Введение к работе
Актуальность проблемы. Вирусный гепатит А - олно из самых распространенных вирусных заболеваний человека как в СНГ так и з некоторых зарубежных странах. Заболеваемость вирусными гепатитами з СНГ в последние годы регистрируется на уровне около 1 млк слт, -чаев а год. причем основной вклад в заболеваемость вносит вирусный гепатит А /до 80-9035/. До последнего времени профилактика гепатита А базировалась в основном на мероприятиях санитарно-гигиенического характера, а также пассивной иммунизации с использоваяи- "
длительное время трудности с разрасаткук методов диаггі.^.;;;.;: и изучения вируса гепатита А - этиологического агента этого заболевания были связаны с отсутствием, адекватных экспериментальных моделей репродукции вируса в культуре клеток. В 197Э году появились первые публикации, описывающие размножение ВГР. in vitro и с тех пор началось изучение вируса, з том числе адаптация изолятов ВГА к размножению в культурах клеток, создание систем репродукции вируса, изучение его свойств и разработка диагностических препаратов на основе культурального БГА.
К моменту начала наших исследований /1987 г./ з стране отсутствовали конкурентноспоссбные с зарубежными аналогами диагностические тест-системы выявления маркеров БГА. В России не било известно о быстрорастущих цитопатогенкых штаммах ВГА. не бале в наличии методов определения нейтрализующих свойств анти-ЕГА иммунных сывороток.
Цель и задачи исследования." "
Основная цель исследований - разработка научных основ изготовления современных препаратов для диагностики гепатита д.
Для выполнения поставленной цели'необходимо'было-реиить еле- -дующие задачи:
-
Разработать технологию получения антигена ВГА с количествах, достаточных для последующего масштабного производства:
-
Получить высокотитражные специфические поли- или моноклинальные сыворотки.
-
Выделить штаммы ВГА от больных, адаптировать их :<: кул::т;-~ рам клеток и провести скрининг их биологических свойств.
-
Изучить биологические и генетические характеристики высе-корепродуктивных штаммов ВГА.
-
Разработать метод определения нейтрализующих свойств специфических сывороток.
-
Разработать' и апробировать, иммуноферментные тест-системы для диагностики гепатита А. '
Научная, новизна. Впервые выделен отечественный штамм ВГА. обладающий высокой репродуктивной' активностью и цитопатическим /бляшкообразувшм/ действием ь культуре клеток. .Подробно изучены его биологические характеристики и ростовые свойства, на основании чего он рекомендован в качестве эффективнг-го производственного штамма при разработке и выпуске препаратов для диагностики гепатита А. Впервые в отечественной практике разработан метод опрр-деления титра нейтрализующих.антител анти - ВГА иммуных сывороток с использованием цитопатических свойств штамма МБ-7 ВГА.
Практическая значимость и внедрение результатов исследований в практику. Разработанные на основе культурального антигена иммуноферментные тест-системы для выявления маркеров инфекции гепатита А нашли широкое распространение не только в лабораторных исследованиях, но и в практическом здравоохранении. Комплекты" для определения анти-ВГА иммуноглобулинов класса М и анти-ВГА антител освоены в условиях промышленного производства и используются на практике! Разработана Методика, основанная на. использовании .прямой реакции нейтрализации в культуре клеток для изучения нейтрализующих сБой'ртв сывороток после'вакцинации и введения иммуноглобулинов. Внедрение вышеназванных препаратов в практику здравоохранения повлекло за собой более- эффективную диагностику гепатита А::, следовательно, своевременную изоляцию., а также более правильную тактику лечения больных.'
Разработаны и утверждены следующие нормативно-технические документы:
-
ЭКСПЕРИЖНТАЛЬНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ РЕГЛАМЕНТ. 373-92 -Тест-система , иммуноферментная для выявления .иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита А /Вектогеп A-IgM/. .
-
ВРЕМЕННАЯ ' ФАГ'АКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ- ВФС 42-331ВС-92. Тест-система иммуноферментная для выявления иммуноглобулинов класса М к 'Вирусу гепатита А /Вектогеп A IgM/.
-
ИНСТРУКЦИЯ по применению тест-системы . иммуноферментной для выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу гепатита.А /Вектогеп A-IgM/
-
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ РЕГЛАМЕНТ -. Тест-систо-ма иммуноферментная для выявления антител к вирусу гепатита а /Вектогеп А-антитела/.
-
ВРЕМЕННАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ-ВФС 42- ' Тест-система иммуноферментная для выявления антител к вирусу гепатита г-. /Еектсгеп А-антитела/, . .
с. ИНСТРУКЦИЯ по применению тест-системы иммуноферчентнсй для выявления антител к вирусу гепатита А.
В коллекции Государственного института стандартизации 'и '
севнча депонирован под' я 2:3 ьтаим М5-? sjipyca гепатита А. внл^-' ленный от больного гепатитом А человека и адаптированный к размножению в перевиваемых культурах клеток почек обезьяны.
Получен патент-РОССИИ "Штамм Virus hepatitis A hominls для "приготовления вакцинных и диагностических препаратов"..
Апробация работы. Представленные в диссертации результаты
были доложены на различных конференциях и совещаниях, в .том числе
на і отраслевой конференции-конкурсе .молодых ' ученых/Кольцове.
1988г/. республиканской научно-практической конференции "Проблемы
биотехнологии иммунобиологических и гемотрансфузиокных препара-
тов"/Новосибирск. 1S88 г/.',отраслевом советник "Биотехнология
вакцин и лечебно-профилактических препаратов"/Новрсибирск. 198Э
г/, всесоюзной конференции "Современные направления создания ме
дицинских диагностикумов''/Москва. І990 г. /, межведомственной
конференции "Изучение и профилактика особо опасных висусных ин-
Фекций "/Кольцово, "1993 "г:'/.'" "' ~ —
ОСТОйТ'ИЗ' 5Е5"'"'
Структура работы. Диссертация