Введение к работе
1.1. Актуальность темы. На протяжении многих лет животноводство
всех стран мира, в том числе и России, несёт значительные экономические
потери от желудочно-кишечных болезней новорожденных телят. В основе
сложившейся неблагоприятной ситуации лежит целый ряд факторов, из
которых наиболее важными являются: содержание большого поголовья скота
на ограниченном пространстве, возникновение стрессов, усложнение
микробного и вирусного пейзажа в хозяйствах и комплексах, снижение
иммунитета. В этих условиях нередко возникают и быстро распространяются
инфекционные болезни, проявляющиеся в виде энтеритов животных.
Рота- и коронавирусы (РВ, KB) - занимают одно из ведущих мест в патологии желудочно-кишечного тракта новорожденных телят [1, 11].
Величина экономического ущерба при этих заболеваниях значительна и складывается из падежа телят, снижения мясной и молочной продуктивности, уменьшения привесов, выбраковки животных. Проведение своевременной и точной лабораторной диагностики является важным фактором в борьбе с этими инфекциями [13, 14].
В настоящее время при лабораторном исследовании рота-, коронавирусных инфекций широко использутся метод иммуноферментного анализа (ИФА). Быстрота получения результатов, воспроизводимость и автоматизированный учет реакции, возможность стандартизации условий постановки анализа делают этот метод наиболее эффективным и выгодным для массовых серологических исследований.
1.2. Степень разработанности проблемы. Вопросам разработки и
усовершенствования тест-систем ИФА для выявления антител к РВ и KB
посвящены работы ряда зарубежных авторов [5, 6]. Широкое распространение
получили модификации ИФА на основе ELISA. Losonsky G.A. с сотр. (1990)
разработали ELISA для определения уровня IgA и IgG, так как данные
иммуноглобулины не передаются от матери, а вырабатываются в ответ на
попадание ротавируса в организм, что дает возможность говорить о наличии
заболевания у новорожденных телят, обладающих пассивно приобретенным
4 иммунитетом в качестве IgG [8]. Lecce J.G. и сотр. (1982), Agrawal D.K. и сотр. (2002) методом непрямого ИФА (н-ИФА) определяли антиротавирусные антитела в молоке и молозиве коров, а также проводили оценку уровня колостральных антител у новорожденных телят с целью оценки иммунного статуса организма телят и изучения эпизоотической ситуации [4, 7]. В работе Myers L.L. и сотр. (1982) показана зависимость титров молозивных антител и антител в молоке коров от вакцинации живой модифицированной вакциной против рота-, коронавирусной инфекций КРС [9].
Многими зарубежными коммерческими фирмами (INGENAZA, IDEXX, Cypress, Bio X и др.) предложены тест-системы на основе н-ИФА для определения антител к РВ и KB в сыворотках крови при исследовании их в одном разведении. Поскольку данные наборы не всегда доступны, актуальным является создание отечественных тест-систем.
1.3. Цель и задачи исследований. Цель данной работы состояла в
разработке диагностических тест-систем на основе подготовленных штаммов
рота-, коронавирусов КРС для выявления антител к ним при проведении
серологических исследований. Для осуществления поставленной цели
необходимо было решить следующие задачи:
-
выделить и адаптировать полевые изоляты РВ КРС, циркулирующие на территории РФ, в культуре клеток;
-
изучить иммунобиологические свойства выделенных изолятов РВ КРС для возможного использования в качестве производственных штаммов;
3) отработать методы получения высокоочищенных концентрированных
препаратов антигенов РВ и KB;
-
разработать тест-системы на основе н-ИФА для определения антител к рота-, коронавирусам в сыворотках крови КРС методом одного разведения;
-
с помощью разработанных тест-систем провести исследования иммунного статуса поголовья КРС в хозяйствах РФ.
1.4. Научная новизна исследований. Выделен и адаптирован к культуре
клеток новый штамм РВ КРС «ТЕ87-ДЕП», на который получен патент на
5 изобретение. Разработаны отечественные тест-системы ИФА с применением в качестве антигенов штаммов РВ и KB, выделенных из хозяйств РФ, для выявления и количественной оценки специфических антител к ним при тестировании сывороток крови в одном разведении.
-
Практическая значимость работы. Для практического применения разработаны и утверждены директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» 5 методик и методических рекомендаций, которые используются в лабораторной практике.
-
Соответствие диссертации паспорту научной специальности. В диссертации приведены результаты исследований по выделению, изучению биологических свойств штаммов ротавируса КРС, разработке методов выявления антител к рота-, коронавирусной инфекциям КРС, их применению для изучения иммунного статуса поголовья КРС и оценки эпизоотической ситуации в хозяйствах, что соответствует пунктам 2, 3, 6, 7, 10 паспорта специальности 03.02.02. «Вирусология».
-
Апробация результатов работы. Материалы диссертации доложены и опубликованы в материалах Международных научно-практических конференций, посвященных 45-летию ФГБУ «ВНИИЗЖ» (Владимир, 2003 г.), 50-летию ФГБУ «ВНИИЗЖ» (Владимир, 2008 г.), в материалах конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины (исследования молодых учёных)» (г. Покров Владимирской области, 2009 г., ГНУ ВНИИВВиМ), а также на заседаниях ученого совета ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2008-2010 гг.
1.8. Публикации научных исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 8 научных статей, в том числе 4 работы в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ. 1.9. Основные положения, выносимые на защиту.
Выделение РВ КРС из проб патологического материала в перевиваемой культуре клеток;
получение диагностических препаратов антигенов РВ и KB КРС;
- использование разработанных тест-систем на основе н-ИФА для
выявления и определения уровня антител к РВ и KB КРС при
тестировании сывороток в одном разведении;
- результаты их применения для серологического исследования
сывороток крови КРС, поступивших в ФГБУ «ВНИИЗЖ» в период 2007-
2011гг.
1.10. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 133 страницах, проиллюстрирована 22 таблицами и 15 рисунками. Список литературы включает 187 источников, в том числе 159 - иностранных.
