Введение к работе
Актуальность проблемы. В настоянеє вреия известно не менее 14 вирдсов калифорнийской серогруппы (КСГ) (род Bunyavirus, сей. Bunyaviridae). Они распространены в Северной и Югной Америке, Европе, Азии и Африке. Широкое распространение вирдсов КСГ определяется их выраженной экологической плас-тичностьп, которая в свои очередь связана с эффективности феномена трансовариальной передачи вирдсов д комаров переносчиков.
Восемь вирдсов грдппы известны как возбудители заболеваний человека. Наибольаее эпидемиологическое значение имепт энцефалит Ла Кросс, энцефалит Даеймстаун Каньон, лихорадки Инко и Тягиня.
На территории Российской Федерации и стран СНГ установлена активная, а в некоторых районах одновременная циркуляция вирдсов Тягиня, Инко и зайца беляка, а также своеобразных в антигенной отновении вариантов. На протяяении последних 10 лет в отделе экологии Инститдта вирусологии им.Д.И.Ивановского было выделено 155 нтаииов вирдсов КСГ, главным образом из комаров, собранных в различных ландвафтно-кливатических зонах Российской Федерации. Многочисленные нтакгш были выделены также в лабораториях Казахстана, Таджикистана, Армении, Азербайдяана и других стран СНГ, Восточной и Западной.Европы, СІА и Канады.
Сццествувчая классификация вирусов КСГ, основанная на изучении их взаимоотношении в различных серологических реакциях, была предлоаена Ч.Калиаерон в 1983 годд. В течение последующих лет были получены новые данные по антигенной характеристике типов.' подтипов вариантов и втамыов, установлена внрааенная вариабельность вирдсов и птамыов вирдсов КСГ. В
этой связи актуальность теиы диссертационной работы определяется: аироким распространением вирдсов КСГ, их вахной ролью в патологии человека, антигенной вариабельностью вирусов и необходимость» иодификации существующей классификации, значениеи таксономии вирдсов для реиения вопросов этиологии, специфической диагностики и эпидемиологии вызываемых ими инфекций.
Цель и задачи исследования.
Цель настоящей работы заключалась в соверяенствовании антигенной классификации вирдсов КСГ и детальной серологической идентификации малоизученных втаимов этой группы, выделенных в течение 30 лет в разных странах Европы и Азии.
Конкретные задачи исследований вклвчали:
подбор представительной коллекции прототипных и налоизу-ченннх итаыиов вирдсов КСГ;
получение специфических антигенов и ииауноасцктнвх пид-костей;
выбор оптикал&ных серологических методов исследования;
' - определение антигенных связей ыепду кзвестншш вирусами КСГ несколькими серологическими кетодаи-л СРСК, КФЙ, реакция нейтрализации, лантанидная ийщпгофлзсресценфга);
серологическая идентификация иалризученнах втаицов;
определенна чувствительности и специфичности истода лантанидной ігааунофлЕоресценцші, возїіоеностіі нспользопания этого метода для антигенной классификации, идентификации вирусов КСГ. их индикации в комарах;
анализ полученных результатов, их интерпретация в сравнении с данными литератцры.
Научная новизна работы.
На основании изучения антигенных взаимоотношений незду 9 известными вирусами КСГ с помощьа комплекса методов, установ-лен факт наибольпего антигенного родства вирцса Инко вирусам Дяєймстаун Каньон и Кейстон (тип Мелао). Лантанидная имыдноф-лиоресценция (ЛИФА) и метод флюоресцирующих антител (МФЙ) были впервые применены для издчения вирдсов КСГ. Показано, что НФА выявляет группоспецифические реакции,а метод ЛИФЙ - вирусспе-цифические; метод ЛИФА характеризуется высокой чувствительностью, сравнимой с методом выделения вирдсов КСГ в культуре клеток СПЗВ. По данным ЛИФА выявлены четкие отличия между вирусами Тягиня и Лумбо, Ла Кросс и зайца беляка, которые ранее рассматривались как антигенные варианты. Встановлено, что наи-лучвини возыоаностями для дифференциации и идентификации птам-аов и вирдсов КСГ обладаит реакция нейтрализации и лантанидная имиднофлворесценциа.
Произведена серологическая идентификация 26 малоизученных нтааиов вирусов КСГ, выделенных в различных регионах Евразии. 15 нзолятов (из Финляндии, Чехословакии, Армении, Азербайдза-на, Таджикистана и Казахстана) являются птаммами вируса Тягиня, хотя и обладаит внраяенной вариабельностьш по отнопениа к другий вирусам КСГ. йтаммы LEIU-8545. LEIU-12812 (из Карелии и Тверской области соответственно). LEIU-18677 Як и LEIU-18726 Зк (из Якутии) представляют собой варианты вируса зайца беляка, Втаыиы LE1U-21303 (из Красноярского края), LEIU23268 и LEIU-22981 (из Тюмени) идентичны прототипному атамму вируса Инко. Своеобразными антигенными характеристиками обладают атаиии LEIU-20243. LEIU-20245. LEIU-20255 и LEIU-20294 (из Яльановскои области), близкородственные или идентичные друг
другу. Очевидно они представляют новый, ранее неизвестный вирус КСГ.
При индикации вирусспецифических антигенов в инфицированных комарах было установлено, что метод ЛИФА приближается по чувствительности к методу выделения вирусов КСГ в культуре клеток СПЭВ и значительно превосходит чувствительность иммуно-ферыентного теста; в случае обследования конаров, зараженных родственными вирусами КСГ (при моно-инфекции) этим методой, возможна одновременная индикация и идентификация инфицирувцих агентов; при "смеванной" инфекции идентификация возиоенэ только на уровне серокоыплекса.
Практическая ценность работы.
Коллекция лаборатории биологии и индикации арбовпрусов пополнена 32 штаыканк вирусов КСГ, выделенными рядом авторов в различных странах Европы, Лыерики, Азии и Африки.
На уровне лабораторных разработок впервые получены повыв выеслочусствитольшс: тєст-систєніі дла ставленій антигенов к быстрой идентификация стак-ов и вирусов КСГ нотояог, лаптанид-ііои иныунофлаоресценции.
На основании полученных данных ыетод /П!Фй, как сисоно-
8 "
чувствительный, специфичный ;; oi:cneccH'j;j, рекомендуется так::о
для индикации и идентификации вирусов КСГ в коиара::.
Основные половения. выносимые на задиту
1. С поиоцьи комплекса методов СРСК. Ш, РН, ИФА и ЛИФА) подтверздено существование в пределах серогруппы Калифорнийского энцефалита трех основных типов (вирусов): калифорнийского энцефалита, Иелао и Тривиттатус. Зстановлен Факт наибольвего
антигенного родства вируса Инко (тип калифорнийского энцефалита) вирусам Дзеймстаун Каньон и Кейстон (тип Нелао).
-
Наилучиими вознояностями для дифференциации вирусов и идентификации атаииов вирусов КСГ обладаит реакция нейтрализации и лантанидная икиунофлворесцснция, а реакция связывания коиплеаента и метод лворесцирувчих антител выявляет группос-пецифические связи иеаду этими вирусами.
-
При серологической идентификации 25 малоизученных зтаммов вирусов КСГ установлено, что ІЗ изолятов (из Финляндии, Чехословакии, Армении, Азербайдгана, Тадзикистана и Казахстана) являптся итаимзми вируса Тягкня, 4 изолята (из Карелии. Якутии, Тверской области Российской Федерации) - нтаы-иани вируса зайца беляка, 3 изолята (из Тиыени и Красноярского края Российской Федерации) - птаниааи вируса Инко. Своеобразными антигенными характеристиками обладаит 4 изолята из 9ль-яновской области, которые очевидно представляит не известный ранее вирус КСГ.
-
їїотод ЛІІ0Й является перспективний з плане усовершенствования лабораторной диагностики вирусов КСГ.ийФи тест-систе-ин на основе поликлональннх антител для знявления антигенов вирусоз КСГ более чей на порядок превнваат чувствительность аналогичных Ш тест-систем. Этод иетод иозет успезно использоваться для индикации вирусов КСГ в зарааеиннх комарах с одновременной идентификацией иифицируюцего агента.
Апробация работы.
Апробация работы состоялась на заседании Совета по предварительной экспертизе диссертационных работ по медицинской вирусология при Институте вирусологии им.Д.И.Ивановского РАИН
30 мая 1994 года. Натериалы работы долоаены на конференции молодых ученых в НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского РАМН в 1993 годд, представлены на научной конференции, посвященной 70-летии Санкт-Петербургского НИИ эпидемиологии и микробиологии им, Пастера в 1993 году.
Публикации.
По теме диссертации опубликовано 3 печатные работы.
Объем и структура диссертации.