Введение к работе
Актуальность проблемы. Среди заболеваний вирусной этиологии
человека и животных значительное место занимают инфекционные
заболевания, вызываемые альфанирусами, в первую очередь вирусами
американских энцефаломиелитов лошадей. Последние включают трех
представителей: вирусы Венесуэльского (БЭЛ), Восточного (ВсЭЛ) и
Западного (ЗЭЛ) энцефаломиелитов лошадей. Указанные вирусы имеют
широкое распространение . на Американском континенте и
зарегистрированы в большинстве стран Северной, Центральной и
йкной Америки. Вирус ВЭЛ вызывает лихорадочное заболевание у
человека, которое при сравнительно невысокой летальности, в
значительном проценте случаев сопровождается, развитием стойких
нарушений здоровья выражающихся в параличах, парезах, упорных
головных болях- Заболевание склонно к эпидемическому
' распространению, описан ряд вспышек с вовлечением в эпидемический
процесс десятков тысяч человек. Особая актуальность данного
возбудителя обусловлена его ярковыраженной способностью к
аэрогенному инфицированию лабораторного- персонала, так как
исследовательские работы с вирусом ВЭЛ проводятся во многих
лабораториях мира. - s
. . Вышеизложенные свойства вируса ВЭЛ. обусловили проведение
Широкомасштабных исследований, направленных на всестороннее
изучение данного возбудителя с целью разработки .средств
диагностики, лечения и профілактики, вызываемого вирусом ВЭЛ
заболевания, и: в первую очередь, высокоэффективных вакцинных
препапатов. В настояще» время для создания иммунопрофилактических
средств нового поколения наиболее перспективными являются
следуйте направления: получение синтетических иммуногенных
пептидов, разработка - прокариотических и эукариотических продуцентов иммуногенных Оелков и создание рекомбинантных вирусов экспрессирушцих чужеродные белки. Достаточно полные данные об осооенностях структуры и организации вирусного генома и антигенной структуре вируса ВЭЛ сделали возможным проведение исследований, направленных на реализацию вышеприведенных подходов к созданию современных средств вакцинопрофилактики. . .
.Цель и задачи исследования. При проведении данной работы преследовалась цель получения и всестороннего исследования иммуногенных свойств рекомбинантного' . вируса осповакданы, экспрессирувдего структурные белки вируса ВЭЛ (VH26) и оценки перспективности его использования в качестве вакцинного препарата против Венесуэльского энцефаломиелита; получение синтетических пептидов с антигенной активностью иммунодоминантного белка вируса ВЭЛ - гликопротеина Е2 и исследование их иммунохимичвских и иммуногенных свойств. Для этого решались следующие задачи:
-изучение способности VB26 к экспрессии структурных белков вируса ВЭЛ и индукции иммунного ответа в организме иммунизированных животных.
-исследование протективной активности VB26 при' различных способах иммунизации и инфицирования; зависимости протективного аффекта иммунизации от используемой - иммунизирующей дозы; 'стабильности встройки чужеродной генетической информации в геном вируса ОВ.
-исследование напряженности иммунного ответа, вызванного
VE26; определение влияния предварительной иммунизации организма
животных вирусом ОВ на иммунный ответ, индуцированный VE26..
-выбор участков гли-опротеива Е2 вируса "ВЭЛ, перспективных
для получения синтетических пептидов; получение пептидов, корреспондирующих аминокислотную последовательность . антигенно-значимых "районов гликопротеина Е2 вируса ВЭЛ и исследование их иммунохимических и иммуногенных свойств.
Научная новизна работы. В результате проделанной работы, впервые получен и исследован рекомбинантный вирус ОБ со встроенной к-ДНК копией 26S РНК вируса ВЭЛ (шт. ТРД). иммунизация лабораторных животных VH26 приводит к формированию иммунного ответа к вирусу ВЭЛ, иммунпзировакЕые VB26 животные обладает высоким уровнем резистентности к инфицированию летальными дозами вируса ВЭЛ. Впервые, для рекомбинантных штаммов вируса ОВ, экспрессирувдих структурные белки . вируса ВЭЛ, показана эффективность против аэрогенного инфицирования и способность к индукции защитного иммунного ответа при оральном (per оз) введении препарата. Показано, что предварительная иммунизация организма вирусом ОВ не влияет, отрицательным образом, нз развитие иммунного ответа к рекомбинантному вирусу VR26.
Получены пептиды, корреспондирующие последовательность иммунодоминантного белка вируса ВЭЛ- гликопротеина Е2 в районах 30-75 и 202-250 аминокислотных остатков (а.о.). Впервые показано, что участок 235-240 а.о. г.п.Е2 представляет, собой линейный эпитоп индуцирующий формирование антител перекрестно-реагирующих с вирусами ВЭЛ и ВсЭЛ.
Практическая ценность работы. В результате проведенных
исследований получен рекомбинантный вирус ОВ, экспрессируниий
структурные -белки вируса ВЭЛ. Иммуногенные свойства
рекомбинантного штамма свидетельствуют о перспективности
получения на его основе вакцинного препарата для мздииинской и
ветеринарной практики. Рекомбшантный штамм v?^6 депонирован в Государственной коллекции вирусных препаратов і1KB N 944).
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения и трех глав: обзора литературных данных (глава I), исходных материалов и осноеных методов (глава 2), результатов исследований и их обсуждения (глава 3), выводов и списка цити-руемой литературы (19? ссылок). Работа изложена на 190 страницах машинописного текста, включая 7 рисунков, 9 таблиц и 2 приложения