Введение к работе
Актуальность темы
Коневодство в России и странах СНГ имеет важное значение как одна из отраслей сельскохозяйственного производства. При современном ведении коневодства, когда основное внимание уделяется разведению особо ценных пород лошадей, первейшей задачей является предохранение их от инфекционных заболеваний, которые наносят значительный экономический ущерб и существенно влияют на селекционную работу.
К числу наиболее распространенных и опасных вирусных болезней лошадей относятся герпесвирусные инфекции, в том числе ринопневмония (вирусный аборт). Заболевание характеризуется множественностью форм клинического проявления . (аборты у кобыл, массовое респираторное заболевание жеребят, а также нервная и генитальная формы), сложным патогенезом и достаточно универсальным механизмом передачи возбудителя (контактно, аэрогенно, трансплацентарно).
Возбудителем ринопневмонии является герпесвирус лошадей тип 1 (ВГЛ1), принадлежащий . к роду Varicellovirus подсемейства Alphaherpesvirinae семейства Herpesviridae (Francki с соавт.,1991). В отличие от ряда других герпетических вирусов, поражающих животных и человека, ВГЛ1 характеризуется значительной гетерогенностью по ряду свойств.
Впервые о неоднородности популяций возбудителя сообщили Shimizu с соавт. в 1959 году, отметив, что существует 2 подтипа вируса -респираторный и фетальный - в соответствші с их тропизмом к респираторным и гешпальным органам. Практически с этого времени ведется работа по изысканию маркеров для дифференциации респираторных и фетальных штаммов вируса. В последние годы для изучения вируса
ринопневмонии лошадей используют методы молекулярной биологии и биохимии, основанные на анализе состава генома вируса, и в частности, рестрикционный анализ вирусной ДНК.
Явные различия между этими двумя вирусами позволили сделать вывод о том, что фетальные и респираторные штаммы являются самостоятельными типами (Studdert с соавт.,1981), и с 1991 года подтипы 1 (фетальный) и 2 (респираторный) ВГЛ1 были официально переименованы в ВГЛ1 (вирус аборта лошадей) и ВГЛ4 {вирус ринопневмонии лошадей) соответственно (Francki с соавт., 1991). Оба вируса иммунологически и антигенно весьма близки, однако, заболевания, вызываемые ими, различаются по эпизоотологическим данным.
В связи с этим, изучение генома эпизоотических штаммов вируса ринопневмонии лошадей, находящихся в активной циркуляции в последнее время на территории страны, является весьма актуальной задачей с разных точек зрения: выяснения некоторых вопросов патогенеза и иммуногенеза инфекции, идентификации штаммов, отбора наиболее перспективных штаммов для их использования в качестве производственных при разработке диагностикумов и вакцин нового поколения.
Цель и задачи исследования
Целью исследований являлось: сравнительное изучение структуры генома эпизоотических штаммов ВГЛ1, выделенных в последнее время в ряде регионов страны, выяснение возможной изменчивости популяции этогс возбудителя, отбор наиболее перспективных вирусов для разработки инактивированной вакцины.
Исходя из поставленной цели, необходимо было решить следующие задачи.
і. Изучить основные биологические свойства (инфекционность, способность размножаться в различных культурах клеток, антигенные свойства) эпизоотических штаммов герпесвирусов лошадей, выделенных из абортированных плодов и органов дыхания жеребят.
-
Изучить структуру генома эпизоотических штаммов герпесвируса лошадей методом рестрикционного анализа ДНК и провести их идентификацию.
-
Основываясь на данных рестрикционного анализа, отобрать наиболее типичный штамм для конструирования инактивированной вакцины.
-
Изготовить лабораторные серии вакцины и испытать ее в коневодческом хозяйстве.
Научная новизна исследования
Изучена структура генома эпизоотических штаммов герпесвирусов лошадей, выделенных в различные годы в России и бывшем СССР. На основе полученных методом рестрикционного анализа ДНК данных проведена идентификация вирусов. Установлено, что в популяции лошадей на территории страны циркулируют вирусы герпеса лошадей 1-го и 4-го типов. Причем, доминирующее положение занимает вирус 1-го типа -возбудитель массовых абортов у кобыл и респираторной инфекции у жеребят.
Выявлены особенности изменения популяции ВГЛ1 на основе изучения его генома.
Впервые в России выделен и идентифицирован аденовирус лошадей.
Практическая значимость исследований
Основываясь на данных рестрикционного анализа вирусной ДНК, вдентифицированы эпизоотические штаммы герпесвирусов лошадей 1-го и 4-го типов, аденовирус лошадей, что имеет практическое значение при планировании противоэпизоотических мероприятий.
Из числа штаммов ВГЛ1 отобран наиболее перспективный штамм (учитывая направленность изменений популяции этого вируса). Отобранный штамм использован для разработки двухвалентной вакцины против ринопневмошш и гриппа лошадей.
Разработана и испытана в коневодческом хозяйстве ішактивироваїшая вакцина против ринопневмошш и гриппа лошадей.
Показано, что при тпраназальной апшшкашш ішактивпрованного вируса достигается выработка секреторного иммунного ответа на ВГЛ1 и сенсибилизация клеток иммунной системы, ответственных за гуморальный ответ, что способствует получению более выраженной реакции сывороточных антител при парентеральном введегаш вакцины. На основании этого предложена схема иммунизации новорожденных жеребят против ринопневмошш.
Материалы диссертации использованы при составлении научно-технической документации (НТД) на охпаггао-тюмышленное производство вакцины.
Публикация научных исследований
По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, 1 находится в печати, получено 1 авторское свидетельство.
Апробация работы
Материалы, вошедшие в диссертацию, доложены на Всесоюзном
:импозиуме «Биохимия сельскохозяйственных животных и
Іродовольственная программа» в Киеве в 1989 г., на заседании Московского пделения Всесоюзного биохимического общества на кафедре биохимии МВА ім.К.И.Скрябина в 1990 г., на XXIV-м Всемирном ветеринарном конгрессе в Зразилии (Рио де Жанейро) в 1991 г., на 7-ой Международной конференции го инфекционным болезням лошадей в Японии (Токио) в 1994 г., на XXV-m Всемирном ветеринарном конгрессе в Японии (Йокогама) в 1995 г., на 2-м Международном Дубайском симпозиуме по изучению лошади в О.А.Э.
Дубай) в 1997 г., на 5-м Конгрессе всемирной ветеринарной ассоциации по ізучению лошади (WEVA) в Италии (Падуя) в 1997 г. и на 8-ой Международной конференции по инфекционным болезням лошадей в О.А.Э.
Дубай) в 1998 г.
Структура и объем работы
Материалы диссертации изложены на 143 страницах машинописного екста и состоят из следующих разделов: введение, обзор литературы, ттериалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение іезультатов, выводы, практические предложения, список литературы и риложение. Список литературы содержит 205 отечественных и иностранных аучных источников. Диссертация иллюстрирована 4 таблицами, 10 ютографиями и 21 рисунком.