Введение к работе
Актуальность проблемы. Болезнь Марека (БМ) относится к группе наиболее опасных инфекционных заболеваний кур, возбудителем которой является ДНК-содержащий вирус, отнесенный к семейству герпесвирусов. Характерным для болезни является быстрое распространение инфекции среди восприимчивого поголовья. Заболеваемость птиц в невакцинированных стадах составляла 25-30% и может достигать 60%.
В последние годы болезнь Марека регистрируется_практически во всех странах мира с развитым промышленным птицеводством. Экономический ущерб от БМ складывается из падежа и вынужденного убоя птицы, снижения показателей продуктивности, а также из затрат на ветеринарно-санитарные мероприятия.
Однако в настоящее время во многих регионах мира отметили снижение способности вакцин защищать птиц от болезни Марека. Это связывают с появлением новых высоковирулентных штаммов вируса болезни Марека, наличием у цыплят высоких титров гомологичных материнских антител к вакцинному вирусу и снижением иммуногенности вакцин на основе вируса герпеса индеек.
Вакцинопрофилактика болезни Марека занимает ведущее место в борьбе с этим заболеванием. Для профилактики болезни Марека применяют различные вакцины, обладающие достоинствами и недостатками.
В настоящее время наиболее широко используются вакцины из смесей первого и третьего, второго и третьего и всех трех вирусных серотипов. Эти препараты производятся в жидкой (ассоциированной с клеткой) форме, требующей хранения в жидком азоте, так как из-за незначительной стабильности вирусов второго и первого серотипов вне клетки получить свободный от клеток препарат очень сложно. Однако в условиях Российской Федерации, когда птицефабрики Сибири и Дальнего Востока удалены от производителей вакцин, у хозяйств возникают трудности в транспортировке и хранении таких вакцин. Необходимо отметить, что эти препараты представлены живыми замороженными клетками с ассоциированным в них вирусом. Нарушение правил перевозки, (хрмй66Ч(Шй&^Яки и применения способствует разрушению клеток, снижению [ БИБЛИОТЕКА^ /
4 титра вируса и неравномерной дозировке, что является причиной отхода птицы от болезни Марека.
В связи с этим в удаленных регионах целесообразно применение вакцин из третьего серотипа, (вируса герпеса индеек), которые можно готовить в сухой форме, и для транспортировки которой не требуются специальные условия.
Учитывая вышеизложенное, усовершенствование технологии получения сухой вирусвакцины против БМ на основе вируса герпеса индеек с целью изготовления эффективного препарата является актуальной задачей.
С технологической точки зрения при промышленном производстве вакцин против БМ наибольший интерес представляет высокая эффективность выращивания клеток и максимальный выход вируса. Высокое накопление вируса болезни Марека связано с оптимальным подбором условий культивирования. Кроме этого, для получения качественных вакцин против БМ необходимо подбирать штамм вируса, обладающий высокой иммуногенной активностью, отработать метод, обеспечивающий максимальное освобождение вируса из клетки, а также подобрать разбавитель для лиофилизированных препаратов, обеспечивающий стабильность вируса в разведенном состоянии.
Указанные выше проблемы являются актуальными и послужили основной предпосылкой для исследований по усовершенствованию технологии получения сухой вирусвакцины против болезни Марека.
Цели и задачи исследования. Целью работы было усовершенствование технологии получения сухой вирусвакцины против болезни Марека из вируса герпеса индеек. Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:
- получить производственный штамм вируса герпеса индеек, обладающий
высокой иммуногенной активностью;
- отработать параметры культивирования вируса герпеса индеек для
получения сухой вирус вакцины против БМ в производственных условиях;
- подобрать питательные среды и компоненты, обеспечивающие потребности
клеток и вируса;
изучить условия получения высококачественного, свободного от клеток, зируса;
изучить стабильность лабораторных образцов сухой вирусвакцины против Золезни Марека в процессе хранения при различных температурах;
подобрать оптимальный разбавитель лиофилизированных препаратов;
определить иммуногенные свойства лабораторных образцов сухой вирусвакцины против болезни Марека в лабораторных и производственных условиях.
Научная новизна. Научная новизна состоит в том, что в результате проведенных исследований:
получен штамм вируса герпеса индеек («ВНИИЗЖ 110»), обладающий высокой иммуногенной активностью, пригодный для получения сухой вирусвакцины против болезни Марека;
изучены иммунобиологические свойства вакцинного штамма «ВНИИЗЖ 110» вируса герпеса индеек;
отработаны параметры культивирования производственного штамма «ВНИИЗЖ ПО» вируса герпеса индеек в лабораторных и производственных условиях;
отработаны условия получения высокоиммуногенного свободного от клеток вируса герпеса индеек штамма «ВНИИЗЖ 110»;
изучена стабильность лабораторных образцов сухой вирусвакцины против БМ из штамма "ВНИИЗЖ 110" при различных температурах;
подобран разбавитель лиофилизированных препаратов;
- определены иммуногенные свойства лабораторных образцов сухой
вирусвакцины против БМ из штамма «ВНИИЗЖ 110» в лабораторных и
производственных условиях.
Научная новизна диссертации подтверждена получением патента на сухую вирусвакцину против болезни Марека и способ ее изготовления (патент №2144376, 1999г.).
Практическая значимость результатов исследований. На основании проведенных исследований разработан комплект методических и нормативно-
технических документов, регламентирующих основные этапы получения сухой культуральной вирусвакцины против болезни Марека из штамма «ВНИИЗЖ 110», которые утверждены директором института и рассмотрены с положительным решением Ветфармбиосоветом.
Отработаны методы и условия культивирования вакцинного штамма
«ВНИИЗЖ 110» в первичной культуре клетк куриных фибробластов и изучены
оптимальные условия его выделения из клеток Подготовлены рекомендации по
определению биологической активности клеточно-ассоциированного и свободного
от клеток вируса болезни Марека. ~"
Усовершенствована технология изготовления высокоиммуногенной сухой вирусвакцины против болезни Марека из штамма «ВНИИЗЖ 110» вируса герпеса индеек, создающая напряженный и продолжительный иммунитет у вакцинированных птиц.
Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:
штамм вируса герпеса индеек (штамм «ВНИИЗЖ ПО»), обладающий высокой иммуногенной активностью при болезни Марека;
параметры культивирования производственного штамма "ВНИИЗЖ 110" вируса герпеса индеек;
питательные среды и компоненты для культивирования клеток и вируса герпеса индеек (штамм «ВНИИЗЖ ПО»);
условия получения высокоиммуногенного свободного от клеток вируса герпеса индеек;
параметры лиофильной сушки для получения сухой вирусвакцины против болезни Марека;
сохраняемость сухой вирусвакцины против болезни Марека из штамма "ВНИИЗЖ 110" при различных температурах;
разбавитель лиофшшзированньгх препаратов;
иммуногенная активность сухой вирусвакцины против болезни Марека из штамма "ВНИИЗЖ ПО" в лабораторных и производственных условиях.
Апробация результатов работы. Материалы диссертации были доложены на международной научно-производственной конференции в ВНИВИПФиТ
7 . г. Воронеже (1999 г.), и на международной научно-практической конференции в Белорусском НИИЭВ г. Минске (2000 г.), и на заседаниях ученого совета ВНИИЗЖ в 1998 и 1999 годах.
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано б научных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 листах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы, который включает 256 источников, в том числе 33 отечественных. Работа иллюстрирована 20 таблицами, 9 рисунками и дополнена приложениями.
Автор благодарит сотрудников ВГНКИ Смоленского В.И., Баррос Е.В., ВНИИЗЖ: А.В. Борисова, В.Г. Андреева, P.M. Онищенко, а также сотрудников отдела культивирования клеток и вирусов и ОКНИИ и МС за практическую и методологическую помощь при выполнении и оформлении диссертации.