Введение к работе
В последние годы большое внимание уделяется исследованиям, направлении!* на изучение так называемых малоизученных арбовнруснах инфекций, вызываемых главным образом вирусами, относящимися к семейству Ъ'уньявириле, и прежде всего представителями ceporpvnnu калифорнийского энцефалита (СКЭ).
Буньязируси СКЭ м Буньякзера вироко распространены so многих странах мира - Северной и Южной Америке, Европе, Азии п Африке. В сил наиболее распространенной инфекцией яплястся энцефалит Ла Кросс, также имеются сообщения о заболеваниях лелей, сиззашшх вирусами'ззйца беляка и Джеймстаун Каньон. О странах Центральной Епрогш яирохо распространены лихорадочные заболевания, этиологически связанные с вирусом Тя-гшш.
Результаты исследований Псесопзиого центра по изучению экологии, эпидемиологии и клиники малоизученных арбогнруских инфекций (п той числе буньявнрусных), проведенных в 1985 - 1991 гг. на базе Института вирусологии ии, Д.И.Ивановского рамп,' свидетельствуют об активной циркуляции на территории Европейсхой части России вирусов СКЭ и вируса Батан - представителя серогруппы буиьямвера. Значительная часть гаїде-\е::ных па территории России штаммов вирусов СКЭ (примы вирусов тяги-ня, Инко, зайца беляка) патогенна для человека.
дальнейшее изучение природных территорий, анлеиичігах в отношении вирусов СКЭ и Буиьямвера. предполагает использование, наряду с традиционными вирусологическими н серологическими методами, современных методов экспресс-индикации, идентификации и лпагаостикн guochssbshikix
-7.-
инфекций, в том числе метода твердафаового шшунаферментяогс анализа (К*А). Учитывая отсутствие конкретных рекомендаций по тактике использования И*А для диапюстическнх и эпидемиологических исследований в природных очагах буньявирусиых инфекций, возникла необходимость проведения исследований в отом направлении.
Таїаш образок, актуальность настоящей диссертации определяется полный отсутствие*! сведений по тактихе применения методов экспресс-ик-дикацйи, идентификации и диагностики инфекций, вызываемых вирусами СКЭ И Буньямзера, (в тем числе метода НФА), с цьлью обследования природных очагов буньявируских инфекций.
Цель настоящей работы заключалась в разработке эффективной тактики применения различных модификации К*А для обследования природних очагов буаьнвнруомх инфекций (на моделях вирусов комплексов Калифорнийского энцефалита и Буньяквсра). Основным критерием выбора тактики ИФА яалялось возможность ее внедрения в практическое здравоохранение.
для достижения поставленной цели необходимо било решить следующие задачи.-
изучить чувствительность и специфичность иммунофериентных тест-систем, приіотовлеиішх на основе антител к вируса»» тягиня (штамм "92*), Инко (KNt-3641), зайца Ссляка (оригинальный итамм), ла Кросс (прототишшй штаим), Батаи (МЫ Z122);
адаптировать к применить прямой вариант ИФА - метод 'двойных антител" для индихсции антигенов вирусов СКЭ и вируса Еатаи в суспензиях членистоногих перяноечнков;
адаптировать «олнфихашда пряного варианта ифа, основанную на принципа ''конкурентного анализа, а также две модификаций непрямого варианта ЯФа (с антигенам и иммуноглобулином, содержании антитела к ви-
- з -русу, ііа твердой фазе) с целью виявлення специфических антител к виру-сан С'/.Э и Батан в си-воротках крови экспериментально кі:$:іцироиг'<іт(х жк~ ьотнчх, практически здоровых людей и больных сезошичн лихорадочными заболслзииячи неясной зтиолаги;!;
пронести сравнительную опенку эффективности использования з условиях работы практических вирусологических лабораторнії непрямого я пряного IgM-чариантоп ИФА для проведения ла5ораторно-л:іаг:!сст;г:,гского обследования больных сезонкам»! лпхорадочтяш згіЗолевзішякл :івясной этнологии;
в эх'щерчиенталь'шх исследованиях оценить эффективность использования изученных ішнуїдарериентіїнх тест-слстси и адаптиропгшвдх иодк-ihrtcaum'r постановки н*л для индикации ;i идентификации вирусов СХ2 и вируса Натан, а также диагностики внзаваемых иин заболсианкн, в сравнении с традиционными вирусологический)! и серологическим)! тестами;
оценить возможность и эффективность использования апробированиях в лабораторном эксперименте модификаций J№A Аля темплексиих сбеле-лоиакнй природних очагов буньявнрусных инфекций на модели Тульской области России.
На основании изучения эффективности кспользт&няя различит* модификаций кфа для выявления анткгеноз пнрусоп ста к вируса Батак, и антител х ник, разработана рацкокольная тактика применения 1»А как самостоятельного теста для обследования природних очагоз буиьпакрусяых
нкфекцнй,
Епервое г>о>:азана возкоаность пркиемекия прямого варианта ИФА для киликашїи вирусов скэ в отдельных экземплярах комарои.
Впервые проведена сраыиптелькач сиенха зф^ехтьвизсти нольоолагшя эазлнчиих модификаций ифа для шкяления специфических икг^ноглобулииоч
классов "К' и "О* к вирусам скэ и юкрусу Батан.
Впервые И4А примечен г.ри экспериментальной химиотерапии инфекций, визвпииия змрусгми СКЭ, Показана его высохая чувствительность, специфичность и еффехтавдостъ использования в исследованиях подобного рада.
Вперше m территории тульсхой области России установлена активная циркуляция вируса Пяко. Выделено два m гамма вируса Инхо -LE1V-1230! та в UUV~i2304 Тл. Установлен достаточно высокий уровень яаыуккок прослойки населения к вирусам СКЭ к показано нарастание гуморального иммунитета к вирусам СКЭ с возрастом, характерное для эндемичной территории. Доказана роль вируса Тягиня в инфекционной патологии человека.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Результаты проведенной работы легли в основу разработок иммуио-ферментшх тест-систем для выявления вирусов Тягиня и Батаи, внедренных в практику Едравоохране»ш!>.
На основании полученных данных опубликованы кегодкческие рекоиек-> дацни по использованию 1№А для выявления виру сок СЭ в суспензиях членистоногих переносчиков.
В результате проведанной работы впервые на территория Тульской области устансалеиа активная циркуляция вируса инко (LEIV-1230I Тл; LEIV-1230* Тл), изучены иммуноструктура и гуморальный иммунитет населения к оуньяішрусаи, доказана роль вируса Тягиня в инфекционной патологии человека, эта исследования икеит теоретическое значение с точки зрения ойам'о рлі,о»ітия науки о прнродноочагошх инфекциях.
Разработана эффективная тактика специфической диагностики инфекций, вызванных енрусаин СКЭ, основанная на применении IgM-варианта НФА с использованием ингредиентов из отечественных нимуноферменткых тест-систем. Результаты апробации этого теста позволяют рекомендовать
- 5 -его для внедрения в практические лаборатории страны.
В результате проведенных исследований ІШ впервые бнл применен при экспериментально» химиотерапии ннфехций, вызванных вирусами СКЗ, с целью изучения противознруской актквностн химколрепаратон (в системах in vilro, in vivo) и контроля процесса антителообразовакия у контрольных н леченных препаратом уивотных. Полученные результаты позволяют рекомендовать ифл для широкого использования п экспериментальной хиии~ отерапни буньявкрусных инфекции.
НФА внедрен о практику работы вирусологической лаборатории тульской 05л сэс.