение количества лейкоцитов и эритроцитов проводили в счетной камере Горяева, гемоглобин определяли по методу Са-ли, количество общего белка - рефрактометрически. Относительное содержание Т-лимфоцитов определяли методом спонтанного розетко-образования с эритроцитами барана (Р.В.Петров с соавт., 1976), а количество В-лимфоцитов, несущих рецептор для третьего компонента комплемента - по методу Б.И.Кондаурова с соавт. (1981).
Выявление антител в сыворотке крови проводили в пробирочной реакции агглютинации в разведениях 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1:400. В качестве антигена использовали взвесь живо.й (24-часовой) культуры синегнойной палочки в изотоническом растворе хлорида натрия, содержащей I млрд.микробных клеток в I мл.
Гистологические исследования проводили по общепринятой методике, препараты окрашивали гематоксилин-эозином.