Введение к работе
Акту_альность_проблемы^ Интерес исследователей к изучению вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) в большой степени определяется тем, что к настоящему времени в мирз насчитывается более 10 миллионов лиц, инфицированная: БИЧ, из них приблизительно у 200 тысяч имеются выргханше клинические проявления СПИД (Horton R, 1993). По прргнозйм ЕОЗ на ближайшее десятилетие число серополохительных и больных СПИД будет продолжать расти во всех странах мира (Chin J. et al, 1991), поскольку до настоящего времени не существует достаточно эффективных средств лечения этогб заболевания. Вопрос о создании вакцины также остается весьма проблематичным (Osterhaus A. et al, 1992, Ward R.H.R, 1991).
Поиск эффективных лекарственных препаратов, создание вакцины, требуют фундаментального изучения ВИЧ: особенностей репродукции вируса на уровне клетки и организма, изучения механизмов взаимодействия вируса и клетки. Однім из подходов к решению этих задач может служить изучение особенностей размножения ВИЧ в культурах как первично-, так и хронически инфицированных клеток. Результаты таких исследований имеют также существенное значение и для разработки эффективных способов получения значительных количеств вирусных белков, необходимых для создания диагностических тест-систем.
Другим, не менее важным направлением, является поиск новых лекарственных препаратов, обладающих анти-ВИЧ активностью. Особенностью ВИЧ-инфекции является то, что не существует адекватных моделей инфекции на лабораторных животных (Letvln N.L, 1992) и поэтому первичный скрининг и подробное изучение механизмов действия перспективных препаратов возможно только на
культурах клеток. Одной из наиболее распространенных моделей скрининга противовирусных препаратов является оценка -их ингибирующэго действия на острую литическую инфекцию в перевиваемых культурах Т-лимфоцитов человека - МТ-4 и Н-9. Применение только этой модели ВИЧ-инфекции не позволяет исследовать ингибирующее действие препаратов на хроническую инфекцию, протекающую в клетках макрофагального ряда. Изучение особенностей репродукции ВИЧ-І в перевиваемых линиях, моноцитов/макрофагов может быть полезным при создании дополнительных моделей для скрининга противовирусных препаратов, способных обеспечить более адекватную оценку эффективности их действия.
Ц^ь_и_задачи исследования. Целью настоящей работы было
исследование особенностей репродукции ВИЧ-І в перевиваемых линиях клеток моноцитов/макрофагов и Т-лимфоцитов, сравнительный аналіз анти-ВИЧ активности азидотимидина и ряда его производных на различных моделях ВИЧ-инфицированных клеток.
ШїШ^J&QвaзщJЛJ^aкmчв^GкaяJiвШQCXh^aбq^u^ Получена уникальная хронически инфицированная ВИЧ-І линия перевиваемых моноцитов человека ГКВ 4005, продуцирующая инфекционные вирусные частицы в течение длительного непрерывного культивирования (230 пассажей более трех лет) без подсева неіпіфицированннх клеток. Разработан способ культивирования ВИЧ-І, заключающийся в сокультивировании клеток хронически инфицированной ВИЧ-І линии моноцитов ГКВ 4005 и перевиваемой линии Т4-лимфоцитов, позволяющий получать антиген с полным набором вирусспецифических белков. Изучена противовирусная активность 5'-фосфонатов азидотимидина и фтортимидина с различными типами остатков модифицированного фосфата в культуре клеток МТ-4, инфицированной
- З -ВИЧ-І. Показано, что исследованные соединения обладают значительно более низкой токсичностью для неинфицированных клеток, чем kZi. Установлено, что наиболее выраженным ингибирующим действием обладает 5'-карбоксифосфонат AZT, не описанный ранее. Показано, что азвдотимидин, фтортимидин и 5'-метилфосфонат азидотимидина не проявляют выраженного ингибирующего действия на репродукцию . ВИЧ-1 как в первичной культуре нестимулированных" моноцитов периферической крови здорового донора, инфицированной ВИЧ-І, так и в культурах клеток, хронически инфицированных БМЧ-І.
0$ьем_и_сщуктща_диссертацйи^ Диссерация состоит из: введения, обзора литературы (глава I), материалов и методов (глава 2), результатов и' обсуждения (глава 3), заключения, выводов и списка цитируемой литературы (148 ссылок). Работа изложена на 104 страницах машинописного текста, включает 9 рисунков и II таблиц.
Апрдбация_рабдты^ Материалы диссертации докладывались на конференции "Проблемы биотехнологии- иммунобиологических и гемотрансфузионных препаратов" (Новосибирск, 1988 г.), 1-ом Съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992), мевдународнсй конференции "AIDS, Cancer and Human retroviruses" (С-Петербург, 1992). По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ.
Работы по получению хронически инфицированной ВИЧ-І 'линии клеток ГНВ 4005 проводились совместно с сотрудниками лаборатории Карамова Э.В., Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Москва. Производные азидотимидина синтезированы в лаборатории Краевского А.А., Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН.
Автор выражает глубокую признательность Покровскому А.Г.,
їїлясуновой O.A., Куляндину С.А., Киселеву Н.Н., Казариновой Ф.С., Черных А.И., ФедакН.В., Сенькиной В.П., Кузиной П.М., Сафоновой С.А., Замятиной Т.К., Власкиной В.В., Спириной СВ.