Введение к работе
Актуальность темы. В последнее время большое значение приобрела проблема контаминации культур клеток вирусами в связи с их широки:.! использованием как для научных исследовании в области вирусологии, так и в биотехнологии для производства различных вакцин и диагностических препаратоз (А. Я. Самуйленко, 1990; В. Н. Тарасов, 1979; 1991; А. , В. Kforovntz, 1989).
Здектрснномикроскопическое исследование культур клеток раз-
личного происхождения сви^етедьстует о том что неконтаминиоован-
ныэ пепЕнчнь!е і! пе^внЕаемыэ линии клеток в лабоизтооной практике
ur>frnc»TTOL-vpr»a ігпатша уляпит* { V Л У^ттаи-пР '1 ОрП- М Р Wo Tovnnp
"p ~. ih^^ni-D I 0;-^. ІООГ" 'h V l^T^iinunPq и ттгі "1009* Y Ho.] 1 ОГ.ГІ at
al. . 1980).
~ип'гсная контаминация создает серьезные препятствия в мизей-нсй работе с изолятами и штаммами Еирусой, в получении антисыво-роток, искажает результаты серологической идентификации Еирусов, а также мс.гйт слу:;с.ть причиной невозможности получения искомых вирусных продуктов с высокой удельной активностью (М. С. Малахова, В. В. МакароЕ, 1990).
Выявлена вирусная контаминация целого ряда вакцинных препаратов, когда в качестве субстратов для получения вируссодержэлдего материала использовали переистентно-контаминированные культуры клеток (В. Г. Добротворцеза, Е К Миловидова, 1981; Ф. Феннер и др. , 1977; Г.Г.Миллер, I960), поэтому в числе основных критериев стандартизации биологических систем по LHayf lick (1970) важнейшим является отсутствие вирусов-контаминантов..
Перевиваемые культуры клеток свиного происхождения часто бывают контаминированы вирусом классической чумы свиней (КЧС)
ГРА "unro^Q 't Ovff» М Г,а і"1 а о г r-л і 0(лД« І С7"~,* і Dt hoi г^ л r ql
1971; H. Laude, 1978; 1Q8Q; j. Mouse et al. , 1338).
г* аФпіі проблемой столкнулись и отечественные исследователи Е области еєтє^инзокой Еиоусологпи и микробиологии, когда ВО БНИИВ"
РттК/ лз ПЄпЄЕИЕаЄМОЙ ЛИНИИ КЛЄТОК ПОЧКИ ЭМбОИОНа СВИНЬИ { ППЭС) ОЫЛ
Du-nomiu высокотехнологичный клон клеток ППН-566 имеющий значительный прслисератиЕкыи потенциал, адаптированный к росту в лтгсплнзионных тгсловиях и обладающий ШИРОКИМ СПЭКТООМ ЧУВСТЕИТеЛЬ-
*гг>^оиг»211Д КОЛЛ^КТИЕ ИССЛЄДОЕаТЄЛЄИ. КОКТаМИНПГОЕаН ПЄРСИСТИОтгКЗИШМ
^..*[. ^1 ^wxll .--. - ... ..-.-..^4. ... .^ ..^.1.. 1 .u. . ^.- ^w..,r.l(.u^. —.......... ^.1^./ w 1. .4^
' ~'*. 'I*. *ИшНЯКОЕ И ^1^. . ivSS* B. 5. HtmHHHOE 1953).
'"^ль и задачи исследовании. Целью наяіпх исследований являлась дексктаминация перевиваемой культуры клеток почки эмбоиона свиньи (ШК-ббб) от персистирующего вируса.
В этой связи необходимо было решить следующие задачи:
изучить биологигіеск!ів свойства Еисл/сз~конталзшантз кульчу~ ры клеток ППК-ббб;
і^2.зоаботать модель персисте кпин вноиса-контаминанта е пе-ревиваемой культуре клеток почки поросенка іРК-15) и изыскать пути ее де контаминации от персистируюшего Еируса КЧС;
определить эффективность физико-химических воздействий на элиминацию Еируса-конташнанта из культуры клеток ППК-ббб;
разработать способ и схему деконтаминаши;
; - оптимизировать услоеия клонирования контаминированной культуры клеток ППК-ббб с целью деконтаминаши;
получить клоны клеток, свободные от персистирующего вируса , КЧС;
изучить и стабилизировать культурально-морфологическиа и
биологические свойства клонированных клеточных популяций, полученных из к*7льт,гг,ы клеток ПИК-566"
адаптировать полученный монсслойный вариант клона культуры клеток ПИК-556. оес6ояного от вигсз КЧС к суспензионном*7 выращиванию;
определить чувствительность клоное клеток ППК-ббб, свободных от персистирующего Еируса КЧС, к Еирусной репродукции.
Научная коеизна. ~с казана возможность эффективной ^^кснтсши-напии перевиваемых кт,гльттпл клеток свиного происхождения от
pan сасстан и апосбирсван способ ^э контаминации от интерк^7-
^оип^иппп ЕЧпи,ла Ч^С папапг^осюыпй КТГЛЬТТГРЫ КЛТОК РОт1КИ ЭМБРИОН0
свиньи.
Впервые пол^^чекы стабильные клоны перевиваемой культуры кле-ток почки эмбриона свиньи (ІШК-566), свободные от контаминанта-Еиптгса КчС.
Выявлена возможность дифференциации некоторых штаммов Еируса КЧС in vitro ка основе различия иммунобиологических и культураль-
w Охарактеризованы и оценены вирусрепродуцируюшие свойства но-еых клоное культуры . клеток ППК-ббб, деконтаминированных от персистирущего пестивируса.
Практическая" значимость. Полученные деконташшированные от
вируса КЧС культуры клеток ППК-ббб рекомендованы для использова
ния в биотехнологии. Разработаны и используются в практической
работе "Методические рекомендации по поддержанию и хранению кло
ное перевиваемой культуры клеток ППК-ббб, свободных от ви-
русз-контаминанта^ КЧС", утвержденные директором ЕНИИБВиМ
1-І. 12.199ІГ. ~
- 4 -poononn«patj да ВКЛЮЧЄН Е СООТВЕТСТВУЮЩИЙ КЗТЭЛОГ ПаСПООТ Не
деконтаминированную от вируса КЧС культуру клеток ПИК-бобu включенную в коллекцию клеточных линий ББШВБиМ.
Полеченные декоктаминиоованные от Еитэ^са КЧС клоны к^льт^фі клеток ГШК-ббб рекомендованы для использования е биотехнологии.
ОсноЕные поло лее кия диссе от анионной оаботы. выносимые на за* шит VI
1. 'Экспериментально-теоретическое обоснование необходимост; v эффективности де контаминации песевпваемых к*гльттгп клеток сеино
Г1"1 ПССTfCХС^ДеНИЯ ОТ ПЄССПСТПС^РСПІ^ГО Г^СТЧЕЧСУС0
ЇШК-666 от персистируюшего в ней вируса КЧС и получение клонов свободных от вируса-контаминанта.
3. Стабилизация культуральных, морфологических и кариологи ческих свойств деконтаминироЕакных клонов ППК-ббб.
Аппробация работы, Материалы диссертации доложены на научнь конференциях ЕНИИВЕиМ (1986-1994) и на заседаниях некого совеї ВНИИЕЕиМ (1986-1991).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 22 научных рг боты.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изле жена на 190 страницах машинописного текста и состоит из введени: обзооа литературы,' собственных исследований, обсуждения результі тов, выводов, практических предложений, списка литературы и 3' приложений. Работа иллюстрирована 33 таблицами и 25 рисункам Список литературы включает 322 наименования, в том числе 122 от чественных и 200 иностранных источников.