Введение к работе
Актуальность проблемы
Острые кишечные инфекции из-за их широкой распространенности составляют значительную проблему здравоохранения. Однако большинство случаев этих заболеваний (до 60-80$) остается этиологически нерасшифрованными, хотя клиническое и эпидемиологическое изучение свидетельствует об их инфекционной природе (Дроздов С.Г. с соавт., 1982). Применение современных методов диагностики позволило обнаружить целый ряд неизвестных ранее вирусов и установить их этиологическую роль при гастроэнтеритах. Как показали многочисленные исследования отечественных и зарубеяных авторов, проведенные.в последние годы, ведущая роль в этиологии кишечных инфекций принадлежит рогавирусам Modes //., 1977; /с!олпо 7.' &У'о^ 1978; Slei'hhoff М, 1978, 1980; Дроздов С.Г. с соавт., 1982 и др.).
Для ранней лабораторной диагностики ротавирусного гастроэнтерита предлойен ряд методов, из них наибольшее распространение получили электронная микроскопия (Ш) или ишуноферментный анализ (ША) (Дроздов С.Г. с соавт., 1982; БукринскаяА.Г. с соавт., I98S). Однако эти методы в настоящее врегля мало доступны практическому здравоохранению, что не позволяет диагностировать заболевание и проводить рациональное лечение, изучать особенности эпидемиологии инфекции и планировать профилакигеские мероприятия.
В связи с этим разработка и внедрение простых в исполнении, быстрых и надежных методов лабораторной диагностики этого заболевания являются актуальной задачей. Среди известных методов диагностики вирусных инфекций данным требованиям полностью удовлетворяет реакция непрямой гемагглвэптации (РИГА) - высокочувствительный и специфичный тест, пригодный для индикации возбудителя
непосредственно в исследушсм материале- Главное ее достоинство - высокая чувствительность: по атому показателю ШГА превосходит методы РСК, двойной и радиальной ишунодийфузш и близка к методам нового поколения - ишунос&ерыентноцу и радиоишунно-му (-Носков Ф.С, 1985). Выявление вирусных антигенов в ШГА занимает всего 2,5-3 ч от момента доставки пробы клинического материала, что также выгодно отличает ее от других, более про-долнительных по времени постановки методов исследования.
Цель работы
Целью наших исследований была разработка ротавирусного эри-тропитарного антптельного диагностикума и изучение возмояности его применения в ЕНГА для лабораторной диагностики ротавирусного гастроэнтерита.
Основные задачи исследования
-
Быбор методик и отработка оптимальных условий получения лабораторных серий эритроцитарного ротавирусного диагностикума.
-
Изучение свойств полученного препарата и разработка методов его контроля.
-
Изучение диагностической ценности разработанного диагностикума для быстрого вшвдения ротавируса у больных гастроэнтеритом.
-
Изучение диагностической ценности препарата для серологической диагностики ротавирусной инфекции.
-
Применение разработанного диагностикума для изучения распространения ротавирусной инфекции среди больных гастроэнтеритами детей раннего возраста.
Научная новизна
- Впервые в качестве иммунного сырья для получения ротави-русных диагностических препаратов предлойена иммунная асцитная
жидкость (HAS) белых крыс.
Вперше на основе иммуноглобулина, полученного из ЙАЖ, разработан високоактивний и стабильный препарат для лабораторной диагностики ротавирусннх заболеваний людей и животных - диагностику*! эритропдтарши ротавнрусный тдмуноглобулинсвый сухой для РИГА.
Установлена высокая частота заболеваний ротавирусной этиологии у больных остригли кишечными инфекциями детей раннего возраста в г. Ростове-на-Дону.
Практическая ценность и внедрение
Показана высокая диагностическая ценность РИГА с полученным диагяостикумом при выявлении ротавирусов у больных.
Установлена возможность применения диагностпкуш в РТЙГА для выявления и титрования антител к ротавирусу в сыворотках .' крови больных и реконвалесцентов.
На основании проведенных исследований разработана и согласована с ШСК имЛ.А.Тарасевича "Инструкция по изготовлению и контролю диагностЕкума эригроштарного ротавирусного шмуногло-булинового сухого для РИГА". Получено разрешение Комитета вакцин и сывороток МЗ СССР 01 4 от 10.08.88 г.) на разработку технологии промышленного производства препарата.
В Ростовском НИИ эпидемиологии, микробиологии, паразитологии и гигиены организовано экспериментальное производство, что позволило разработать проект временной фармакопейной статьи (ВИЗ) и экспериментально-производственный регламент СЭПР).
Основные положения, выносимые на защиту
- Обоснована возможность использования ИАЖ белых крыс про
тив ротавируса в качестве высокоактивного ишунного сырья для
получения диагностических препаратов.
На основе ИАІ получен стабильный и специфичный диагности-кум эритроцитарный ротавирусный ишуноглобулиновый сухой, позво-ляющий выявлять 2,4-10 - 2,2-10 частиц гомологичного вируса в I мл.
Применение даагносгикума позволило выявить широкое распространение ротавярусного гастроэнтерита среди больных острыми кишечными инфекциями детей раннего возраста в г. Ростове-на-Дону.
Апробация работы
Результаты исследований, вошедшие в диссертацию, были доложены и обсуждены на 5 научных конференциях союзного и регионального значения. (I98S-IS88 гг.). Апробация завершенной диссертационной работы прошла в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР в марте 1990 г.
Публикация материалов исследования
По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ.
Структура и объем работы
Диссертация состоит из введения, обзора литературы (2главы), собственных исследований (4 главы), заключения и выводов. Указатель литературы содержит 181 наименование отечественных и зарубежных источников.
Работа изложена на 139 страницах машинописного текста и иллюстрирована 20 таблицами и 9 электроннсмикроскопическиыи фотографиями.